ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО ПРИ ТОКСИКОИНФЕКЦИЯХ ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ОРГАНИЗМА Российский патент 2001 года по МПК A61K31/195 

Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к препаратам на основе аминокислот, витаминов и микроэлементов, и может быть использовано в качестве лечебного средства при токсикоинфекциях для повышения резистентности организма.

Общеизвестно применение при токсикоинфекциях антибиотиков, которые обладают различной противомикробной активностью. Их недостатком является то, что они обладают только противомикробным действием, дают иммунодепрессию (особенно это ярко выражено при длительном применении), а нередко приводят к аллергии.

Для повышения резистентности организма, подавленного самой токсикоинфекцией и применением антибиотиков, наиболее часто применяются иммуноглобулиновые препараты [1, 2, 3]. Они эффективны при самых разнообразных патологических процессах и обладают противовирусной, антибактериальной и иммуностимулирующей активностью. Недостатком данных препаратов является сложность их производства и заготовки сырья, что делает эти лечебные средства в ветеринарии дорогими и дефицитными, а при производстве гомологичных собачьих и кошачьих иммуноглобулинов их стоимость вообще крайне высока. Не все фармакопейные формы иммуноглобулинов можно вводить внутривенно, тогда как при внутримышечном введении и особенно при подкожном способе введения эффективность и быстрота действия несколько понижаются [1]. Данные препараты практически не оказывают никакого положительного действия на нарушенный при токсикоинфекциях обмен веществ.

Прототипом изобретения является гомологичный неспецифический иммуноглобулиновый препарат в виде 10%-ного раствора, специально произведенный для каждого вида опытных животных.

Предлагаемое лекарственное средство позволяет получить новый технический эффект снижения стоимости, устранения дефицитности и доступности лекарственного средства, повышения эффективности лечения токсикоинфекций.

Этот технический эффект достигается тем, что питательная синтетическая Среда 199 применяется в качестве лечебного средства для повышения резистентности организма. Настоящая питательная Среда 199 на основе аминокислот используется для выращивания культур тканей и разрешена для этих целей Фармакопеей МЗ СССР, 1968, изд. X.

В клинических исследованиях использовалась синтетическая Среда 199 для культуры тканей [4] производства Московского института вирусных препаратов и Уфимского НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова в виде однократного раствора во флаконах по 10, 250 и 500 мл. Данная среда проходила дополнительный контроль на стерильность, безвредность и апирогенность. Произведенные гомологичный иммуноглобулины для каждого подопытного вида животных спирт-холодовым методом имели сходные биохимические показатели с образцами коммерческого нормального донорского иммуноглобулина.

Предварительными исследованиями нами было установлено, Среда 199 и гомологичные для каждого опытного вида иммуноглобулины крайне малотоксичные для животных и не обладают анафилактогенностью.

О наличии и выраженности иммуностимулирующей и дезинтоксикационной активности Среды 199 для культуры тканей судили по ее влиянию на течение и выраженность стафилококковой и протейной инфекций, фагоцитарную активность клеток перитонеального экссудата и ретикулоэндотелиальной системы.

Опыты проведены на 825 беспородных белых мышах обоего пола весом тела 14-16 г, 60 морских свинках весом тела 250-300 г, 30 беспородных крыс весом тела 150-200 г тела.

При исследованиях подопытные животные распределялись на три группы. Животные первой группы получали Среду 199, второй - 10%-ный гомологичный иммуноглобулин, третьей (контрольной) - 0,9%-ный физиологический раствор натрия хлорида (в дальнейшем - физраствор).

Фагоцитарную активность клеток перитонеального экссудата у мышей при воздействии указанных препаратов исследовали по Серафимову-Пиминкову А.В. (Серафимов-Пиминков А. В. и др. Фагоцитарная функция перитонеальных макрофагов у неонатально тимэктомированых крыс. Гематология, N 4, 1972. - С. 467-470).

