Способ диагностики миастении Советский патент 1992 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, а именно к эндокринологии, неврологии и грудной хирургии, и может быть использовано для диагностики миастении.

Целью изобретения является повышение точности диагностики.

Способ осуществляют следующим образом: у больного определяют содержание соматотропного гормона (СТГ), пролактина (П), Т-РОК общих лимфоцитов (Т-Л) и Т-РОК активных лимфоцитов (аТ-Л), рассчитывают диагностический коэффициент по соотношению произведения количества Т-Л на концентрацию П и на 0,01 к произведению содержания аТ-Л на концентрацию СТГ и при величине диагностического коэффициента большем 2,4 диагностируют миастению.

Для определения уровня пролактина крови используют набор НК (СЕА-1 RE- Sorln), содержащий стандартный препарат пролактина, пролактин, меченный J1 1, антисыворотку к пролактину, иммуносорбент, 0,05 М фосфатный буферный раствор, твин- 20. Плазму для тестирования берут в натив- ном виде или разбавляют фосфатным буферным раствором. Из основного раствора стандарта и рол актин а (50 нг/мл) последовательным разведением в фосфатном буферном растворе готовят еще шесть растворов для построения стандартной кривой 20,10,5,2,1 иО,5нг/мл. В тест-пробирки вносят 0,1 мл исследуемой плазмы, 0,1 мл буферного раствора,0,1 мл раствора меченого гормона и 0,1 мл антисыворотки к пролактину. Для контроля связывающей способности готовят нулевые пробы (0,2 мл буферного раствора 0,1 мл меченого гормона и 0,1 мл антисыворотки) и пробы на общую радиоактивность (0,1 мл меченого пролактина). Пробирки инкубируют при комнатной температуре в течение 18-20 ч, по окончании инкубации добавляют по 0,5 мл суспензии иммуносорбента, которую при этом непрерывно перемешивают с помощью магнитной мешалки. Пробирки закрепляют во вращающемся штативе и содержимое перемешивают в течение 5 ч при комнатной температуре. Пробы центрифугируют 10 мин при 2500, супернатант отсасывают водоструйным насосом. Осадок промывают 2 2,5 мл фосфатного буферного раствора, содержащего 0,5% твина- 20, повторно центрифугируют и удаляют супернатант. Радиоактивность осадков и пробы на общую радиоактивность измеряют в стинсо

с

VI VI оо ч о

Јь

тилляционном гамма-счетчике Связывание меченного гормона в нулевых пробах составляет 15-30% Вычисляют процентное отношение радиоактивности проб к радиоактивности нулевой пробы и строят стандартную кривую, по которой затем находят искомое содержание пролактина в пробе и с поправкой на разведение в плазме

Уровень СТГ определяют при помощи набора, содержащего стандарт соматотро- пина человека. Соматотропин,меченый J антисыворотку к СТГ, преципитирующую кроличью антисыворотку против у-глобули- нов морской свинки, боратный буферный раствор. Плазму гепаринизированной крови разводят буферным раствором в три раза или больше в зависимости от ожидаемого уровня СТГ. Из основного раствора стандарта СТГ готовят последовательным разведением в буфере растворы со следующими концентрациями гормона 5, 2,5, 1,25 и 0,5 нг/мл. В 1-2-ютест-про,бирки вносят по 0,1 мл буфера (нулевые пробы), в 3-12-ю по 0,1 мл стандартных растворов немеченого гормона, в остальные по 0,1 мл разведенной плазмы. Во все пробирки добавляют по 0,1 мл антисыворотки Содержимое перемешивают, инкубируют 6 ч при 37°С, после чего по все пробирки вносит по 0,1 мл меченого СТГ. Инкубируют 18 ч при 37°С. Во все пробирки добавляют по 0,1 мл преципитирующей антисыворотки. Пробирки встряхивают и инкубируют 1 ч при 37°С, центрифугируют 10 минут при 2000, супер- натант декантируют. Преципитат промывают 0,5 мл буферного раствора, центрифугируют и декантируют. Радиоактивность преципитатов измеряют в сцин- тилляционном гамма-счетчике Вычисляют процентное отношение радиоактивности проб к радиоактивности нулевой пробы и по стандартной кривой с поправкой на разведение плазмы находят искомую концентрацию СТГ.

