Способ определения криза отторжения трансплантированного органа Советский патент 1982 года по МПК A61B10/00 

(5) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КРИЗА ОТТОРЖЕНИЯ ТРАНСПЛАНТИРОВАННОГО ОРГАНА

Изобретение относится к медицине, а именно к биохимии.

Известен способ определения криза отторжения трансплантированного органа путем исследования аргиназы в крови fl 3.

Однако известный способ не обеспечивает раннего определения криза отторжения кожи, так как введение иммунодепрессанта до и после пересадки удлиняет сроки отторжения и, следовательно, невозможно определить начало реакции отторжения, вызванной аллотрансплантатом.

Целью изобретения является раннее определение криза отторжения кожи.

Цель достигается тем, что согласно способу определения криза отторжения трансплантированного органа путем исследования активности аргиназы в крови активность аргиназы определяют в сыворотке крови, при этом ее инкубируют в физиологических условиях 1-3 ч в глициновом буфере

В присутствии L-аргинина и хлористого магния, инкубационную смесь центрифугируют, к супернатанту добавляют смесь фос(юрной кислоты, хлористого железа и 3%-ного водного раствора диацетилмонооксима, образовавшийся окрашенный раствор колориметрируют.

Способ осуществляется следующим образом.

Берут 0,1 мл сыворотки крови, инкубируют при , в течение двух часов в 0,04 М глициновом буфере в присутствии L-аргинина и хлористого магния. Реакцию приостанавливают и через 20 мин центрифугируют при 3000 об/мин. Берут t мл супернатанта в пробирку со шлифованной пробкой, добавляют 2,5 мл смеси фосфорной кислоты, хлористого железа и 0,25 мл 3%-ного водйого раствора диацетилмонооксима, который с образовавшейся мочевиной дает желтое окрашивание, по интенсивности чего судят о количестве мочевины. Содержимое пробирок хорошо перемешивают и кипя тят в водяной бане в течение 45 мин в темноте. После охлаждения колориметрируют при длине волны 78. Акти ность аргиназы выражается в /х,М образовавшейся мочевины на 1 г свежей ткани. Пример 1. Проведено исследование активности аргиназы в гомог.енатах печени после пересадки кожного лоскута у крыс по предложенному способу. Повышение активности аргиназы начинается с 6-9 дня, а к моменту отторжения кожного лоскута активность аргиназы увеличивается в несколько раз. Пример 2. Проведено исследо вание аргинааной активности в сыворо ке крови у кроликов по предложенному способу после перекрестной пересадки кожного лоскута. Повышение активности аргиназы в сыворотке крови на 55%, начиная с 6-9 дня. К началу реакции отторжения кожного лоскута (12-15 день) активность фермента повышается на 93, а в дни полного отторжения кожного лоскута (16-20 день) она достигает 129% по сравнени с интактными животными. Таким образом, предложенный способ позволяет проводить раннее определение криза отторжения кожи и умен шает количество сыворотки (до 0,1 мл), необходимой для исследования. Формула изобретения Способ определения криза отторжения трансплантированного органа путем исследования активности аргиназы в крови, отличающийся тем, что, с целью раннего определения криза отторжения кожи, активность аргиназы определяют в сыворотке крови, приЭТОМ ее инкубируют в физиологических условиях 1-3 ч в глициновом буфере в присутствии L-аргинина и хлористого магния, инкубационную смесь центрифугируют, к супернатанту добавляют смесь фосфорной кислоты, хлористого железа и 3%-ного водного раствора диацетилмонооксима, образовавшийся окрашенный раствор колориметрируют. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Петрунь М.М., Мигаль Л.Я. и Дранник Г.М. Зм1ни активност арг1нази кров при аллотрансплантац i нирки I застосуванн антил1мфоцитарного глобул ну як 1мунодепресанта. журнал, 1976, т,ХХ11, N 5, с. 671-67.