Способ хранения культуры клеток животных и человека Советский патент 1985 года по МПК C12N5/00 

9

Г-

СПОСОБ ХРАНШИЯ КУЛЬТУРЫ КЛЕТОК ЖИВОТНЫХ И ЧЕЛОВЕКА в ростовой среде, отличающийся тем, что, с цепью увеличения длительности переживания клеток, клеточщто культуру предварительно выдерживают в питательной среде, содержащей 0,05-0,1% масляного раствора каролшоидов в виде субмикронной змульсии, в течение 1-2 суток.

О

;о

СО

о Изобретение относится к биологии и може быть использовано в биотехнологии, медицин и BCTepifflapHH для обеспечения переживания и сохранения клеток животных и человека. Цель изобретения - увеличение длительнос ти переживания клеток. Пример 1. Хранение культуры кле-ток фибробластов ВНК-21. - Готовят 1%-ную субмикронную эмульсию . комерческого масЛй ого раствора витамина А (содержащего витамина А или 25(00 м. ед. в 1 мл) путем экструзии смеси 9 -мл среды Игла ( Хенкса), 1 мл масляного, расувора витамина А и 0,1 мл фосфодшидаДилн-нроксанола), который доба ЛЯЮ1 дан получения устойчивой эмульсии, на дезинтеграто1)е клеток микроорганизмов (ДКМ-1) до получения эмульсии с размером частиц 0,1-0,2 мкм. Получетгую субмикронную эмульсикГ добав ляют в количестве 0,1% (т.е. 0,01% исходного масляного раствора витамина А) в питательную среду Игла, содержащую 10% сыворотки крупного рогатого скота, куда затем вносят выращеннуй культуру клеток фибробластов ВНК-21 в количестве 2 10 кл/мл и вырапдивают в этой среде в течение 24 ч. при 37°С. ; Затем выдер;ка1шые в такой среде клетки переносят в обычную для фибробластов росховзю питательную среду Игла с 10% сыворотки крупного рогатого скота и хранят в ней лри З7с без смены питательной среды. В этих условиях клетки сохраняют свою жизнеспособность в течение 50 сут. Жизнеспособность клеток определяют с помощью прижизненной окраски 0,1%-ным раствором акридинового оранжевого и нейтрального красного в течение 1-2 мин. Количество ; живых клеток после хранения предлагаемым способом составляет 50%. .Пример 2. Хранение культуры кле ток зпидермоцитов человека. ; Готовят 1%-ную субмикрогщую эмульсию комерческого масляного раствора смеси витаминов А и. Е аналогично примеру I, и добавляют ее в количестве 0,5% (т. е. 0,005% исходного масляного раствора) в питательную среду 199, содержащую 20% фетальной сыворотки крупного рогатого скота. Выращенную культуру клеток кератиноцигов человека вносят в полученную среду в количестве 210 кл/мл и выдерживают в ней в течение 48 ч при 37°С. Затем выдержанную таким образом культуру переносят в питательную среду 199, содержащую 20% фетальной сыворотки крупного рогатого скота, и хранят в ней при 37 С ;без смены питательно среды. В этих условиях клетки сохраняют свою жизнеспособность в течение 160 сут. Kojraчество жизнеспособных клеток после хранения составляет 50%. Жизнеспособность определяют аналогично приржру 1. Пример 3. Хранение культуры клеток почек эмбриона человека. Готовят 1%-ную субмикрош1ую эмульсшо комерческого облепихового масла (содержит 230-300 мг каротнноидов: об, Д , V -каротины, ликонин, зеаксантин, фитофлюин и т. д.) аналогипга примеру 1 и добавляют ее в количестве 1% (т.е. 0,01% исходного облепихового масла) в питательную среду 199, содержащую 10% сыворотки крупного рогатого асота. Первичную культуру клеток почечного эпителия эмбриона человека в количестве кл/мл помещают в приготовленную среду и выдерживают в ней при 37°С в течение 24 ч. Затем эти клетки переносят для хранения в обычную ростовую питательную среду 199 с 10% Сыворотки/ крупного рогатого скота и хранят в. ней при 37 С без смены питательной среды. . В этих условиях клетки сохраняют свою :. жизнеспособность в течение 90 сут. Жизнеспо собность клеток определяют аналогично примеру 1. Количество живых клеток после хранения их в течение 90 дней составляет 50%.