Способ диагностики гломерулонефрита Советский патент 1987 года по МПК G01N33/48 

1 1

Изобретение относится к медицине и может использоваться для диагности ки гломерулонефрита.

Цель изобретения - .диагностирование в ранние строки, что достигается за счет определения уровня прекалли- креина в крови.

Способ осуществляют следующим образом,

В полиэтиленовую пробирку, помещенную на водяную баню при 25 С,вносят 0,2 мл плазмы и 0,2 мл суспензии каолина (10 мг/мл). После контакта плазмь с каолином в течение 1 мин отбирают по 0,2 мл смеси в пробирки, содержание 0,4 мл 0,05 М мединапово- го буфера, рН 7,6; Добавляют 0,2 мл 1%-ного протаминсульфата и инкубируют пробы 15 мин при 35 С, после чего реакцию останавливают, добавляя 0,8 мл 20%-ной трихлоруксусной кислоты (ТХУ). В контрольные пробы про- таминсульфат вносят после ТХУ, После осаждения нерасщепившегося протамин- сульфата трихлоруксусной кислотой пробы центрифугируют 45 мин при 5000 об/мин.

После этого пробирки с отобранным ТХУ-центрифугатой погружают в кипящую водяную баню на 60-120 с, охлаждают и повторно центрифугируют при ВОрО об/мин 15 мин, В прозрачном центрифугате определяют содержание аргинина по реакции Сакагучи, Для этого к I мл центрифугата добавляют 1 мл дистиллированной воды, 1 мл 0,02%-ного раствора оксихинолина, 1 мл 10%-ного раствора едкого натра. Через 2 мин добавляют 0,2 мл 1%-ного раствора NaBrO, спустя 15 с - 1 мл 40%-ного раствора мочевины, по истечении 45 с - 1 мл дистиллированной воды. После каждого добавления очередного реактива пробы тщательно перемешивают , Спустя 10 мин определяют оптическую плотность раствора при 508 нм на спектрофотометре или на ФЭКе при светофильтре № 5 в кювете 10 мм, сравнивая опытную пробу с контрольной.

Количество аргинина в пробах служит мерой активированного прекалли- креина.

Активность прекалликреина выражают в микромолях аргинина, отщепленного от протаминсульфата 1 литром плазмы крови за 1 минуту, по формуле

X V,

2

X 1000

, X V

X t.

X М

где Р - количество аргинина в пробе,

МКГ;

V - общий объем пробы, мл; Vj - объем плазмы в пробе, мл; t - время инкубации при 35 С,

мин; t, - время преинкубации при ,

мин;

М - молекулярная масса аргинина; 1000 - пересчет на 1 л плазмы,

При расчете уровня прекалликреина учитывается разность между содержанием аргинина в плазме, активированной в течение 1 мин и неактивированной. Уровень прекалликреина в плазме здорового человека составляет 178,81 111,0 мкмоль/л.мин.

Снижение уровня прекалликреина ниже 130 мкмоль/л,мин свидетельствует об активации калликреин-кининовой системы крови, вызванной наличием аутоимунного процесса в почке,

Пример, Больной С,, 1968 г, рожд,I № ист.болезни 629. Содержа-ние общего белка, определенное известным методом 81,4 г/л - нормальный уровень. Параллельно исследованный предлагаемым способом уровень прекалликреина 97,3 мкмоль/л.мин понижен. Клинический диагноз: острый гломерулонефрит, т,е, предложенный способ позволяет провести необходимую диагностику на раннем этапе и раньше назначить патогенетическую

терапию.

Формула изобретения

Способ диагностики гломерулонеф- рита путем исследования белка плазмы крови, отличающийся тем, что, с целью диагностирования в ранние сроки, плазму обрабатьшают каолином, инкубируют полученную смесь с протаминсульфатом, далее добавляют трихлоруксусную кислоту, полученный супернатант кипятят в течение с, после чего в нем определяют уровень прекаллекреина и при значении его менее 130 мкмоль/ /л,мин диагностируют гломерулонеф- РИТ,

Изобретение относится к медицине. Цель изобретения - диагностирование в ранние сроки путем определения уровня прекалликреина в крови Для этого в пробирку на водяной бане при 25°С вносят равные части плазмы и суспензии каолина (10 мг/мл). Смесь отбирают в пробирки, содержащие. 0,05 М мединалового буфера, рН 7,6, добавляют протаминсульфат и инкубируют пробы 15 мин при 35°С. Затем добавляют 20%-ную трихлоруксусную кислоту (ТХУ). В контрольные пробы протаминсульфат вносят после ТХУ.После осаждения нерасщепившегося прота- минсуяьфата ТХУ пробы центрифугируют 45 мин при 5000 об/мин. Затем пробирки с отобранным ТХУ-центрифугатом держат 60-120 с на кипящей водяной бане, повторно центрифугируют 15 мин при 5000 об/мин. В прозрачном центри- фугате определяют содержание аргинина. Количество аргинина в пробах служит мерой активированного прекалликреина. Уровень прекалликреина в плазме здорового человека 178,81 t10 мкмоль/л.мин. При уровне ниже 130 мкмоль/л.мин делают вывод об активации калликреин-кининовой системы крови, вызванной наличием аутоиммунного процесса в почке, и диагностируют гломерулонефрит. (Л оэ 00 со