Способ индикации микобактерий Советский патент 1986 года по МПК C12N1/00 

1

00 Од

оо

00

Изобретение относится к области икробиологии и может найти применение в медицине и ветеринарии при исследовании микобактерий.

Известен способ индикации микобактерий цутем парэнтеральноро введения лабораторным животным вещества, снижающего резистентность организма с последующим введением исследуемого материала и анализом органов животного.

Однако известный способ является недостаточно чувствительным.

Целью изобретения является повышение чувствительности способа.

Эта цель достигается тем, что способ индикации микобактерий осуществляют путем парэнтерального введения лабораторным животным вещества, снижающего резистентность организма, с последующим введением исследуемого материала и анализом органов животного, при этом животным в качестве вещества, снижающего pe-f зистентность организма, вводят однократно коклюшную моновакцину в дозе 20-30 млрд микробных клеток за 67 дней до введения исследуемого материала.

Предложенный способ осуществляют следующим образом.

Используют белых мьшей обоего пола массой 16-18 г. Животным внутрибрюшинно однократно вводят коклюш ную моновакцину в дозе 20-30 млрд микробных тел. Заражение животных культурой микобактерий производят через 6-7 дней после введения вакцины, внутривенно, по 0,5 мг сухой массы культуры в объеме 0,5 мл физио- ; логиче-ского раствора. По истечении 1 мес после заражения животных забивают. Трупы погибших ранее и забитых животных вскрывают и делают следзпощие анализы: микроскопия мазковотпеч&тков внутренних органов, посев суспензии этих органов на питательные среды, патогистологические ис,следования.

I

Пример 1. Беспородные белые мьши обоего пола массой 16-18 г были разделены на 3 группы по 10 мьппей в каждой. Первой группе животных с целью сенсибилизации организма одновременно внутрибрюшинно вводят коклюшную моновакцину в дозе 20 млрд 5 микробных тел в объеме 1 мл за 6 дней до заражения исследуемой культурой.

Второй группе животных в течение 5 дней до заражения ежедневно подкожно вводят гидрокортизон в дозе 1,0 мг. Третью группу составляли

интактные животные (контроль).

Животным всех трех групп внутривенно вводят фотохромргенную культуру M.kansasii (эталонный штамм) в дозе 0,5 мг сухой массы в объеме

0,5 мл физиологического раствора. Зараженных животных наблюдают один месяц..

П р и м е р 2. Для заражения используют скотохроммогенную культуру

микобактерий , штамм № 55, свежевыделенный от больного. Методика опыта была такой же, как в первом примере.

По истечении сроков наблюдения выживших животных, зараженных обеими культурами, забивают. Трупы животных, забитых и погибших ранее, вскрьшают. Приготовляют мазки-отпечатки из легкого, печени, селезенки каждо.го животного i мазки окрашивают

по методу Циля-Нильсена. При микроскопии подсчитывают количество кислотоупорных микобактерий в 100 полях зрения. Из тех же внутренних органов приготовляют суспензии в

физиологическом растворе 1:5 и засевают по .0,2 мл на 3 пробирки среды Левенштейна-Йенсена. Посевы выдерживают в термостате до 2-3 месяцев, далее подсчитьшают количество

колоний в каждой пробирке. Результаты опытов оценивают по четырехбальной системе.

В каждой группе животных определяют среднее значение индекса вегетации микобактерий.

Полученные данные приведены в таблице.

Средние индексы вегетации микобактерий у зараженных животных по данным микроскопии и посева

Введение коклюшной

вакцины1,,47 1,12iO,5

Продолжение таблицы

Введение гидро1,41±0,78 0,68±0,6 кортизона

Интактные живот- - 10

ные (контроль) 0,,23 0,3410,33;

Примечание: индекс указан с предельной ошибкой, при достоверности .

Как видно из таблицы, показатели вегетирования микобактерий у животных интактных (контрольная группа) значительно ниже, чем при использовании коклюшной моновакцины и гидрокортизона. Различие с контролем статистически достоверно (р 0,01).

Предложенный способ позволяет по-, высить чувствительность лабораторных животньпс к микобдктериям с ослабленной вирулентностью по срДвнению с интактными животными в 2-3 раза.

СПОСОБ ИНДИКАЦИИ-МИКОБАКТЕРИЙ, путем парэнтерального введения лабораторным животным вещества, снижающего резистентность организма, с последующим введением исследуемого материала и анализом органов животного, отличающийся тем, что с целью повьшения чувствитель- ности способа, животным в качестве вещества, снижающего резистентность организма, вводят однократно коклющную моновакцину в дозе 20-30 млрд микробных клеток за 6-7 дней до введения исследуемого материала.