Способ выявления сосудов гемоциркуляторного русла Советский патент 1980 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для морфо-функционального изучения гемато-гистиоцитарных барьеров и транскапиллярного обмена органов и тканей Е физиологических условиях, также для морфологической диагности ки препатологических и патологических процессов различного генеза, связанных с изменением обмена, стру туры и функции гемомикроциркуляторного русла. Известен способ выявления сосудов гемоциркуляторного русла путем приготовления срезов в криостате с последующим определением активности аденозинтрифосфатазы., Однако известный способ не обеспечивает высокой точности. Целью изобретения является повыш ние точности способа. Эта цель.достигается тем, что после определения активности аденозинтрифосфатазы производят окргшива ние срезов пикрофуксином в течение от 4.до 7 мин и по структуре базаль ных мембран определяют сосуды гемоцирку.пяторного русла. Способ осуществляют следукяцим образом. Из исследуемого кусочка ткани (биопсийный, экспериментальный или секционный материал) без предвари,тельной фиксации в криостате или на замораживающем микротоме изготавливают серийные срезы то.л1Циной 10 мк и монтируют их на чистые обезжиренные и)предварительно охлажленные предметные стекла. Срезы подсушивают На воздухе при комнатной температуре в течение 8-10 мин. Инкубацию срезов проводят в термостате при в течение 45-60 мин а инкубационной среде следуквдего состава:конечная концентрация 20 мл 125-мг% АТФ (двунатриевая соль) 8,3-10 20 мл 0,2 М трис-НС буфера рН 7,2 8,0-10 3 мл 2% раствора РЬ(МОз)23,6-10 5 мл 0,1 М раствора ,7-10 2 мл дистиллированной воды

Тщательно промывают в дистиллированной воде. Затем обрабатывают 1%ййм в&днамраствором желтого сульфида аммония в течение 1 мин. Споласкивают в дистиллированной воде. Фиксируют срезы в 10%-ном растворе нейтрального формалина в течение 5-10 Мин. Посйе этого промывают в дистилрированной воде в течение 1-2 мин. Обрабатывают пикрофуксином следукяцего состава: 10 частей насьвценного на холоде водного раствора пикриновой кислоты и 1 часть 1%-ного водного раствора кислого фуксина - в течение 4-7 мин. Быстро обезвоживают в спиртеV просветляют в ксилоле и эа ключают в канадский бальзам.

Эндотелий сосудов гемомикрсциркуляторного русла приобретает различнее оттенки коричневого цвета в за-, исйМости от количества конечного продукта реакции, т.е. от активности аденозинтрифосфатазы; базальные мем6palElf bbc OB и волокна соединительной ткани воспринимают красные тона, а при нару иении химизма коллагена ра:зйичныё переходные оттенки от красйого, через оранжевый к желтым тонам Параллельно выявляется активность аденозинтрифосфатазы перицитов и Кле;точных элементов периваскулярнбй соединительной ткани.

Результаты гистохимической реакйи и бценивают количественно либо цитоспектрофЬтометрически, либо путём вычисления гистохимического показателя. Наряду с этим, определяют толщину баэальной мембраны одним из адекватнйх для данного исследования морфометрических методов и ее химизм, а также состояние волокнистого компонента периваскулярной среды обмена (по количественной характеристике коллагенообразбвания и качественным свойствам коллагена).

Применение предлагаемого способа .дозволяет реально оценить существующие в ткани сосудисто-тканевые взаимоотношения и состояние транскапиллярного обмейа за счет получения нового эффекта - одновременного рпредёЛёния энергетического обмена в эндоТёЛйи и йёрйтелий микрососудов, а также информации о структуре и химизме базальной мембраны и периваскулярной среда обмена. Предлагаемый спосо помимо значительной информативности, отличается большой экономией времени позволяющей применять его для срочного морфологического исследования и диагностики препатологических и патоЛогйческих процессов, связанных с нару1аением транскапиллярного обмена.

формула изобретения

Способ выявления сосудов гемоциркуляторного рубла путем приготовлени срезов в криостате с последующим опре;Е(елёнием активности аденозинтрифосфатазы, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, после определения активности аденозинтрифосфатазы производят окрашивание срезов пикрофуксином в течение от 4 до 7 мин и по структуре баэальных мембран определяют сосуды гемоциркуляторного русла.