Способ получения эритроцитарного диагностикума Советский патент 1982 года по МПК A61K39/385 

( СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭРИТРОЦИТАРНОГО

I

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии.

Известен способ получения эритроцитарного диагностикума путем смешения взвеси фиксированных эритроцитов и антигена в присутствии конъюгирующего агента с последующим инкубированием смеси и отмыванием сенсибилизированных эритроцитов 1.

Однако известный способ не обеспечивает высокой чувствительности гепатитного В и эхинококкового диагностикумов.

Целью изобретения является повышение чувствительности гепатитного В и эхинококкового диагностикумов.

Эта цель достигается тем, что согласно способу получения эритроцитарного диагностикума путем смешения взвеси фиксированных эритроцитов и ант.игена в присутствии конъюгирующего агента с последующим инкубированием смеси и отмыванием сенсибилизированных эритроцитов в качестве конъюгирующего ДИАГНОСТИКУМА

агента используют фуксин i основной в концентрации О,01-0,U, компоненты смешивают в соотношении 2:1:1 и смесь инкубируют при 40-80 С в течение 30180 мин.

При этом используют 3-12 ;-ную взвесь фиксированных эритроцитов.

Способ поясняется следующими примерами.

Пример 1. Смешивают 1 мл взвеси фиксированных формалином по Вайнбаху бараньих эритроцитов, 0,5 мл раствора HBsAg (концентрация белка 20 мкг/мл) и 0,5 мл водного раст j вора 0, фуксина основного. Смесь выдерживают 180 мин при 60°С, встряхивая через каждые 15 мин, после чего сенсибилизированные эритроциты трижды отмывают 0, раствоJQ ром NaCl, содержащим 0,1, желатины и 2 об.% 1/15 М фосфатного буфера, рН 7i2. К осадку отмытых сенсибилизированных эритроцитов добавляют 20 мл такого жераствора, который использу393510ют для отмывания, содержащего допелнительно 0,U азида натрия. Получают 0, взвесь стабильных сенсибилизированных эритроцитов, используемых в качестве эритроцитарного диагности- 5 кума. Пример 2. Смешивают 1 мл взвеси фиксированных формалином по Вайнбаху бараньих эритроцитов, 0,5 мл раствора эхинококкового анти- 10 гена (концентрация 2000 мкг/мл) и 0,5 мл водного раствора 0,03 %-ного фуксина основного. Смесь выдерживают 120 мин при ЗОС, встряхивая через каждые 15 мин, после чего сенсибили- is зированные эритроциты трижды отмывают 0, раствором NaCl, содержаДоза Титр РПГА при антигена, мкг/мл предлагаемого спо- CrCln соба : 2 X ю1 : 32 1121 : 2 X : 16 561:2x10 281 : 2 X 10 И1 : 2 X .- ..-..--.- в-- -..--- - - - - - - - - Примечание. Титр РПГА мен Доза эхинококково- 1и1Р РОГА го антигена, мг/мл предлагаемого спо3 1 : 960001 1 : 96000I 21 : 960001 84 щим нормальную лошадиную сыворотку в разведении 1:200 и 2 об. % 1/15 М фосфатного буфера, рН 7,2. К осадку отмытых сенсибилизированных эритроцитов добавляют 10 мл такого же раст вора, который используют для отмывания эритроцитов, содержащего дополнительно 0,1 азида натрия. Получают 0, взвесь эритроцитов, которые используют в качестве эритроцитарного диагностикума. Характеристика чуствительности и специфичности реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) с эритроцитарными диагностикумами, полученными по известным и предлагаемому сподобам, представлена в табл. 1 и 2. «, Т а б л и ц а 1 сенсибилизации с помощью танина риванола 1 : 256000 1 : 1 х 10 1 : 128000 1 : 1 х 10 - 1 : 1 X 10 - 1:1x10 - 1:1x10 «.«.-.-..- -.-,.- ..«.-...«.-....-... - -. - - -.. ьше 1 : 8 (отрицательный результат). Таблица 2 при сенсибилизауии с помощью CrCl танина риванола : 1 : 28800 1 : 8000 : 1 : 28800 1 : 48000 : 12000 1 : 1 : /48000

Предлагаемый способ позволяет получить эритроцитарные диагностикумы.

обладающие более высокой чувствительностью по сравнению с известными, так

59351

чувствительность гепатитного В диагностикума повышается в 2 раза и эхинококкового в З.Б раза.

Формула изобретения

ствительности гепатитного В и эхинококкового диагностикумов, в качестве конъюгирующего агента используют фуксин основной в концентрации 0,01-0,1 компоненты смешивают в соотношении 2:1:1 и смесь инкубируют при 40-8ос в течение мин.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР № , кл. А 61 К 39/00, 1977.