Способ диагностики угрозы прерывания беременности Советский патент 1981 года по МПК A61B10/00 

I

Изобретение относится к медицине, а именно, к акушерству.

Известен способ диагностики угрозы прерывания беременности путем выделения лимфоцитов крови .с последующей инкубацией их в среде, окраски акридиновым оранжевым и измерения и гтенсивности флуоресценции tlj«

Однако известный способ обеспечивает низкую точность диагностики и не позволяет проводить раннюю диагностику, что ограничивает область его использования. .

Цель изобретения - повышение точности способа и ранней диагностики.

Указанная цель достигается тем, что при осуществлении способа диагностики угрозы прерывания беременности путем вьщеления лимфоцитов крови с последующей инкубацией их в среде, окраски акридиновым оранжевым (АО) и измерения интенсивности флуоресценции,, в среде предварительно до внесения лимфоцитов инкубируют

.эритроциты обследуемой в течение 5-60 мнн, далее эритроциты удаляют, после инкубации лимфоцитов интенсивность флуоресценции измеряют в начале и в конце инкубации и при возрастании интенсивности флуоресценции к концу инкубации диагностируют угрозу прерывания беременности.

Способ осущест1вляют следующим образом.

to

Берут кровь из локтевой вены пациента в количестве 5-10 мл, ос акдаюг эритроциты, надосадочную жидкость с лимфоцитами отделяют от эритроцитов. Эритроциты трехкратно отмывают от

15 плазмы в 0,85%-ном растворе хлористо го натрия в объеме,3-х красно превышакяцем объем эритроцитов. Затем из эритроцитарной массы и раствора Рин- гера-Локка в объемном отношении 1:2

20 готовят взвеси и помещают в диффузи- онную камеру, две полукамеры которой разделены мембранным фильтром с диаметром пор 0.,4 мкм. Эритроциты инку3биру(рт n течение 30 мин при периоди встряхивании для предотвращения их оседания. В результате инкубации эритроцитарный белок диффузно проникает в полукамеру с раствором Рингера-Локк По истечении срока инкубации раство Рингера-Локка с проникшими туда эри троцитарными белками извлекают и до бавляют в культуру с лимфоцитами, к торые инкубируют на покровных стеклах в течение 5-60 мин. После инкуб ции покровные стекла с приклеившими лимфоцитами вынимают и фиксируют в смеси спирт-ацетон (1:) в течение 30 мин при 4°С. Препараты с клетками окрашивают следующей последовательности. Этиловый спирт . Видистшширо- . ванная вода Ацетатный буфер (.РН 4,4) Раствор АО на буфере ) Раствор АО на буфере (10 м) Препараты заключают в каплю буфе ного раствора, содержащего красител АО (), и помещают на предметно стекло, края которого окантовывают рафином или резиновым клеем. Измерение интенсивности связывания красителя АО с клетками проводят на цитофлуоринефелометре. Причем интенсивность флуоресценц измеряют в начале и в конце инкубации и при возрастании интенсивност флуоресценции к концу инкубации диагностируют угрозу прерывания беременности. Клинико-лабораторные исследовани с использованием предлагаемого спос 4 ба показали (табл, U, что И1ггенсйьность флюоресценции повышается в 2 раза при действии среды, где инкубировали эритроциты больных. Действительно, сравнивая столбец 2, где дана интенсивность флуоресценции лимфоцитов донора с собственной сывороткой, со столбцом 4, где дана интенсивность флуоресценции при добавлении сыворотки больной видно, что флуоресценция уменьшается в среднем на 7,5% (столбец 5 . В то как добавление в 5-минутную культуру среды, где инкубировали эритроциты этих же больных, показало увеличение интенсивности флуоресценции (столбец 6J в 2 раза и составило 16% ,столбец 8). Следует обратить внимание, что в тех случаях,когда процент отличий интенсивности флуоресценции под действием сыворотки больных был низок (столбец 5, номера по порядк.у 4,5,6 и з атруднял постановку диагноза, то под действием среды, где инкубировали эритроциты пациентов, процент отличий достоверно увеличился (столбец 8) и позволял поставить точный диагноз угрозы выкидыша. 60 минутное культивирование лимфоцитов донора с сывороткой крови больных показало (табл.2} что интейсивность флуоресценции лимфоцитов (ст олбец 4) увеличивается в среднем на 6% (столбец 5), в то время как добавление в культуру среды, где инкубировали(эритроциты пациентов, вызывало увеличение интенсивности флуоресценции (столбец 6) почти в 3 раза и составило в среднем 18% (столбец 8), что .способствовало установлению более точного диагноза. Таким образом, предлагаемый способ обеспечивает повышение точности диагностики, а также позволяет проводить более раннюю диагностику угрозы прерывания беременности.

5

-- 0)

ж о. S о

чО

:«

f- Н

л и

§

к X .

(U и 2 -ш оо S а--

§0) 10 S 0) Е

§к и X о (б ж ж

ю л ж

о ffl и

11

ж О) о.

&&г

d в к а о S о п а

л

о

ч

о

о

о

о

-8

о - о

со о

Ю о о г о

vr о

о

о

то го о

г о

V и V «V I

II V 4J о. а

- а

л сх

(X

«о

SU

(

00

vO

со о

1Л

00

о

о

k

I

t ГЛ

м

м +1

УЭ

. f

+1 -«I

+(

ю о «м

о

г.

г-о

00

00 г

ON

«п

со

л

ю

«

«ч

и

Формула изобретения

Способ диагностики угрозы прерыв ния беременности путем вьщелеиия лимфоцитов крови с последующей инкубацией их в среде, окраски -акридино вым оранжевым и измере(шя интенсивности флуоресценции, о т л и ч а rant и и с я тем, что, с целью повьшеНИН способа и ранней диагностики, в среде предварительно до внесения лимфоцитов инкубируют эритроциты обследуемой, в течение 5-60 мин, далее эритроциты удаляют, после инкубации

876III12

лимфоцитов интенсивность фЛуоресценции измеряют в начале и в конце инкубации и при возрастании интенсивности флуоресценции к концу инкубации $ диагностируют угрозу прерывания беременности.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Riqjer R. Microfluorimetric characterization of intracel lular nucleic acids nucloopratelnsby act idine oranqe.- Acta Physio .Seand. 1966, V 67, стр.267.