Способ определения альдостеронсвязывающей способности белков плазмы крови Советский патент 1982 года по МПК G01N33/48 

1

Изобретение относится к медицине, а именно к способам диагностики заболеваний, протекающих с нарушением альдостероновой системы.

Известен способ определения альдостеронсвязывающей способности белков плазмы крови путем инкубирования пробы плазмы с меченым альдостеро- ном с последующим отделением несвязанного альдостерона и измерения радиоактивности супернатанта L11.

Однако известный способ недоста- . точно специфичен, что снижает точность и ведет к неправильным результатам диагностики.

Цель изобретения - повышение специфичности способа.

Эта цель достигается тем, что согласно способу определения альдостеронсвязывающей способности белков плазмы крови путем инкубирования пробы плазмы с меченым альдостероном с последующим отделением несвязанного альдостерЬна и измерения радиоактивности супернатанта, в пробу перед инкубирОванием добавляют кортикостерон, а инкубацию ведут в физиологическом режиме в течение 2-3 ч.

Способ осуществляют следующим образом.

Производят забор венозной крови, а затем отделяют плазму. К 0,1 мл плазмы добавляют 0,1 мл фосфатного буфера рН , 0,1 мл .раствора 14 С - альдостерона и 0,1 мл раствора немеченого кортикостерона. Пробу инкубируют 2-3 ч при ЗУС, периодически помешивая, и после определения общей радиоактивности в 0,02 мл пробы в нее добавляют по 0,4 мл суспензии углядекстрана. После 10-минутной инкубации на льду пробу центрифугируют и супернатант пробы переносят в счетную камеру для измерения радиоактивности. Связанный альдостерон вычисляют как процент от общей радиоактивности в пробе без кортикостерона.

39226364

Шщее связывание . имп/мин связанного альдостерона .

имп/мин общей радиоактивности Неспецифическое связывание с альдостеронсвязывающим белком определяют путем вычитания специфического связывания из общего. Специфическое связывание с альдостеронсвязывающим белком получают по радиоактивности в пробах с добавленным кортикостероном Для определения связывания меченого альдостерона белками плазмы требуется две параллельные пробы по 0-1 мл плазмы, в которые добавляется фосфатный буфер (рН 7,6) .(0,2 мл в одну Пробу и 0,1 мл в другую), затем во все пробы добавляется меченый аль- достерон в 0,1 мл фосфатного буфера, а во вторые пробы - 0,1 мл кортикостерона 1 мкг в 0,1 лn фосфатного буфера). Используется - альдостерон фирмы Амершам, уд.акт.55 мк/м. В пробу вводит 10-20 тыс.имп./мин, что соответствует 6-8-10 М или 20-40 пг. Добавление возрастащих коимп/мин связанного альдостерона связывание - /мин общей радиоактивности

Специфическое связывание с АСГ рассчитывают по формуле впробах с добавлением кортикостерона. Неспецифическое связывание странскортином, определяют путем вычитания специфического связывания из общего. Результаты исследования связывающей способности белков плазмы крови у здоровых и больных первичной артериальной гипертонией детей, у крыс трех возрастов и у здоровых кроликов показали, что у детей с первичной артериальной гипертонией увеличено специфическое и особенно транскортиновое связывание альдостерона. Принимая во внимание тот факт, что связанный с белком гормон не подвергается мет.аболизму в печени, определение связывающей способности белков плазмы позволяет определить одну из сторон метаболического клиренса альдостерона. Увеличенное связывание альдостерона у детей с первичной артериальной гипертонией указывает на уменьшение у них метаболического клиренса альдостерона по сравнению со здог ровыми детьми. У крыс связывание возрастает, что предполагает уменьшение метаболического клиренса альдостерр100.

на. Это в основном специфическое свя:зывание в, отличии от кроликов, у которых альдостерон в большей степени связывается с транскортином, с возрастом - у крыс.

Таким образом, использование предложенного способа повышает его специфичность, точность диагностики заболеваний, протекающих с нарушением альдостероновой системы. При этом способ прост и сокращает сроки исследования проб.

Формула изобретения

Способ определения альдостеронсвязывающей способности белков плазмы крови путем инкубирования пробы плазмы с меченым альдостероном с последующим отделением несвязанного альдостерона и измерения радиоактивности супернатанта, отличающийс я тем, что, с целью повышения специфичности способа, в пробу перед инкубированием добавляют кортикостерон, а инкубацию ведут в физиологическом режиме в течение 2-3 ч. личеств С - альдостерона приводит к соответствующему увеличению связывания гормона белками, в результате чего сохраняется один и тот же процент связывания, который в данной системе является константной величиной. Пробы Инкубируют 2 ч при 37 с, периодически помешивая, и после определения общей радиоактивности в 0,02 мл каждой пробы добавляют по 0, мл смеси угля-декстрана (0,4 декстран - 80 и % активированный уголь марки Norit-A) в фосфатном буфере. После 10 - минутной инкубации на льду пробы центрифугируют при 2500(j и в надосадочной жидкости определяют .радиоактивность на р-счётчике Mark-Ill после добавления сцинтилляционной жидкости с тритоном Х-100. Общее связывание альдостерона с белками плазмы рассчитывают как процент от общей радиоактивности в пробе без ,кортикостерона.

5 9226366

Источники информации,Lebel II. Dynamik aldosterone and

принятые во внимание при экспертизе.18-hydroxydeoxycorticosterone stu1. Nowaczynski W., Kuchel 0.,dies in labile and stable benign esGenest Т., Messerli F.H., Honda M.,sential hypertension. T. of Steroid

Tolis G., Seth K., Parvin-Pande R.,,5 Biochemistry, 1975, v. 6, N 5,

Kufo S., Grosse Т., Ledoux F. andpp. 767-778.