370 щелочная среца при экстрагирогзании из- меняот химическую природу фенольных кислот, легжо вступаюдих в окислительно-восстановительные реакции, а также возможно ногзообразование ик из некоторых органических веществ, переходящих в экстракт оановрсменно с ними. Цель изобретения - повышение точности определения. ПостаЕУ1енная цель достигается тем, что экстрагирование образца почвы проводят нейтральной смесью этанол - вода в соотношении 7:3 при соотношении почв к смеси 1:2, после центрифугирования В111тяжку фильтруют через мембранный филь р, сгушение под вакуумом осуществляют при 38-40 С до водного остатка, перед экстрагированием эфиром повторно филЕзТруют через мембранный фильтр, при чем экстрагирование эфиром проводят пр рН 7, а после упаривания эфирного экстракта его фильтруют. В основу способа положено экстрагирование образца почвы смесью этанол:во ца -7:3 без применения щелочной среды так как при высоких рН (особенно в при 1сутствии кислорода воздуха) фенольные кислоты могут трансформироваться, а также вступать в реакции с присутствую щими в экстракте органическими веществами и продуктами их гидролиза. Способ включает в себя приготовление вытяжки Почвы (100-20О г) со смесью этанол:вода - 7:3 при соотношении почва:смесь 1:2 путем встряхивания на качалке 30 мин, центрифугирование 10 мин при 3500 об/мин и температуре 20 С, фильтрование через мембранный фильтр Сынпор № 7 для освобождения от тонкодисперсных почвенных частиц, замер объема экстракта, сгущение его под вакуумом при 38-40 С до водного остатка объемом около 5О мл, что позволяет избежать действия повышенных температур (выше 50 С), которое неизбежно при упаривании на водяно бане и сочетается с непосредственным воздействием кислорода воздуха; фильтрование через мембранный фильтр Jvfc 7 для освобождения от органических веществ, нерастворимых в водном остатке; экстрагирование пятикратно равным объе мом очищенного от перекисей диэтилового эфира (во избежание реакций их с фе нольными кислотами) при рН 7 для очис ки от высокомолекулярных соединений, мешающих анализу препаратов; доведение до рН 1,8 концентрированной НСВ по 4 р {-метру; фильтрование через мембранный фипьтр № 7 для освобождения от коагулирующих в кислой среде гумусовых веществ, мешающих анализу; экстрагирование фенольных кислот 1гятикратно равным объемом свободного от перекисей эфира; сгущение эфирного экстракта без кипения на водяной бане до объема около 3 мл; количественный перенос сгущенного эфирного экстракта в тарированную посуду; упаривание последнего до объема около 0,2 мл на водяной бане без кипения, а затем досуха - на воздухе без нагревания; растворение препарата в смеси этанол-вода - 1:1; нанесение препарата на тонкослойную хроматограмму для качественного анализа фенольных кислот; нанесение на бумажную хромато- грамму для количественного определения их. Пример 1, К 173 г дерново- подзолистой легкосуглинистой почвы в воздушно-сухом состоянии прилили 346 мл смеси спирт:вода 7:3 и встряхивали в качалке 30 мин; вытяжку отцентрифугировали 10 мин, примерили объем, сгустили под вакуумом при 3840 С до водного остатка объемом около 50 мл, отфильтровали через мембранный фильтр № 7, проэкстрагировали пятикратно равным объемом свободного от перекисей диэтилового эфира при рН 7, довели до рН 1,8 концентрированной НСб по рН-метру, профильтровали через мембранный фильтр N9 7, фенольные кислоты проэкстрагировали пятикратно равным объемом свободного от перекисей эфира, эфирный экстракт сгустили на водяной бане до объема около 3 мл, избегая кипения последнего, перенесли количественно в тарированную посуду, упарили на водяной бане без кипения до объема около 0,2 мл, затем - досуха на воздухе без нагревания, остаток растворили в смеси этанол:вода -1:1; определили качественный состав кислот методом тонкослойной хроматографии и количественное содержание - методом бумажной хроматографии. Результаты анализа представлены цальа, Содержание фенольных кислот в дерново-подзолистой легкосуглинистой глее- вой почве под лесом, мкг/ЮО г ; Протокатеховая1О Ванилиновая6 П -оксибензойная5 Феруловаяслепы 