Способ определения специфического белка Советский патент 1982 года по МПК A61K39/00 

(5) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СПЕЦИФИЧЕСКОГО БЕЛКЛ

Изобретение относится к медицине, а именно к способам выявления специфической адсорбции белков.

Известен способ определения специфического белка путем адсорбции антигена последующим контактированием адсорбированного антигена с исследуемым материалом, содержащим специфический белок Cl

Однако известный способ сложен, требует длительных измерений и обработки полученных результатов (от 2 ч до 2 суток) и не обеспечивает необходимой чувствительности при измерениях (чувствительность до Ю мг/мл)

Цель изобретения ускорение и повышение чувствительности способа.

Эта цель достигается тем, что при осуществлении способа определения специфического белка путем адсорбции антигена с последующим контактированием адсорбированного антигена с исследуемым материалом, содержащим пецифический белок, адсорбцию антигена осуществляют на поверхность регистрирующего датчика и по изменению теплофизических характеристик . датчика до и после контакта с исследуемым материалом определяют наличие специфического белка.

Способ осуществляется следующим образом.

В начале проводят адсорбцию антигена на стеклянную поверхность датчика, например, терморезистора, а затем регистрируют адсорбцию специфических антител. Для этого датчик, с предварительно очищенной поверхностью, погружают в раствор антигена, извлекают его, промывают поверхность в дистиллированной воде и помещают в физиологический раствор. Включают рабочий ток и по дост ижении стационарного режима работы датчика добавляют антисыворотку. В случае специфической адсорбции антисыворотки на поверхность датчика, нагруженного антигеном, наблюдают кинетическую 39 кривую, которую сравнивают с контрольной. Контрольную кривую получают для тех же сывороток, предварительно истощенных или неспецифичных к данному антигену. С ростом толщины адсорбционного слоя ухудшается от вод тепла от стеклянной поверхности датчика, увеличивается температурный градиент среды в приграничном слое поверхности датчика и уменьшается его сопротивление, что отмечается на регистрирующем устройстве. Адсорбция молекул А - например, на стекле приводит к почти полной потере активности антисыворотки, поэтому помещение такой поверхности в раствор с антигеном не дает нанесения п толщине адсорбционного слоя, что готов об отсутствии специфической адсорбции При этом при адсорбции антигена на поверхности стекла адсорбционный слой всегда мономолекулярный и плот ность его зависит от концентрации а тигена. Пример 1. Определение адсорбционной скорости взаимодействия эталонной сыворотки крови человека со специфической антисывороткой (кр личьей) против UgG человека. Стеклянную поверхность терморезистора (например, типа МТ-З) тщательно очищают, помещают в кювету с антиге ном известной концентрации 8 X10 мг/мл и составляют на 30 мин, затем вынимают, 10-15 раз промывают в дистиллированной воде и погружают в термостатируемую кювету с физиоло гическим раствором (0,9% NaCi) в об еме 1 мл и включают рабочий ток ,810,05 мА для терморезистора МТ-5. Через 1-2 мин после установления стационарного режима работы терморезистора, регистрируют сопротивление RQ в нагруженном антигеном состоянии. Затем добавляют 0,02 раствора специфической антисыворотк против IgG человека в разведении 1:4000 и регистрируют изменение сопротивления терморезистора со време нем t в результате спеЧАифической ад сорбции макромолекул аитисыворотки с антигеном. Пример 2. Определение скорости адсорбционного взаимодействия предварительно истощенной антисыворотки против IgG человека и специфи ческого антигена (эталонной сыворот ки крови человека).Опыт проводился по предлагаемому способу, только в физиологический раствор добавляют предварительно истощенную антисыворотку против DgG человека. В результате многократных добавлений антигеяа (до 0, мл) не наблюдали изменения сопротивления терморезистора, что указывает на отсутствие специфической адсорбции антигена с предварительно истощенной специфической антисывороткой . Пример 3- Определение специфической адсорбции иммуноглобулинов класса 3gG в сыворотке крови иммунодефицитного больного до и после иммуноглобулинотерапии. Опыт проводился по предлагаемому способу, однако, после добавления 0,02 мл сыворотки больного через 30 мин изменение сопротивления терморезистора прекращается и устанавливается на новом равновесном уровне, что указывает на прекращение процесса адсорбции иммуно-лобулинов. Определенные значения уровня адсорбцируемых иммуноглобулинов оказались для больного и 5-10 мг/мл до и после иммуноглобулинотерапии. Таким образом приведенные исследования с помощью предлагаемого способа показали, что способ позволяет сократить время исследования до 5 15 мин, повысить чувствительность до 5-10 мг/мл концентрации исследуемых реагентов, выявить наличие и скорость специфической адсорбции белков, что увеличивает производительность опытов 5-6 раз, а также существенно упростить постановку и проведение исследований, при этом разброс данных, полученных предлагаемым способом, не превышает 5, что обеспечивает высокую надежность и достоверность результатов. Формула изобретения Способ определения специфического белка путем адсорбции антигена с последующим контактированием адсорбционного антигена с исследуемым материалом, содержащим специфический белок, отличающийся тем, что, с целью ускорения и повышения чувствительности способа, адсорбцию антигена осуществляют на поверхность регистрирующего датчика и по изменению теплофизических характеристик датчика до и после контакта с иселе59083606

дуемым материалом определяют наличие 1. Rothen А, Еlepsometrlc stuспецифического белка.dies of thin fi 1ms,tJ.Progress in

Источники информации,surface and membrane scfene. 8,10,

принятые BO внимание при экспертизе 197