Способ определения противомозговых антител Советский патент 1982 года по МПК A61K39/395 

(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОТИВОМОЗГОВЫХ

АНТИТЕЛ

1

Изобретение относится к медицине, а именно невропатологии, и может быть использовано для определения противомозговых антител, обладающих нейтропной активностью, в сыворотке крови больных некоторыми нервно-психическими заболеваниями (острый э-нцефаломиелит, рассеянный склероз, шизофрения и др.), а также в условиях эксперимента для определения степени сенсибилизации к .мозгу.

Известен способ определения противомозговых антител путем исследования сыворотки крови больного 1.

Однако известный способ длителен и трудоемок, так как забор ткани проводится через 24 ч после введения сыворотки, затем следует проводка в формалине, заливка, приготовление срезов, окраска на липиды и последующее микроскопическое исследование образца. Проведение исследования требует наличия в штате клинической лаборатории врача-морфолога и лаборанта-морфолога.

Целью изобретения является ускорение и упрощение способа.

Цель достигается тем, что при осуществлении способа определения противомозговых антител путем исследования сыворотки крови больного отличительной особенностью является то, что сыворотку крови больного смещивают с гомогенатом мозга крысы и комплементом, выдерживают смесь 18-

5 20 ч при §-12°С, и определяют наличие противомозговых антител по увеличению активности кислой протеазы по сравнению с исходной на и выше.

Способ осуществляют следующим образом.

У больного из вены берут кровь 2,5 мл, приготавливают сыворотку и I мл этой сывороки с 0,1 мл комплемента добавляют к 1 мл 20°/о-го гомогената мозга крысы, приготовленном на физиологическом растворе

5 (гомогената мозга одной крысы достаточно для проведения 5 исследований). Отбирают аликвотную часть, центрифугируют и в надосадочной жидкости определяют активность кислой протеазы. Оставшуюся часть смеси

20 выдерживают 18-20 ч при 8-12°С, затем центрифугируют для отделения осадка и в надосадочной жидкости определяют активность кислой протеазы.

Активность кислой протеазы исследуют, используя в качестве субстрата гемоглобин и выражают в мгк тирозина на 100 мг ткани. Увеличение активности фермента носле 18 ч пребывания в холодильнике минимум на 20%-ов по сравнению с исходными величинами свидетельствует о наличии в исследуемой сыворотке противомозговых антител. Пример }. Б-ной Г. 38 лет. Диагноз: рассеянный склероз, церебро-спинальная форма, экзацербация. Проведано обследование. Из вены берут 2,5 мл крови, готовят сыворотку и 1 мл этой сыворотки с 0,1 мл компле.мента добавляют к 1 мл 20%-го гомогемата мозга крысы, который был предварительно приготовлен путем гомогенизации 1 г мозга в 5 мл физиологического раствора. Отбирают половину объема и ставят на инкубацию в холодильник при 10°С на 18 ч. Вторую половину центрифугируют в течение 15 мип, при 5000 об/мин, а затем к 0,2 мл цемтрифугата добавляют 0,4 мл 0,005 .V аиот;1то-фосфатного буфера (рН 3,8) н 0,2 .;л 20%-го раствора гемоглобина, смесь инкубируют 1 ч при 37°С. Реакцию останавливают 0,8 мл 20%-ой трихлоруксусной кислотой (ТХУ). в контрольную пробу ТХУ добавляют до субстрата (геомоглобина). После остановки реакции трихлоруксусной кислотой пробы центрифугируют 15 мин при 5000 об/мин и к 1 мл центрифугата добавляют 2 мл 9,5 fi. NaOH и 0,5 мл реактива Фолпна (разведенного перед употреблением в 2 раза). Пробы колориметрируют при длине во.1ны 680 им, а результат выражают в мкг тирозина (100 MI ткани за 60 мин). Активность кислой иротеазы проведена в табл. I. Превышепие активности фермента после инкубации сыворотки крови с мозгом соетавляет 50%, что позволяет заключить о

значительном количестве антител в исследуемой сыворотке.

0,230 32387,0,365 8

Примечание: 387, - 100

вно-психических расстройств аутоиммунной природы.

Таблица 1

581,0

581,0 - X

X 150% Пример 2. Больной Г., 35 лет. Предположительный диагноз: маниакально-депрессивный психоз. Проведено обследование. Из вены берут 3 мл крови, готовят сыворотку и 1 мл ее с 0,1 мл комплемента добавляют к 1 мл 20°/о-го гомогената мозга крысы, который готовят предварительно путем го.могенизации 1 г мозга в. 5 мл физиологического раствора. Половину объема помещают на инкубацию в холодильник при 10°С на 18 ч. Вторую половину центрифугируют в течение 15 мин при 5000 об/мин, затем к 0,2 мл центрифугата добавляют 0.4 мл ацетато-фосфатного буфера (рН 3,8) и 0,2 .мл 20%-го раствора гемоглобина. Смесь инкубируют 1 ч при 37°С. Реакцию останавливают добавлением 0,8 мл 20%-ой трихлоруксусной кислоты (ТХУ). В контрольную пробу ТХУ добавляют до субстрата (гемоглобина). После остановки реакции трихлоруксусной кислотой пробы центрифугируют 15 мин при 5000 об/мин и к 1 мл центрифугата добавляют 2 мл 0,5 н NaOH и 0,5 мл реактива Фолина (разведенного перед употреблением в 2 раза). Пробы колореметрируют при длине волны 680 нм, а результат выражают в мкг тирозина (100 мг ткани за 60 мин). Активность кислоты протеазы приведена в табл. 2. Предварительный диагноз - маниакально-депрессионный психоз, диагносцированный клинически, подтвержден лабораторным исследованием, так как аутоиммунный компонент, свойственный шизофрении, в данном случае отсутствует. Предлагаемый способ прост, высокоспецифичен и иадежен и может найти широкое применение в клинике для определения противомозговых антител в сыворотке крови больных с целью ранней диагностики нер0,290 29, 366,0 0,210 28 338,0 Примечани Формула изобретения Способ определения противомозговых антител путем исследования сыворотки крови больного, отличающийся тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, сыворотку крови больного смешивают с гомогенатом мозга крысы и комплементом, выдерживают смесь 18-20 ч при 8-12°С и 66,0 - 100 38,0 - X X 92% определяют наличие противомозговых антител по увеличению активности кислой протеазы по сравнению с исходной на 20% и выше. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Авторское свидетельство СССР № 657807, кл. А 61 В 10/00, 1976.