Для количественного определения Т- лимфоцитов используется тест спонтанного розеткообразования, заключающийся в присоединении эритроцитов барана к лимфоцитам и периферической крови человека Для постановки данной реакции лимфоциты выделяют из цельной гепаринизированной крови в градиента плотности верографин- фиколла. Смесь готовят, прибавляя 9,68 г. фиколла к 20 мл 76% верографина и 132 мл горячей дистиллированной воды. Полученную из локтевой вены кровь (2-3 мл) разводят двукратно раствором Рингера и наслаивают на 2 мл приготовленного фиколла. Уравновешенные для фракционирования крови центрифугируют 20 мин при

1500об/мин. В результате центрифугирования эритроциты с гранулоцитами оседают на дно, сверху остается лимфоцитарное кольцо и надосадочная жидкость. Надосадочную жидкость сливают, лейкоцитарное кольцо отсасывают шприцем и переносят в другую пробирку Лимфоциты отмывают дважды питательной средой и подсчитывают количество клеток Горяева. Для непосредственной постановки реакции к 1 мл лимфоцитарной взвези добавляют 0,1 мл эритроцитов барана, приготовленных следующим образом: к 5 мл питательной среды 199 прибавляют 0,025 мл (1 капля) отмытых

эритроцитов барана, инкубируют в термостате при 37°С в течение 5 мин. Центрифугируют 5 мин при 1500 об/мин. Готовят нативный препарат под покровным стеклом и подсчитывают Т-РОК активные клетки под

световым микроскопом. Инкубируют в холодильнике при температуре 4°С 6 мин. Подсчитывают Т-РОК активные клетки.

Путем вычисления диагностического коэффициента определяют наличие или отсутствие у больного миастении. Диагностика миастении считается достоверной при К 2,4, коэффициент является специфичным для данной патологии.

Пример. Больной М., 28 лет, поступил

с жалобами на мышечную слабость, периодически возникающие приступы удушья. Больной анастезирован. Неоднократно обследовался ранее, диагноз установлен не был. Осмотрен невропатологом - заподозрено наличие у больного миастении, рекомендовано дифференцировать с миастеническими синдромами миастению. При диагностике миастении по содержанию цинка в моче больного диагноз лодтвержден не был. Проведено комплексное обсле- дование больного, включающее определение уровня П, СТГ, Т-Л, аТ-Л крови. Выявлено, что уровни этих показателей составили, соответственно, 688 мМЕ/л:

1,86мМЕ/л,35%, 16%.

Согласно формуле изобретения произведен расчет диагностического коэффициента:

50

0.01 х 6fl8 x 35 1,86 х 16

8,06.

Учитывая, что диагностический коэффициент представлял собой величину, превы- шающую значений 2,4 достоверно диагностирована миастения. В последующем при пневмомедиастинографии и интра- операционно диагноз был подтвержден.

Реализация способа позволяет повысить точность диагностики миастении за

счет повышения частоты правильно установленных диагнозов на 22,63%, снижения частоты ошибочных диагнозов на 15,12%, снижения частоты неустановленных диагнозов на 7,51%. а также проводить дифференциальную диагностику с ми- астеническими синдромами (например, амиотрофический склероз, рассеянный склероз и др.). Способ рекомендован для широкого клинического внедрения.

0

Формула изобретения Способ диагностики миастении, включающий биохимическое исследование биологической жидкости, отличающийся тем что, с целью повышения точности спо соба, у больного берут кровь, определяют в ней количество пролактина, соматотропно- го гормона, содержание Т-лимфоцитов и актив- ныхТ-лимфоцитов,вычисляют

диагностический коэффициент, и при его величине выше 2,4 диагностируют миастению.

Изобретение относится к медицине, а именно к неврологии. Цель изобретения - повышение точности способа. У больного берут кровь и определяют в ней количество пролактина, соматотропного гормона, Т- лимфоцитов и активных Т-лимфоцитов, вычисляют диагностический коэффициент и при его значении большем 2,4 диагностируют миастению. По сравнению с прототипом снижается частота ошибочных диагнозов на 15,12%.