Способ получения культуральной вакцины против контагиозной эктимы овец и коз Советский патент 1982 года по МПК C12N7/00 A61K39/02 

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КУЛЬТУРАЛЬНОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ КОНТАГИОЗНОЙ ЭКТИМЫ ОВЕЦ И КОЗ Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к получению вакцинных препаратов. Известен способ размножения и накопления вакцинного штамма против крнта- гиозной экткмы овец и коз, осуществляю щийся на первично трипсинизированной культуре почки плода овцы, причем вирус содержащая культуральная жидкость применяется в качестве вакцины 11 Прививаемость и реактогенность вакцин, приготовленных на культуре клеток почки овцы, слабая и не обеспечивает иммунитета достаточной напряженности. Целью изобретения 51вляется повышени иммуногенной активности вакцины. Для этого в качестве клеточного субстрата для размножения вируса используют культуру клеток кожи эмбриона овцы. Сбор вирусного материала проводят поэтапно: вначале через 72-80 ч, а затем через ЗО-36 ч последующего раз- множения вируса в исходном клеточном субстрате. П р им ер , Для изготовления куль- туральной вирус- акшшы из аттенунрованного штамма используют первичную однослойную культуру ткани, выращенную в 1,5 л матрасах. Перед заражением выросшую культуру клеток просматривают под малым, увеличением микроскопа и отбирают матрасы с полным монослоем без признаков спонтанной дегенерации. Из матрасов с до юкачественной культурой сливают ростовую питательную среду и вносят в каждый матрас по 5 л вируссодержащего материала. Затем матрасы оставл5пот для контакта клеток с вирусом на 2 ч при комнатной температуре. После контакта в каждый .матрас с зараженной культурой вносят 200 мл поддерживающей среды и заражен}1ую культуру инкубируют при 36,5±5°С,Через 5 суток после заражения матрасы просматривают под малым увеличением микроскопа и при

иагогчии характерных питопатических изме.ений у 85-60% клеток, вируссодержа- шая жидкость сливается в стерильные бутылки и подвергается контролю на отсутствие контаминации посторсмней микрофло рой, безвредность, иммуногенность и другие контроли, пр)еъявляемые к вакдинным препаратам.

С целью повышения выхода вакционног вируса и снижения себестоимости препарата предложен метод поэтгшного сбора урожая вируса контагиозной эктимы овец в клеточных культурах. В экспериментах бвпо вьшвлено, что вирус контагиозной эктимы овей, находясь в культуральной жидкости при 37, инактивируется через 48 ч на 9О%. При заражении клетки культуры ткани инфицируются неодновременно и вирус накапливается в культуральной жидкости по мере поражения клеток. С цетью сохранения вируса от инактивации и увеличения выхода продукции с матрасной культуры, при поражении 75-8О% клеток, что наблюдается через 72-8О ч инкубации, сливали культуральную жидкость из выраженной культуры ( I урсм жай) и вновь заливали такое же количество поддерживающей среды и продолжали инкубировать при таких же условиях Через 36 ч с этих культур при 10О%ном поражении клеток сливали второй урожай вакшшьи Титр вакцины I и М урожая при этом был равным и составлял от 6,5 до 7,0 , Иммуногенность и прививаемость обоих урожаев одинакова.

Таким образом, поэтапный сбор вакционного штамма вируса в зараженной культуре клеток кожи плода овцы повышает общий выход вакцины в два раза при сохранении иммунобиологических свойств вакцинного штамма.

Формула изобретения

1.Способ получения культуральной вакцины против контагиозной эктимы овец и коз, включаклций выращивание клеточного субстрата, последующее размножение вируса и сбор вирусного материала, отличающийся тем, что, с целью повышения иммуногенной активности вакцины в качестве клеточного субстрата для размножения вируса используют культуру клеток кожи эмбриона овцы.

2.Способ по п. 1, о т.л и ч а ю щ и и с я тем, что сбор вирусного материала проводят поэтапно: вначале через 72-80 ч, а затем через 30-36 ч последующего р1азмножения вируса в исходном клеточном субстрате.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Бекембаев Т. Б., Алиев Э. А., Омуралиев А. О., Иманов Э. Д,, Берднбаев Г. Д., Салицинов Б. С. Сравнительн ш йлунологическая эффективность пяти ва фин цротив контагиозной эктимн овец. Новое в ветеринарной науке , Фрунзе, 1974, с. 88-94.