I
Изобретение относится к области микробиологической промышленности, в частности к производству микробиологических препаратов, и может быть использовано для получения продуцентов грибных препаратов высокой биологической активности.
Известен способ выделения чистых культур микроорганизмов, основанный на выделении из популяции одной клетки. Наиболее известен метод Коха, который заключается в получении чистой культуры из отдельной колонны, которую считают результатом развития одной клетки. Для этого берут расплавленный агар или желатину, вносят посевной материал и перемешивают. Аналогичным путем готовят 2, 3, 4, 5-кратное разведение. Полученный ряд разбавлений посевного материала выливают в стерильные чашки Петри и после застывания ставят в термостат. Каждая бактерия (спора), попавшая в используемую плотную среду из посевного материала, способна будет развиться в колонию 1.
Известен также способ выделения и отбора монокультур гриба Beauveria bassiana (Bals) Uuill, который-заключается в изолировании отдельных проросших конидий в
голодном агаре с дальнейшим переносом таких конидий на питательную среду для культивирования и получения монокультуры 2.
Недостатком известных способов являегся то, что они не дают возможности получить наиболее вирулентную монокультуру энтомопатогенного гриба в течение нескольких этапов искусственного отбора, так как число конидий в популяции гриба огромное и вероятность выбора именно самой вирулентной конидии очень незначительная.
Цель изобретения состоит в ускорении процесса получения вирулентных штаммов.
Поставленную цель достигают тем, что в конидиальный слой гриба на питательной среде помещают насекомых; инфицированных насекомых выращивают, а погибших через 3-7 суток размещают на фильтровальной бумаге во влажной камере и после появления мицелия на бумаге конидии с них переносят на питательную среду для дальнейшего его отбора.
Пример. Чашки Петри заливают питательной агаризованной средой Чапека с добавлением 0-2,5% дрожжей или средои сусло-агар. Среду заливают суспензией конидий вирулентной культуры исследуемого энтомопатогенного. гриба, прошедшего предварительный отбор уНа вирулентность. Посевы инкубируют в течение 14 дней в термостате. После чего на газон исследуемой культуры подсаживают тестовые насекомые следующим образом: гусеницы в течение не более одной секунды прикасаются к газону культуры, оставляя, отпечаток, последующая гусеница также оставляет свежий отпечаток. Необходимо следить, чтобы отпечатки от прикосновениягусениц не накладывались друг на друга. На газон исследуемой культуры подсаживают от 30 до 50 особей тестовых насекомых. Инфицированных таким образом гусениц помещают на корм, каждую индивидуально. Гусеницы, погибшие в первые дни инфицирования (3-7 сутки), представляют интерес для последующего отбора. Для этого погибших гусениц помещают на влажную стерильную (фильтровальную) бумагу в чащки Петри и после покрытия их мицелием гриба делают отсев для дальнейшего отбора. Индивидуальное инфицирование большого числа особей тестовых насекомых на газоне исследуемой культуры позволяет оценить вирулентность значительного числа конидий в популяции гриба. Количество этапов искусственного отбора для каждого исследуемого энтомопатогенного гриба может быть различное и продолжаться до получения устойчивых результатов в гибели тестовых насекомых. Формула изобретения Способ отбора энтомопатогенных грибов, включающий перенесение конидий на питательную среду, отличающийся тем, что, с целью ускорения процесса получения вирулентных штаммов, в конидиальный слой гриба на питательной среде помещают насекомых, инфицированных насекомых выращивают, а погибших через 3-7 суток размещают на фильтровальной бумаге во влажной камере и после появления мицелия на бумаге, конидии с них переносят на питательную среду для дальнейщего отбора. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1.Федоров М. В. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. М., 1957г. 2.Сборник «Захист рослин, Киев, 1970. Примак Т. А. и Водяна Л. О. «Методика выделения и отбора монокультур гриба Веauveria Bassiana (Bals) Vuilb) (прототип).
