Способ выращивания культуры ткани высших грибов Советский патент 1981 года по МПК C12N1/38 

(54) СПОСОБ ВЫРАЩИВАНИЯ КУ.ПЬТУРЫ ТКАНИ ВЫСШИХ ГРИБОВ

- .. . . . ./. . Изобретение относится к области мнкрО Ы гической промышленности, а именно к иой чению биомассы вмсишх грибов. Известеи споссф выращШзиия культур ткаИИ высших грибов на жидкой питательной среае, содержащей источники углерода азота, необходимые М1шерапьные соли и стимулятор .роста t1. В качестве стимулятора роста испо1й зук г : (1 экстракт. .Недостатками этого способа ъыра имвуюяя культуры ткани высших грибов являются CpSBr нительио низкий выход мицелия и исполь; 6в11ние дорогостоящего дрожжевого экстракта. . .гее близким к предлагаемому является способ выращивания культуры ткани высши грибов иа жидкой питательной среДе ёодаржащей источники углерода, азота, мийеральньи срлй и нуклеотидсодержашие соединения в качестве стимулятора роста (21./ Согласно .известному способу из иуклеотц. содержащих соединений используют нуклеоэйЛдйфосфаты или нуклеозидтрифосфаты, конарыН являются, дорогостоящими.. . Цель, изобретения - удешевление спосооа. Это достигается тем, что в способе выращива н«я кудьту}Я 1 ткани вьюших Грибов на жидкой ггатательирй среде, соДфжащей источники угпероДа, азота, минеральные соли и нуклеотидсодаржавже соешшения в качестве стимулятора , предусмотрено использо зание: из нуклеотиДС Ьд п1саи{Их .соединений экстракта, включающего олягон леотиль и иуклеозидмонофосфаты, полученногопри удалении нуклеиновых кислот из биомассы высших грибогз, 1з количестве 0,О5-0,2вес.%. Суишость спос заключается в том, что в питательную среду для выращивания ткани высших грибов добавляют «уклеоткдсодержащий экстр9кт, получаемый в значительных количествах как отход npir де1 клеииизаи:ня биомассы мицелия высших грибов.: Денукле111шзацню биомассы проводят следукшщм о зом; Нагрев омассы осуществл1«ют в {(Ке стадии, первая из которых длится мия При С, рН 3,5-7,5;. вторая - мин при 80-90 С и рН ,5 (рН доводят соляной, серной или ортофосфорной кислотой). При этом между этими стадиями проводят инкубирование в течение 1,5-2 ч при 30-80°С, а после второй стадии нагревания рН повышают до 3,5-6,5 и проводят сепарирование, получая цепевой продукт (биомассу с пониженным содержанием нуклеиновых кислот) и супернатаит (нуклеотидсодержащий экстракт, включающий олигонуклеотиды и нуклезидмонофосфаты). Экстракт содержит продзтсть ферментативного гидролиза нуклеиновых кислот - нуклеотиды, а также соли и небольшое количество аминокислот и витаминов. Нуклеотидсодержащий экстракт добавляют в питлтельную .среду в жидком или высушенном виде в коли честве 0,05-0,2% по сухому весу. . Пример 1. Биомассу базидиального гриба Pleuorotus ostreatus (Fr) Kummer (вешенка обыкновенная) выращивают в колбах на качалке. Питательная среда имеет слеууюиат состав, вес.%: Этиловый спирт1,0 Азотнокислый аммоний0,3 Фосфорнокислый калий однозамещенный0,06 Фосфорнокислый калий двухзамещенный0,06 Нуклеотидсодержащий экстракт0,05 (АС Экстракт получают следующим образом. Биомассу мицелия (концентрация 100 г вла иого веса на 1 л среды) суспензируют в культуральной жидкости (рН 6,0) и нагревают 20 мин при 75°С, выдерживают 2 ч при 37°С и вновь нагревают до 85°С при рН 1,08 в течение часа (рН суспензии доводят соляной кислотой). После проведения стадии экстракци нуклеиновых кислот рН доводят до 3,5 и сепарируют. Полученный таким образом суперна тант содержит, вес.