1
Изобретение относится к клеточной биологии и может быть использовано в медицине и ветеринарии для длительного переживания и сохранения in vHro клеток млекопитающих.
Известен способ хранения культур животных и человека в поддерживающей среде. Поддерживающая среда содержит 4О% человеческой сыворотки и 00% раствора Хенса. Перед помещением клеток в .поддерживающую среду их предва- рительно пассируют ll .
Способ характеризуется недостаточной длительностью переживания культуры клеток животных и человека, обусловленной резким падением рН, что неблагоприятно влияет на переживание клеток.
Цель изобретения - увеличение длительности переживания клеток.
Поставленная цель достигается тем, что в способе хранения культур клеток животных и человека в поддерживающей среде, в качестве поддерживающей среды используют ультрафильтрат сывороточной
ростовой среды, содержащей компоненты с молекулярным весом до 14 тыс. дальтон.
Ультрафильтрацией свежей сьтороточ- ной ростовой среды удаляют компоненты сыворотки крови, имеющие молекулярный вес более 14 тыс, дальтон, которые стимулируют рост клеток. При этом сохраняются все компоненты сыворотки, которые необходимы для поддержания .
10 жизнеспособности клеток. Этим достигается наибольшая близость вещественных составов ростовой и поддерживающей сред.
В таблице приведены данные о про15верке жизнеспособности клеток после хранения с указанием процента живых клеток по сравнению с исходным количеством в предлагаемом и известном способах.
20
Пример. Ростовую питательную среду Игла, содержащую .10% сыворотки крови крупного рогатого скота, пропускают через стерильный мембранный фильтр с диаметром пор 20 нм, В результате получают ультрафильтрат с мол, весом компонентов до 1.4 тыс. Дальтон.
Клетки переживаемой культуры фиб- робластов ВНК-21 в количестве 150 тыс на 1 мл помещают в ростовую питатель- 1ую среду Игла с 10% сыворотки круп ного рогатого скота (общий объем 7,5мл Через 2 дня ростовую среду меняют на поддерживающую, в качестве которой используют ультрафильтрат ростовой среды и инкубируют при . При еже.недельной смене среды срок переживания достигал 40 сут. Жизнеспособность клеток определяют с помощью раствора трипанового синего, а также по интенсивности клеточного роста после консервации. Количество клеток подсч тывают с помощью камеры Горяева.
Пример 2. Клетки первичной культуры, полученные трипсинизацией почечного эпителия эмбриона человека, в количестве ЗОО тыс. клеток на 1 мл
помещают в ростовую среду 199 с добавлением 1О%-ной сыворотки крупного рогатого скота (общий объем 7,5 мл). Через 2 дня ростовую среду меняют
на поддерживающую, в качестве которой используют ультрафильтрат ростовой среды с мол. весом компонентов до 14 тыс. дельтой и выдерживают при 37°С. Ультрафильтрат ростовой среды получают
способом, описанным в примере 1. Определение жизнеспособности клеток осуществляют так же, как в примере 1. При еженедельной смене среды срок переживания клеток культуры достиг 45 сут.
Использование предлагаемого способа позволяет увеличить длительность переживания культуры клеток животных и человека в 1,3 1,5 раза с сохранением большого процента жизнеспособных клеток, Крома того, способ является простым, перед хранением не требует длительной предварительной подготовки культуры клеток.
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| Способ хранения культуры клеток животных и человека | 1984 |
|
SU1199796A1 |
| КОНСЕРВАНТ ДЛЯ ХРАНЕНИЯ ПЕРЕВИВАЕМЫХ КЛЕТОК | 1991 |
|
RU2036234C1 |
| ВНК-21/13-13-ПЕРЕВИВАЕМАЯ МОНОСЛОЙНО-СУСПЕНЗИОННАЯ СУБЛИНИЯ КЛЕТОК ПОЧКИ НОВОРОЖДЕННОГО СИРИЙСКОГО ХОМЯЧКА, ПРЕДНАЗНАЧЕННАЯ ДЛЯ РЕПРОДУКЦИИ ВИРУСА ЯЩУРА И ВИРУСА БЕШЕНСТВА | 2014 |
|
RU2553552C1 |
| КОМПОНЕНТ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ КЛЕТОК МЛЕКОПИТАЮЩИХ | 2015 |
|
RU2588666C1 |
| ВНК-21/13-02-перевиваемая монослойно-суспензионная сублиния клеток почки новорожденного сирийского хомячка, предназначенная для репродукции вируса ящура и вируса бешенства | 2005 |
|
RU2614074C1 |
| ВНК-21/13-02 - ПЕРЕВИВАЕМАЯ МОНОСЛОЙНО-СУСПЕНЗИОННАЯ СУБЛИНИЯ КЛЕТОК ПОЧКИ НОВОРОЖДЕННОГО СИРИЙСКОГО ХОМЯЧКА, ПРЕДНАЗНАЧЕННАЯ ДЛЯ РЕПРОДУКЦИИ ВИРУСА ЯЩУРА И ВИРУСА БЕШЕНСТВА | 2005 |
|
RU2300562C2 |
| ШТАММ ДИПЛОИДНЫХ КЛЕТОК ЛЕГКОГО ПЛОДА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА ДЛЯ РЕПРОДУКЦИИ ВИРУСОВ | 2012 |
|
RU2515915C1 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОМБИНИРОВАННОЙ БИВАЛЕНТНОЙ, КУЛЬТУРАЛЬНОЙ, ИНАКТИВИРОВАННОЙ, КОНЦЕНТРИРОВАННОЙ, ОЧИЩЕННОЙ ВАКЦИНЫ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ГЕМОРРАГИЧЕСКОЙ ЛИХОРАДКИ С ПОЧЕЧНЫМ СИНДРОМОМ | 2009 |
|
RU2445117C2 |
| ШТАММ КУЛЬТИВИРУЕМЫХ КЛЕТОК ПОЧКИ ORYCTOLAGUS CUNICULUS L ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ВИРУСОВ ЖИВОТНЫХ | 1994 |
|
RU2065496C1 |
| СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ БЛЮТАНГА КРУПНОГО И МЕЛКОГО РОГАТОГО СКОТА (ВАРИАНТЫ) И ВАКЦИНА ПРОТИВ БЛЮТАНГА КРУПНОГО И МЕЛКОГО РОГАТОГО СКОТА | 2008 |
|
RU2391114C1 |
ВНК-21
Первичная культура почечного эпителия
эмбриона человекаФормула изобретения Способ хранения культур клеток raiвотных и человека в поддерживающей среде, отличающийся тем, что, с целью увеличения длительности переживания клеток, в качестве поддеряшвающей среды используют ультрафильт сывороточной ростовой ереды, содержа50
50
34 щей компоненты с молекулярным весом до 14 тыс. дальтон. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Авджапаридзе О. Г. и др. Культура ткани в вирусологических исследованиях. М., Изд. медицинской литературы, 1962, с. 101 - 102.
