1
Изобретение относится к генетике )астений и может быть использовано в сельском хозяйстве.
Изветен способ исследований мутагенной активности пестицидов при их воздействии на корневую систему растений путем анализа выхода количества и типов хромосомных аберраций HJ.
Известный способ не позволяет получать сравнимые данные о характ ере и направлении мутагенного действия НС следуемого вещества, так как в каждом конкретном случае результат зависит от модели объекта, условий эксперимента (генотипа исследуемого растения, фазы определения мутагенного воздействия и других факторов).
Известен также способ выявления мутагенной активности химических соединений на высших растениях, который заключается в том, что химическими соединениями обрабатывают сухие семена или корешки ячменя (1-2 мм) с последующим анализом хромосомных
аберрацмй (ХА) в первом после обработки митозе 21.
Однако указанный способ не может служить в качестве тест-систела, так как в качестве объекта используется материал не проверенный по известное ти к мутагенному воздействию (любой сорт), а потому получаемые данные нельзя распространять на другие формы данного вида. Время от обработки до (ксации так же является оптимальным для. тест-системы..В числе показателей чмутагенного действия не учитывается количество микроядер.
Целью изобретения является создание тест-системы для выявления отрицательного воздействия пестицидов на растения сокращения времени тестирования и получения сравнимых результатов.
Поставленная цель достигается тем, что в качестве тест-объекта используют линию ячменя с повышенной чувствительностью к мутагенному действию пестицидов, учет последнего осуществляют на шестом часу после . , отработки по числу микроядер а интер фазных клетках корневой меристемы. Способ осуществляется следующим образом. Семена ячменя чувствительной линии Orange lemma и устойчивой к пестициду формы Московский 121 прора щивают при 23-25 0 в течение 35 ч. Проростки помещают на ч в суспензии или растворы исследуемых пестицидов с концентрациями,. близкими к производственным. Через k ч проростки отмывают и переносят на свежую фильтровальную бумагу.. Затем на шестом часу после начала обработки пророст ки фиксируют в смеси Карнуа. Из корешков готовят давленые препараты, переводят их в постоянные и учитывают выход хромосомных аберраций в митозе и число микроядер в интерфазных клет ках. Указанный способ за счет использо вания чувствительной, формы позволяет получить максимально возможный выход хромосомных аберраций, что достигается за минимально необходимое для этого время 6ч. Для обоснования времени фиксации проведено изучение выхода хрр юсойны аберра14ий во времени после обработки Фиксацию проводили через каждые 2 ч в течение 28 ч. Пик выхода хромосомных аберраций при фиксации материала наблюдается от 6 ч до 12 ч, второй от 22 ч до 28 ч. В контроле не отмечено четко вйраженных пиков ХА. Поскольку уровень ХА на шестом часу после обра1ботки достигает максимальной величины, то именно это время было взято как минимально необходимо для достижения цели. Для повышения эффективности спосо ба была исследована чувствительность разных форм ячменя к пестицидам. Хромосомные анамалии1 в меристеме корешка у разных линий ячменя после обработки пестицидами (на примере сай фоса) приведенй в табл. 1. Подобные данные получены для других пестицидов..различных химических групп. По выходу хромосомных аберраций .наиболее чувствительной к пестицидам (хлорофос, ДДВФ, севин, Сайфорс, тио |дан, рогор, гардона и др.) оказалась линия Organge lemma. Предлагаемый способ определения цитогенетйческой активности пестицидов был исследован на пестицидах различных химических групп (хлорорганические, фосфорорганические, карбаматы, азотсодержащие, хлорфенрксиуксусгп ные кислоты, производные мочевины, триазины и др.). Пример 1. Берут по 20 про- ростков ячменя линии, чувствительной к пестициду, 35часового возраста, по две повторности опыта и контроля. Проростки опытного варианта выдержива ют в течение ч в водном растворе хлорффоса, проростки контрольного варианта - в воде. Затем проростки отмывают водой от пестицида. Для накопления х)омосомных аберраций проростки в чашках Петри помещают в термостат при 23-25 С. Через 6 ч проростки фиксируют в смеси Карнуа и готовят препараты по общепринятой цитологической методике с окраской препаратов кармином или по Фельгену. Проводят анализ меристемы корешков у 10-12 проростков. На каждом препарате учитывают число интерфазных клеток число клеток на разных фазах митоза, число клеток с аберрациями на разных фазах митоза, число клеток с микроядрами. Полученные данные приводятся в табл. 2. Определяют сумму клеток на всех просмотренных препаратах. Высчитывают величину митотического индекса (МИ), фазового индекса (ФИ), хромосомных аберраций (ХА) в ана-и телофазе, число микроядер на клетку в опытном и контрольном варианте. П р и м е р 2. Берут такие же как в примере .1 проростки ячменя, но проростки опытного варианта выдерживают в течение 4 ч в суспензии сайфоса. Далее- все операции проводят так, как указано в примере 1. Полученные данные сведены в табл.ЗПодобным образом в данной системе проверена мутагенная активность пестицидов различной химической природы: хлорорганических -Jгиoдaнa, карбаматов - севинфосфороргйнических рогора, гардоны, ДДВф, и другие. Все Указанные пестициды, за исключением гардоны. повышали количество хромосомных аберраций.
Таблица 2
tVSlO 5,,36 Хлорофос 5,1lQ 7,,36 Контроль
6,0.10
18 16 5,
Т a б л и ц a 3
2,,2 26,,7 12, 3,5
0,8
4,,2 25,,0 1,,7 2A,6tb5 7,Oil,5 2,0 20,,8 0,7±0,2 0,8 Формула изобретения Способ выявления мутагенной акт ности пестицида, включающий обрабо ку проростков ячменя пестицидом с последующим учетом количества хромосомных аберраций в митозе, о тли.чающийся тем, что, с целью создания тест-системы для вы ления отрицательного воздействия пестицида, на растения, сокращения времени тестирования и получения сравнимых результатов, в качестве тест-объекта используют линию ячме 198 ня с повышенной чувствительностью к мутагенному действию пестицида, учет последнего осуществляют на шестом часу после обработки по числу микроядер в интерфазных клетках корневой ме)эистемы растения. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе I.Arcara P.6. Rohchl U.N. Caryoiogia, 1967, v.20, If 3. , 2. Гемев К.И. Доклады Болгарской академии наук, 1977, т.30, 3 (прототип).
