Способ диагностики угрозы выкидыша Советский патент 1981 года по МПК A61B10/00 

1 . Изобретение относится к медици-, не, а именно к акушерству и гинекологии . Известен способ диагностики угрозы выкидыша путем культивирования лимфоцитов кров.и в питательной ереде H. Недостатком известного способа является большой срок диагностирования, что задерживает проведение соответствующей терапии. Цель изобретения ускорение способа диагностики угрозы выкидьша. Указанная цель достигается тем, что при осуществлении диагностики угрозы выкидыша путем культивировани лимфоцитов крови в питательной среде, культивируют лимфоциты крови доноров в присутствии сыворотки крови обследуемой, после чего и-з культуры выделяют лимфоциты, окрашивают их акридиновым оранжевым и измеряют интенсивность флуоресценции,при умен шении которой по сравнению с контролем диагностируют угрозу выкидыша. Способ осуществляют сл-едующим образом. Берут кровь обследуемой и донора отстаивают в течение 1 ч, сливают насадочную жидкость с лимфоцитами и центрифугируют ее. К лимфоцитам донора добавляют питательную среду и собственную сыворотку в одну пробирку, а в другую - сыворотку обследуемой до 20% .от общего объема. Культивируют в термостате при 37°С, После 5 мин инкубации цент рифугируют, из осадка делают мазки, которые фиксируют в смеси спирт-ацетон (1:1) 30 мин при комнатной температуре. Окрашивают в следующей последовательности, МИН: Этиловый спирт . 11 Бидистиллированная вода Ацетатный буфер рН 4,4 Раствор АО на буфере 10 м 10- М Препараты заключают в каплю буферного раствора, содержащего красиель АО () , и закрывают покровным стеклом. Для предотвращения высыхания клеток края покровных стекол окатывают парафином или резиновым клеем. ,

Измерение интенсивности связывани красителя ЛО с клетками определяют на флуориметре. О количестве связанного ядрами лимфоцитов красителя судят по интенсивности зеленой люминесценции при длине волны 530 им. В каждом препарате измеряют по 10 клеток. Окраску препаратов проводят одновременно для всех изучаемых групп. Результаты измерения клеток для каждог случая усредняют, вычисляют ошибку среднего и достоверность различия по критерию Стьюдента-Фишера. Результаты показывают,что добавление сыворотки крови беременных женщин с угрозой выкидыша к лимфоцитам донора снижает, интенсивность флуоресценции в среднем на 17% по сравнению с собственной сывороткой донора. Изучение добавления сыворотки крови женщин вне беременности, имевших привычные выкидыши, выявляет снижение интенсивности флуоресценции лимфоцитов доноров, культивируемых с собственной сывороткой. Обнаруженные четкие различия интенсивности флуоресценции лимфоцитов донора при добавлении сыворотки крови беременных, имевших выкидыши, позволяет рекомендо вать данный способ для ранней дианостики угрозы выкидыша.

Пример. Больная, 25 лет, история родов № 97, обратилась IB клинику с жалобами на наличие болей внизу живота и в пояснице. Анамнез: 1-я беременность в 1971 году - срочные роды; 2-5-е беременности - медицинские аборты в сроке 9-10 недель без осложнений; б-я беременность в 1976 году - самопроизвольный выкидыш с выскабливаением в сроке 13 нeдeль 7-я беременость в 1977 году - самопроизвольный выкидыш в сроке 27 недель с выскабливанием; 8-я беременность, данная - 22 недели. Объективно: положение плода продольное, сердцебиение прослушивается, матка возбудимая. На основании объективного клинического осмотра поставлен диагноз: беременность 22 недели, угроза выкидыша. Результаты лабораторного обследования: из периферической крови больной добавили сыворотку и культуру лимфоцитов донора, приготовили мазки, зафиксировали,окрасили. Результаты цитофлуориметрии показали, что интенсивность флуоресценции лимфоцитов донора при добавлении сыворотки пациента составила 85±3,1 отн.ед. и уменьшилась на 20% по сравнению с интенсивностью флуоресценции лимфоцитов донора, культивируё1 и в собственной сыворотке (102±4,08 р. 0,001).

Предлагаемый способ обеспечивает ускорение диагностики угрозы выкидыш на 2 дня по сравнению с известным способом и может применяться в качестве контроля при лечении, позволяя экономить 1215 руб в год.

Данные подтверждены клиническими и лабораторными испытаниями на 18 Обследованных больных.

Формула изобретения

Способ диагностики угрозы выкидыша путем культивирования лимфоцитов крови в питательной среде, отличающийся тем, что, с целью ускорения способа, культивируют лимфоциты крови доноров в присутствии сыворотки крови обследуемой, после чего из культуры вьщеляют лимфоциты, окрашивают их акридиновым оранжевым и измеряют интенсивность флуоресценции, при уменьшении которой по сравнению с контролем диагносцируют угрозу выкидыша.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Мирохмедов У. М. и Резников Л. А. Методы исследования в клинической медицине. 1975, с. 165.