Изобретение ссгносится к медицине/ а именно к электронно-микроскопическим исследованиям биологических макромолекул и их взаимодействия.
Известен способ определения комплексов ДНК с белком для электронномикроскопического исследования путем смешивания растворов ДНК и белка, перенесения их на пленки-подложки и контрастирования 1.
Однако известный способ не обеспечивает высокой точности, так как не позволяет исследовать динамику структурных изменений, происходящих при присоединении белка к ДНК.
Цель изобретения - повышение точности способа, выявление комплексов и изучение динамики их образования.
Поставленная цель достигается тем, что при осуществлении приготовления способа комплексов ДНК с белком для электронно-микроскопического исследования осуществляют путем смешивания растворов ДНК и белка, перенесения их на пленки-подложки и контрастирования, раствор ДНК наслаи вают на поверхность гипофазы раствора белка.
Пример. Исследование структуры комплексов ДНК с гистоном Hi,
Каплю раствора ДНК (5 мгк/мл в 25 мМ ТЭА-нес буфере) осторожно наслаивают на поверхность гипофазы, содержащей 2 мкг/мл гистона Hi в присутствии 0,14 М NaCt.
Образование пленки ДНК на поверисности контролируют по меткам талька. Затем через различные промежутки времени касаются полученного пят10на электронно-микроскопической сеточкой, покрытой коллодиевой пленкой-подложкой. Избыток жидкости отсасывают фильтровальной бумагой. Сеточку контрастируют круговым напы15лением сплавом Pt-Pd. Просмотр производят на электронном микроскопе.
Предлагаемый способ дает возможность исследовать динамику образования комплексов, изучать их струк20туру, а также прослеживать изменения конформации индивидуальных молекул ДНК при присоединении к ним молекул белка, находящегося в гипофазе, и расширяет возможности элект25ронно-микроскопического изучения .биологических макромолекул.
Формула изобретения
Способ приготовления комплексов 30 ДНК с белком для электронно-микро3 946517.4
скопического исследования путемна поверхность гипофазы раствора белсмешивания растворов ДНК и белка,ка. . перенесения их на пленки-подложки
и контрастирования, отличаю-Источники информации,
щ и и с я тем, что, с целью повы-принятые во внимание при экспертизе
шения точности способа/ выявления5 j. Cole R.D tawson C.M., Usiкомплексов и изучения динамики ихang M.W. Cold Spring Harboy Sympoобразования, раствор ДНК наслаивают slum Quantity Biology. 1977, p.253.
