Способ получения белковых компонентовКРОВи Советский патент 1981 года по МПК A61K38/17 

1 . , . Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии..

Известен способ получения белковых компонентов крови путем адсорбции крови на поперечно сшитых полиэлектролитах - сополимерах, содержащих- этилен и ангидрид малеиновой кислоты , с последующим элюированием целевого продукта с .помощью физиологически приемлемой соли Lll.

Однако известный способ-не позволет получить препарат высокой степени чистоты. .

Цель, изобретения - повышение степени чистоты препарата.Поставленная цель достигается тем что способ получения белковых компонентов крови осуществляют путем аД сорбции крови на поперечно сшитых полиэлектролитах - сополимерах, содержащих этилен и ангидрид малеиново кислоты, с последующим элюированием целевого продукта с помощью физиологически приемлемой соли, жидкую плаз му крови подвергают- в,заимодействию при рН 7,5-8,5 с полиэлектролитом в количестве 0,025-0,1% с содержанием боковых динизших-алкил-амино-низших.-алкильных функциональных групп.

При этом динизший-алкил-амино низшая функциональная группа - диметиламинопропил.

Способ осуществляют следующим образом.

. Исходную плазму получают в свежезамороженном виде. До фракционирования полиэлектролитом-сополимером

плазму оттаивают нагревом до 35°С. Соответствующий полиэлектролит-сополимер добавляют к плазме в концентрации примерно 0,025-0,1%, предпочтительно 0,035-0,05% при рН 7,5-8,5. Смесь перемешивают около 10 мин, . в это время препарат, содержащий факtop IX, селективно адсорбируется полиэлектролитным сополимером. Остающаяся жидкая плазма содержит факторы II, IX и X. Нерастворяющиеся в воде, прперечНо сшитые полиэлектролиты-сополимеры содержат этилен и ангидрид малеиновой кислоты с содержанием боковых функциональных динизщих-алкил-амино-низших алкильных групп.

Основной сополимер, содержащий этилен и ангидрид малеиновой кислоты

-(АМК), получают взаимодействием этилена и ангидрида малеиновой кислоты в npHcyTCTBjjH перекисного катализатоpa в соответствующем растворителе. Сополимер предпочтительно содержит, основном, эквимолярные количества этленового и ангидридного остатков .

Основной сополимер типа АМК можно подвергать взаимодействию с низшим-алкил-амино-бис-низшим алкил-амином содержащим две первичные аминогруппы с получением попот--5чно сшитого сополимера типа АМК. боковые функциональные динизший-алкил-амино-низшие алкильные группы можно, добавлять в попречно сшитый сополимер путем взаимодействия динизшего-алкил-аминонизшего алкил-амина с частью всего количества остающихся ангидридных групп полимера типа АМК.

Предпочтительно полизлектролитсополимер также переводят в соль хлористоводородной кислоты.

Предпочтительной функциональной динизший-алкил-амино-низшей алкильной группой является диметиламинопропил, предпочтительным сшивающим агентом.- метилиминобиспропиламин.

Предпочтительным по.лиэлектролит.о.м -сополимером является такой, который содержит около 5 метилиминобиспропиламиновых сшивающих групп и около 90 боковых диметиламинопропиламиновых функциональных групп на 100 единиц ангидрида малеиновой кислоты в полимере типа АМК.

Могут быть использованы и другие сшивающие агенты, например дивинилбензол и этилендиамин, а также функ циональные группы, например диметиламиноэтил и диэтиламинобутил.

После адсорбции фактора IX фактор VIII, оставшийся в плазме, может быть далее концентрирован и вьщелен известными способами. Адсорбированны препарат на основе фактора IX легко выделяется путем элюирования из полиэлектролита-сополимера промывкой водным раствором хлористого натрия молярности приблизительно 1-3. Около 0,035 вес.% полиэлектролитного сопопимера, содержащего около 5 метилиминобиспропиламиновых сшивающих групп и. около 90 диметиламинопропиламиновых функциональных групп на 100 единиц ангидрида малеиновой кислоты, в сополимере типа АМК применяют для селективной адсорбции препарата на основе фактора IX при рН 8.

Адсорбированный препарат на основе белковых компонентов крови элюируют из полиэлектролита-сополимера промывкой 1,7 М- NaCl при рН б.Элюат затем диализируют против 0,1 М NaCl при и для хранения сушат замораживанием.

