Способ получения эритроцитарного диагностикума Советский патент 1978 года по МПК A61K39/00 

1

Изобретение относится к области медицины, в частности к приготовлению диагиостических препаратов.

Известен способ получения эритроцитарных диагностикумов, предназначенных для определения реагентов на Fc-фрагмент иммуноглобулина G, путем сенсибилизации эритроцитов глобулиновым препаратом в присутствии конъюгирующего агента, например СгС1з, с последующим отмыванием сенсибилизированных эритроцитов.

Однако известный способ не обеспечивает высокой чувствительности диагностикума.

Целью изобретения является повышение чувствительности диагностикума.

Эта цель достигается тем, что в качестве конъюгирующего агента используют риванол. Кроме того, для сенсибилизации эритроциты, глобулиновый препарат и риванол берут в соотношении 1 : 0,5 : 0,5 соответственно.

Способ осуществляют следующим образом.

Смешивают 1 объем 2,5%-ной взвеси эритроцитов, 0,5 объема 0,1-0,2%-ного раствора глобулинового препарата и 0,5 объема 0,02%-ного раствора риванола (2-этокси6,9-диаминоакридино лактат). Смесь выдерживают в течение 60 мин при 37°С (для на2

тнвных эритроцитов) или 40-45°С (для фиксированных эритроцитов) нри периодическом встряхивании, затем эритроциты

3раза отмывают не менее чем 50-кратным по отно неиию к осадку эритроцитов объемом 0,85%-иого раствора хлористого натрия, содержащего 0,1-0,2% желатины и 1% (по объему) 1/15 М фосфатного буфера рН 7,2.

П р и мер. Проводят сенсибилизацию формалинизированных но Вайнбах эритроцитов барана IgG нормальной сыворотки человека. Смешивают 2 мл 2,5%-ной взвеси эритроцитов, 1 мл 0,1%-ного раствора IgG и 1 мл 0,02%-ного раствора риванола, приготовленных на 0,85%-ном растворе NaCl, содержащем 1% (но объему) 1/15 М фосфатного буфера рН 7,2. Смесь выдерживают 60 мии нри 45°С при периодическом встряхивании. Затем эритроциты трижды отмывают 0,85%-ным раствором NaCl (по

4мл), содержащим 0,1% желатины и 1% (по объему) 1/15 М фосфатного буфера рН 7,2. К осадку отмытых сенсибилизированных эритроцитов прибавляют 2 мл такого же растворителя.

В качестве контроля используют эритроциты, сенсибилизированные тем же препаратом IgG по способу Бойдеиа и Яндл - Симмоиса.

Определение эффективности сенсибилизации эритроцитов проводят с помощью двух реагентов на Fc - фрагмент IgG: сыворотки, содержащей ревматоидный фактор, и взвеси St. aureus Cowan., богатого белком А. В иервом случае определяют максимальное активное разйедениё сыворотки - индикатора, во втором - минимальную агглютинирующую дозу St. aureus Cowan.

Результаты

исследований представлены в таблице.

Максимальное активное разведение

Способ сенсибилизации

сыворотки, содержащей

ревматоидный фактор Как видно из таблицы, предлагаемый способ обеспечивает высокую чувствительность диагностикума при определении ревматоидного фактора и А-содержащего стафилококка. Предлагаемый способ обеспечивает высокую чувствительность диагностикума, позволяет диагносцировать ряд заболеваний и дает возможность количественного определения белка А у стафилококков. Формула изобретения 1. Способ получения эритроцитарного диагпостикума для определения реагентов

Минимальна выявляемая доза St. aureus Cowan, млн/.мл

1:16 000- 1:20 000

1: 8 СОО- 1:12 000

16-23

1:600 - 110-130 1:1500 на Fc-фрагмент иммуноглоб лина G путем сенсибилизации эритроцитов глобулиновым препаратом в присутствии конъюгирующего агента с последующим отмыванием сенсибилизированных эритроцитов, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности диагностикума, в качестве конъюгирующего агента используют риванол. 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что, с целью сенсибилизации, эритроциты, глобулиновый препарат и риванол берут в соотношении 1 : 0,5 : 0,5 соответственно.