Способ консервирования гепатоцитов Советский патент 1982 года по МПК A01N1/02 

(S) СПОСОБ КОНСЕРВИРОВАНИЯ ГЕПАТОЦИТОВ

Изобретение относится к медицине а именно к способам консервирования клеток, выделенных из тканей. Известен способ консервирования гепатоцитов в питательной среде, содержащей криопротектор с последующим охлаждением клеток до ультранизких температур по четырехэтапной програм ме, где первый этап-охлаждение клето ной суспензии до ТОМКИ замерзания, четвертый этап-охлаждение до температуры жидкого азота ЕП . Однако замораживание по такой программе приводит к гибели тканевых клеток печени, а именно к снижению скорости эндогенного дыхания и разобщению процессов окисления и фосфорилирования в митохондриях гепатоцитов. Цепь изобретения - повышение жизнеспособности клеток. Цель достигается тем, что при осуществлении способа консервирования гепатоцитов в питательной среде, содержащей криопротектор с после дующим охлаждением клеток до ультра- , низких температур по четырехэтапной программе, при этом на первом этапе охлаждают клеточную суспензию до точки замерзания, и на четвертом этапе - до температуры жидкого азота, клетки печени на втором этапе замораживания охлаждают с 2-4 С до -6 - -8°С со скоростью 20-27 С в мин в течение 0,1-0,6 мин и на третьем этапе с -6 - до -30 - со скоростью в мин в течение 6-12 мин. Способ осуществляется следупцим образом. Выделенные из печени изолированные клетки суспендируют в среде, содержащей 250 мМ сахарозы, 5 мМ хлористого калия (КС 1) , О, мМ фосфата калия однозамещенного (KHjPQI , О, мМ фосфата натрия двухзамещенного (HajHPtH,) , 2 мМ дитиотреитола, 2 мМ этилендиаминтетраацетата (ЭДТА).