Способ получения иммобилизованныхпРОТЕОлиТичЕСКиХ фЕРМЕНТНыХ пРЕ-пАРАТОВ Советский патент 1981 года по МПК A61K38/46 

легко осуществим в иромыииюнных услоliliHX.

Промывные воды, полученные в результате промывки препарата буфером, могут быть объединены, упарены в вакууме до исходного содержания фермента и повторпо использованы в процессе.

Пример 1. 100 мг порошка фторамфнболового асбеста суспендируют в 25 мл 0,01 М фосфатного буфера с рН 5,5 и при бавляют 20 мг трипсина марки «Spofa. Смесь выдерживают при 5°С 18 ч при перемешивании, после чего центрифугируют цри 2000 об/мнп в течение 20 мин.

Осадок промывают трижды тем же фосфатным буфером. Промывные воды объединяют, упаривают в вакууме до исходного содержания трипсина и вносят новую порцию носителя для связывания остатка фермента из промывных вод.

Контроль за содержанием фермента в промывных водах подтверждает, что после третьей промывки в надосадочной жидкости протео.тнтпчеекая активност1 не обнаруживается, т. е. фермент закреилен на носителе.

Полученный осадок иммобилизованного фермента выеушнвают при комнатной температуре в потоке воздуха. Из осадка отбирают 5 мг высушенного препарата, суспендируют в 1 мл того же фосфатного буфера н определяют протеолитическую активность по Кунитпу.

Для определения белка по Хартри 2 мг препарата суспендируют в 1 мл фосфатного буфера и анализ проводят по обш,еприпятой методике.

Анализы подтве|)ждают, что нротеолитическая активность иммобилизоваппо1о ферментного препарата в пересчете па 1 мг белка составляет 63-65% от активности исходного трипсина. Активность ио Куиитиу на 1 м|- белка иммобилизованною трипсина составляет 1,0-1,2 единиц.

Пример 2. 100 мг порошка фторамфиболового асбеста суспендируют в 25 мл 0,0001М фосфатного буфера с рН 5,5, прибавляют 40 мг ферментного препарата протеназы-1, выпускаемого опытным производством ИОХ АП УССР, нредставляюшего собой комплекс протеолитических ферментов. Дальнейшую обработку, проводят, как в примере 1.

Протеолитическая активность иммобилизованного препарата протеназы-1 составляет 20-30% от исходной. Активность по Куннтцу на 1 мг белка им.мобилизоьаиной протеназы составляет 0,4-0,5 единиц.

Полученные предлагаемы.м способом иммобилизованные ферментные препараты способны многократно гидролизовать казеин (13-16 раз). При этом сохраняется до 60-70% исходной активности.

Ф о |5 м у л а изобретен и я

Способ получения иммобилизованных протеолитических ферментных иренаратои, включающий связывание фермента с носителем при перемешивании, промывку полученного препа)ата и его высушиваннс, о т л и ч а ю щ и и с я тем, что, с целью упрощения ироцесса, в качестве носителя исцользуют фторамфиболовый асбест в виде суспензии в lO -10-М буферном растворе, а связывание проводят ири соотношении фермент : носитель 1 ; 2,5--5,0 при 4-10°С в течение 18-20 ч.

Источники информации, ирниятые во внимание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР ,NO 425936, кл. С 07 G 7/02, 1972 (прототип) .