% от сухого вещества: Нуклеотидсодержащие вещества12 Аминокислоты5 Соли60 На 1 л среды добавляют 50 мл этого сртер натана, этиловый спирт вводят дробно (3 раза через 24 ч), выращивание проводят 72 ч при 26°С и рН 6,0. Концентрация биомассы через 72 ч составля ет 6,3 г/л, что соответствует выходу от этилового спирта 63%. Контролем служит аналогичное выращивание этого же .базидиального гриба на среде вышеуказанного состава с заменой нуклеотидсодержащего экстракта на дрожжевой экстракт. Концентрация биомассы в этом опыте через 72 ч составляет 3,06 г/л, т.е. 30,5% от внесенHOt-Q этанола. Пример 2. Культуру ткани гриба Pleuorotus ostreatus 1300 (вешенка обыкнове ная) выращивают в периодическом режиме в ферментере (с рабочей емкостью 200 л) с механическим перемешиванием (300 об/мин) при 26 С, рН 5,8-6,1 и аэрации 1 л воздуха на 1 л среды в минуту на питательной среде следующего состава, вес.%: Этиловый спирт2,0 Аммоний азотнокислый0,2 Мочевина0,07 Калий фосфорнокислый однозамещенный0,2 Магний сернокислый0,05 Кукурузный экстракт0,25 В контрольном опыте концентрация биомассы через 72 ч культивирования - 6,1 г/л (АСВ), содержание белка -г 33%, нуклеиновых кислот - 3,5%. Выращивание с добавлением нуклеотидсодержащего экстракта осуществляют в аналогичных условиях на среде вышеуказанного состава, с заменой кукурузного экстракта на нуклеотидсодержащий в количестве 2 г сухого вещества на 1 л питательной среды. Выход биомассы через 72 ч - 12,3 г/л (АСВ), содержание белка - 37%, нуклеиновых кислот -4,0%. Пример 3. Мицелий базидиального гриба Polyporus squamosus (Hunds et Fr) (трутовик чешуйчатый) выращивают в условиях, аналогичных примеру 1, за исключением того, что этиловый спирт добавляют в количестве 1,5%, а нуклеотидсодержащий экстракт в количестве 0,1%. Концентрация биомассы мицелия - 10,1 г/л, что соответствует выходу от этилового спирта 67,3%. Замена в питательной среде нуклеотидсодержащего экстракта на дрожжевой экстракт приводит к снижению выхода мицелия До 6,2 м/г (АСВ), то есть 41,3% от внесешюго этилового спирта. Пример 4. Мицелий гриба Polyporus squamosus (Hunds, Fr) вырашивают в условиях, аналотичных примеру 3, за искточением того, что экстракт грибов добавляют в количестве 0,05%. Накоплмше АСВ мицелия составляет 8,0 г/л, что соответствует выходу от этилового спирта 53,5%. Таким образом, предлагаемый способ вырацогаания культуры ткани BMCIUKX грибов является более дешевым, так как предусматривает замену дорогостоящих нуклеознддифосфатов и нуклеозидтрифосфатов на экстракт, содержащий более дешевые олигонуклеотиды и нуклеозидмонофосфаты. Формула изобретения Способ выращивания культуры ткани высших rptf6oB на жидкой питательной среде, содер5 8614006

жащей источники углерода, азота, минеральныевысших , в колкчеспе 0,05-

соли и нуклеотидсодержашие соединения в ка-0 2 вес.%.

честве стимулятора роста, отличаю-Источники информации,

щ и и с я тем, что, с целью удешевленияпринятые во внимание при экспертизе

способа, из нуклеотидсодержащих соединенийs 1. Патент Япошш № 5016433, кл. 36(2)

используют экстракт, включающий олигонуклео-В 221,2, опублнк. 1975.

тиды и нуклеозидмонофосфаты, полученный2. Авторское свидетельство СССР 1Г 644824,

при удалении нуклеиновых кнслот из биомассыкл. С 12 В 3/14, 1976.