Поглотительную активность клеток ретикулоэндотелиальной системы крыс судили по уровню радиоактивности тканей и органов после введения человеческого альбумина, меченного йодом 131 (Шишкин В.Л. К механизму действия антилимфоцитарной сыворотки на некоторые проявления аллергической реактивности. Кандидатская диссертация. Уфа: БНМИ, 1973. - С. 80-84).

Острую стафилококковую токсикоинфекцию у мышей вызывали путем внутрибрюшинного введения смыва с агара суточной культуры золотистого стафилококка штамма 5/2 (ЛД 50), токсикогенного для мышей (1 млрд. микробных тел в 0,2 мл физраствора). ЛД 50 определяли по методу Прозеровского (Прозеровский В.Б. Применение приема накопления частот для характеристики выносливости животных. Фармакология и токсикология, N 5, 1960. - С. 467-470). Выраженность инфекции оценивали по количеству погибших мышей в опытных и контрольной группах и по средней продолжительности жизни погибших мышей с момента заражения до их гибели.

Экспериментальную стафилококковую инфекцию у морских свинок воспроизводили по методу И.Ф. Титаренко (Титаренко И.Ф. Развитие повышенной чувствительности замедленного типа при экспериментальной стафилококковой инфекции. В сб.: Вопросы иммунологии. Киев: Здоровье, т. 3, 1968. - С. 114-118) путем введения в подушечки задних конечностей животных 1 млрд. микробных тел золотистого стафилококка в объеме 0,2 мл физраствора, выделенного от больных гнойно-септическими заболеваниями. О выраженности инфекции судили через 72 часа после заражения по клинической картине пораженных конечностей.

О выраженности протейной инфекции судили по тесту отека конечностей мышей (Аксенова Е.В. Применение теста отека конечностей белых мышей для изучения протейной гноеродной инфекции. Микробиология, N 11, 1980. - С. 83-96). В работе использовали штамм Proteus mirabilis, выделенный от больных людей с гнойно-септическими заболеваниями. ЛД 50 данного штамма при внутрибрюшинном введении смыва с агара суточной культуры составляла 2,5 млрд. микробных тел. Смыв суточной культуры протея с агара в объеме 0,05 мл (2,5 млрд. микробных тел) вводили в подушечку левой задней конечности мышей, а в подушечку правой задней - соответствующее количество физраствора. Через 48 часов обе задние конечности ампутировали по линии голеностопного сустава и взвешивали на торзионных весах с точностью до 1 мг.

Данные изучения влияния Среды 199 и иммуноглобулина на фагоцитарную активность клеток перитонеального экссудата у мышей по отношению к золотистому стафилококку приведены в табл. 1. Раствор Среды 199 и физраствор вводили внутрибрюшинно по 0,2 мл на животное (первая группа и третья группы соответственно), а иммуноглобулин - по 0,01 мл (вторая группа), трехкратно 1 раз в сутки в период формирования экссудата. Последнее введение препаратов производили за 4 часа до введения стафилококка.

Как видно из данных табл. 1, внутрибрюшинное введение Среды 199 в указанных дозах вызывает значительное увеличение фагоцитарной активности клеток перитонеального экссудата по сравнению с контролем (разница достоверна - P > 0,01) и сходна с таковой при введении иммуноглобулина.

Результаты исследований активности клеток ретикулоэндотелиальной системы крыс по уровню радиоактивности тканей и органов после введения человеческого альбумина, меченного йодом 131, представлены в табл. 2. В каждой опытной группе было по 10 особей. Дозы препаратов на животное: Среда 199 - 2 мл, иммуноглобулин - 0,1 мл, физраствор - 2 мл.

Исходя из данных этой таблицы, можно сказать, что применение Среды 199 увеличивает поглотительную активность клеток ретикулоэндотелиальной системы практически в той же степени, что и иммуноглобулин (разница между показателями Среды 199 и контролем, иммуноглобулина и контролем статистически достоверна, а между Средой 199 и иммуноглобулином - недостоверна).