57 Пример 2. Провержу полноты извлечения фемольных кислот провопили слецующим образом. К 200 г свежей почвы добавили по 2О МКГ/10О г кислот, встречающихся в почве чаше всего и в наибольших, коли чествах; непосредственно за этим прили ли к почве 4ОО мл смеси этанол:воаа - 7:3 и встряхивали на качалке 30 мин; вытяжку отцентрифугировали при 35ОО об/мин и 20 С, отфильтровали че рез мембранный фильтр № 7, сгустили под вакуумом при 38-4О С, водный остаток объемом около 50 мл отфильтровали через мембранный фильтр № 7; проэкстрагировали пятикратно равным объемом свободного от перекисей эфира; довел1г до рН 1,8 концентрированной НСВ по рН-метру; профильтровали через мембранный фильтр № 7, проэксг- рагировали пятикратно равным объемом свободного от перекисей эфира; эфирный экстракт сгустили до объема около 3 мл на водяной бане без кипения последнего перенесли количественно в тарированную посуду, упарили на водяной бане без кипения до объема около 0,2 мл, затем - досуха на воздухе без нагревания; растворили остаток в смеси этанолгвоца : определили качественный состав кислот методом тонкослойной хроматографии и количественное содержание их - методом бумажной хроматографии. Параллельно таким же образом анализировали образец почвы без добавления фенольных кислот. По разности определили процент выхода кислот, добавленных в почву. Выход фенольных кислот, добавленных %; в почву. Предложенны Прототип способ f -оксибензойная Ванилиновая П -кумаровая 8 Сиреневая 7248 Феруловая 16слеаы Почка освоенная, дерновоподзолистая срецнесуглинистая. Предложенный способ обеспечивает более полный выход фенольных кислот, находящихся в почве в свободном состоянии, по сравнению с прототипом. Формула изобретения Способ количественного определения свободных фенольных кислот в почве, включающий экстрагирование образца почвы с встряхиванием, центрифугированием вытяжки, сгущение под вакуумом, доведение до рН 1,8, экстрагирование эфиром, упаривание эфирного экстракта и количественное определение методом хроматографии свободных фенольных кислот, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения, экстрагирование образца почвы проводят нейтральной смесью этанол - вода в соотношении 7:3 при соотношении почвы к смеси 1:2, после центрифугирования вытяжку фильтруют через мембранный фильтр, сгущение под вакуумом осуществляют при темепературе 38-4О С до водного остатка, перед экстрагированием эфиром повторно фильтруют через мембранный фильтр, причем экстрагирование эфиром проводят при рН 7, а после упаривания эфирного экстракта его фильтруют. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе i.Kuwalguka 5. и 5hindoH. Sci. PBant Nutr.l9T3.v.19.№12). 2.T5.C.Wanga,The,ken Qanga, fhe-Tang Chuang a. phenoBic acids as pBant growth inhiBitors, ЭолЕ Science,OЗT4),1QЬ7,).
название | год | авторы | номер документа |
---|---|---|---|
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РОЗМАРИНОВОЙ КИСЛОТЫ | 2009 |
|
RU2402525C1 |
Способ выделения водорастворимых фракций гумуса, в частности фракции бурых гуминовых кислот, из образца почвы | 2016 |
|
RU2659939C2 |
Способ определения 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты | 1980 |
|
SU974261A1 |
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОКСИБЕНЗОЛА И ЕГО МОНОМЕТИЛЬНЫХ ПРОИЗВОДНЫХ В БИОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ | 2004 |
|
RU2269137C1 |
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО ГЕПАТОПРОТЕКТОРНОЙ АКТИВНОСТЬЮ | 1991 |
|
RU2259208C2 |
НАСТОЙКА ECHINACEA PURPUREA L., СРЕДСТВО НА ОСНОВЕ ECHINACEA PURPUREA L. И СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ | 1999 |
|
RU2163138C9 |
Способ получения суммы фенольных соединений | 1990 |
|
SU1819618A1 |
Способ количественного определения суммы алкалоидов в спорынье | 1957 |
|
SU111906A1 |
Способ количественного определения фенолов,высших жирных и смоляных кислот и окисленных веществ | 1984 |
|
SU1247744A1 |
СПОСОБ АНАЛИЗА ЖИДКИХ ПРЕПАРАТОВ НА ОСНОВЕ РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ | 1996 |
|
RU2093822C1 |
Авторы
Даты
1980-12-30—Публикация
1978-09-12—Подача