Пример 1. Полиэлектролит-сополимер, состоящий из продукта взаимодействия, в основном, эквимолярных частей этилена и ангидрида малеиновой кислоты (АМК), поперечно сшитого метилиминобиспропиламином (МИБПА), подвергают взаимодействию с диметиламинопропиламйном (ДМАПА) с получением около 5 С1х1ивающих групп - МИБПА и около 90 боковых групп ДМАПА на 100 еди|{иц ангидрида малеиновой кислоты в сбполимере типа АМК с переводом затем в соль .хлористоводородной кислоты. :

1 л обыкновенной плрзмы человека с помощью одномолярной;; гидроокиси натрия доводят, до рН 8, добавляя затем 0,35 г полиэлектролита-сополимера, после чего смесь|перемешивают 20 мин, фильтруют, и пфлучают фильт5 Рат в виде обедненной фактором IX

плазмы. Жмых промывают;дистиллированной водой для удаленияизвлеченного из плазмы белка.

Q Полиэлектролит-сополимер можно также подвергать взаимодеЯствии с помощью дивинилбензола 3 качестве средства, образующего поперечные связи, и диметил-аминоэти.памина в качествё поставщика функциональных групп. Можно также использовать этилендиами- но- и диэтиламинобутиламин в назван ных количествах.

Затем из полиэлектролитного сополимера элюируют препарат на-основе фактора IX., содержащего факторы II,. IX и X, промывкой 25 мл 1,7 М .хлористого натрия при рН 6 , о (рН доводят до этого значения 0,1 :М лимонной кислотой) в течение 20 . Сополимерный шлам фильтруют, фильтрат собирают в каче.стве желаемого состава на основе фактора IX. В серии семи повторных прогонов фракционирования по 1 л, с применением пpeдлaгae |oIo способа, получают в.среднем 483 ± 48 единиц белковых компонентов фактора IX на 1 л при степени чистоты с показателем 178 ±33.

Одной, единицей факт:|ора IX считается количеств.о этого фактора в 1 мл смешанной обыкновенно цельной плаз- . мы. Индекс степени чифготы рассчитывается как соотношение общего количества белка в исходнрй плазме и общего количества белка |в целом препарате, содержащем фактор IX, умноженное на соотношение едфчиц фактора IX целевом препарате на :основе фактора I X и единиц фактора I f в исходной

плазме.. ,

Пример -2. Применяют 0,4 г/мл полиэлектролит-сополи1 ера состава по примеру 1 для примешивания к обыкновенной человеческой плазме в течение

20 мин при рН 7,4 дляjвыделения препарата, содержащего фак|бр IX, аналогично способу примера I1.

В таблице приведен л результаты замеров адсорбции факторов в пересчете

на исходную плазму. i

Фактов

Адсорбция, %

Эти результаты говорят о высокой селективности относительно адсорбции факторов II,.1X и X при полном исключении факторов VII и VI И в пересчете на соответствующие количества этих факторов в исходной плазме.

Пример 3. Согласно описанному в примере 1 способу, сополимер, содержащий этилен и ангидрид малеиновой кислоты (АМК) поперечно сшитый метилиминобиспропиламином (МИБПД) и затем подвергаемый взаимодействию с ди.бутиламинобутиламином (ДБАБЛ) вместо диметиламинопропиламина (ДМАПА дает подобные результаты.

Предлагаемый способ позволяет получить препарат высокой степени чистоты.

Формула изобретения

1.Способ получения белковых компонентов крови путем адсорбции крови на поперечно сшитых полиЗлектролитах-сополимерах, содержащих этилен и

0 ангидрид малеинокой кислоты, с последующим элюированием целевого продукта с помощью физиологически приегллемой соли, отличающийся тем, что, с. целью повышения чистоты

5 препарата, жидкую плазму крови подвергают взаимодействию при рН 7,5-8,5 с полиэлектролитом в количестве от 0,025-0,1% с содержанием боковых динизших-алкил-амино-низших-алкиль0. ных функциональных групп.

2.Способ по п. 1, о т л и ч а. ющ и и с я тем, что динизшая-алкил-амино-низшая функциональная группа диметиламинопропил.

5

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Патент США № 3455001, кл. 260-112, 1969.