Результаты влияния Среды 199 и иммуноглобулина на течение экспериментальной стафилококковой токсикоинфекции у мышей показаны в табл. 3. Дозы препаратов на одно животное: Среды 199 - 0,2 мл (первая группа), иммуноглобулина - 0,01 мл (вторая группа), физраствора - 0,2 мл (третья группа). Их вводили двукратно - сразу после заражения и через двое суток внутрибрюшинно.

Из данных табл. 3 можно сделать вывод, что введение мышам в указанных дозах Среды 199 снижает выраженность токсикоинфекции и практически предотвращает гибель животных по сравнению с контролем, причем эффективней, чем иммуноглобулин.

Морским свинкам среду 199 и физраствор инъецировали внутрибрюшинно по 0,5 мл трехкратно - сразу после заражения, через 24 и 48 часов после введения стафилококка (первая и третья группы соответственно), а иммуноглобулин в дозе 0,02 мл по той же схеме (вторая группа). Результаты этих исследований представлены в табл. 4.

Из этой таблицы видно, что введение морским свинкам Среды 199 так же, как и у мышей, снижает выраженность токсикоинфекции и увеличивает выживаемость, и опять же эффективней, чем иммуноглобулин. Из этой таблицы видно, что введение морским свинкам Среды 199 так же, как и у мышей, снижает выраженность токсикоинфекции и значительно предотвращает гибель животных, и опять же несколько эффективней, чем иммуноглобулин.

Результаты исследований влияния Среды 199 и иммуноглобулина на течение протейной инфекции у мышей показаны в табл. 5. Среду 199 и физраствор вводили внутрибрюшинно по 0,2 мл (первая и третья группы соответственно), иммуноглобулин - 0,01 мл (вторая группа) непосредственно после заражения и через сутки.

Показатели табл. 5 дают основание считать, что внутрибрюшинное введение Среды 199 значительно снижает (практически в той же степени, что и иммуноглобулин) интенсивность развития протейной инфекции, о чем свидетельтсвует статистически достоверное снижение величины развития отека конечности у мышей после их заражения.

Исходя из представленной информации можно сделать вывод, что питательная Среда 199 при парентеральном введении обладает многогранным положительным действием на организм, а именно стимулирует иммунитет, улучшает дезинтоксикационные функции, способствует нормализации нарушенного обмена веществ (благодаря наличию в своем составе сбалансированного комплекса аминокислот, витаминов и минеральных веществ). При этом применение Среды 199 для повышения резистентности организма при токсикоинфекциях не уступает по эффективности действия иммуноглобулинам.

Таким образом, предложенное применение синтетической Среды 199 в качестве лекарственного средства для повышения резистентности организма при токсикоинфекциях дает высокую эффективность лечения данных патологий при существенном снижении стоимости курса терапии по сравнению с представленным прототипом.

Источники информации
1. Буччи Э. Гаммаглобулин для внутривенного вливания. В сб.: Переработка плазмы. Новые технологии. Москва, 21-22 февраля, 1977. - С. 12-22.

2. Гаврилов О.К., Русанов В.М. Препараты крови и их клиническое применение. В сб. : Справочник по переливанию крови и кровезаменителей. Москва, 1982. - С. 5-15, 40-41, 87-93.

3. Змызгова Л.А., Лукин Л.Н., Грачева Л.Н., Бушуева В.В. Применение иммунных препаратов крови в комплексном лечении больных сепсисом. В сб.: Вопросы донорства плазмы крови и клиническое применение иммунных препаратов. Ленинград, 1982. - С. 89-92.

4. Наставление по применению жидкой питательной Среды 199. МЗ СССР, 1991.

Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано при лечении токсикоинфекций для повышения резистивности организма. В качестве лечебного средства применяют питательную синтетическую Среду 199 для культур клеток, обладающую высокой эффективностью в лечении токсикоинфекций. Использование Среды 199 не уступает по эффективности действия иммуноглобулинам, обеспечивает высокую эффективность лечения данных патологий при существенном снижении стоимости курса терапии. 5 табл.

Применение жидкой питательной Среды 199 для культур клеток в качестве лекарственного средства при токсикоинфекциях для повышения резистентности организма.