1
(21)4352.337/28-14
(22)28.12.87
(46) 30.04.90o Бюл. № 16
(71)Институт общей генетики им. Н.И. Вавилова АН СССР
(72)0„И, Карпова и Ю-.Ф. Богданов
(53)616-0.89.9 (088.8)
(56) Dietrich АЛЛ. A sequential analysis of the development of the synaptonetial complex in spermatocy- tes of the mouse by electron microscopy using hydroxy urea and agar filtration. - Genetica , 1983, V. 61, p. 119o
(54)СПОСОБ ПОДГОТОВКИ ПРЕПАРАТА ИЗОЛИРОВАННЫХ СИНАПТОНЕМНЫХ КОМПЛЕКСОВ
ДЛЯ ЭЛЕКТРОННО-МИКРОСКОПИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ
(57) Изобретение относится к области медицины, а именно к цитогенетике. Целью является получение чистых фракций синаптонемных комплексов ДНП. Цель достигается тем, что до нанесения комплекса на сеточки проводят электрофоретическое разделение суспензии комплексов в агарозном геле. А нанесение комплекса на электронно- микроскопические сеточки проводят путем помещения на пути продвижения комплекса сеточек. Комплекс наползает на сеточки. После их окраски ФВК они имеют вид чистых нитей ДНП.
Изобретение относится к области медицины, а именно к цитогенетике. Целью является получение чистых фракций синаптонимных комплексов ДНП. Цель достигается тем, что до нанесения комплекса на сеточки проводят электрофоретическое разделение суспензии комплексов в агарозном геле. А нанесение комплекса на электронно-микроскопические сеточки проводят путем помещения на пути продвижения комплекса сеточек. Комплекс наползает на сеточки. После их окраски ФВК они имеют вид чистых нитей ДНП.
Изобретение относится к медицине, а именно к цитогенетике.
Цель изобретения --получение комп-° лексов, свободных от хроматина.
Способ осуществляют следующим образом.
Для исследования берут препараты комплексов, изолированные под действием ДНКазы из ядер сперматоцитов, находящихся на стадии зиготены-пахитены. Образец комплекса подвергали электро- форетическому разделению в 0,4% горизонтальном агарозном геле, приготовленном на 0,04М трис-ацетатного буфера, РН 8,3, и 0,001М ЭДТА-Наг.
Гель заливают на стеклянную пластинку с прижатой к ней рамкой. После полимеризации рамку снимают. В лунку размером , мм вносят 50 мкл образца в растворе 1,5 М сахарозы, 0,01 М трис-HCl, 0,ООШ ЭДТА-Наа.
(Л
с:
Гель помещают в стандартную камеру для проведения горизонтального электрофореза. Буфер заливают таким образом, чтобы он был вровень с гелем. Этим достигается более полное вхождение комплекса, имеющего значительный молекулярный вес, ДНП-электрофорез проводят в буфере такого же состава, как и агарозный гель, при постоянном напряжении 140В, при котором ток равен 105-520 мА. Препарат комплексе как и свободная ДНК, двигается к аноду. Электрофоретическое разделение проводят 30-40 мин. Далее прибор отключают от источника питания постоянного тока. Берут необходимое количество медных сеточек, покрытых пленкой, сеточки помещают в гель под углом 85-90° к движению комплекса любой стороной на расстоянии - 3 мм друг к другу начиная с 2 до
tn
Од
J5 мм от старта. Снова подают на гель напряжение 140 В в течение 5 ми
Сеточки вынимают пинцетом, фиксируют в капле 4%-ного формалина в 0,,5 М сахарозы, промывают водой, окрашивают 1%-ным спиртовым раствором фосфорновольфрамовой кислоты в течение i мин, промывают спиртом3 сушат „ Препараты комплекса готовы для изучения цод электронным микроскопом
Пример, Каплю суспензии кле- тоК; содержащей синаптонемные комп- лексы5 наносят па агаровый фильтр. Затем проводят электрофоретлческое разделение и полимеризацию геля
В лунку вносят образец, а гель помещают в камеру для электрофореза„ Комплекс входит в гель и движется к аноду На его пути под углом 90 вводят сеточки на 5 мин„ На сеточку наползают синаптонемные комплексы. Проводят их окрашивание. При просмотре под электронным микроскопом видны чистые нити ДНП„
Редактор Л. Пчолинскан
Составитель Л. Стебаева
Техред Л.Олнйкык - Корректор С. Шевкун
Заказ 975
Тираж 493
ВНИИГШ Государственного t омитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Производственно -издательский комбинат Патент, г.Ужгород, ул. Гагарина,101
Способ позволяет получить чистую Фракцию синаптонемных комплексов ДНП, свободных от хроматина
Формула изобретения
Способ подготовки препарата изолированных синаптонемных комплексов для электронно-микроскопических исследований путем приготовления суспензии комплексов в трис-HCl буфере рН 8,3, нанесения суспензии на ага- розный гель с последующим переносом на медные сеточки и окрашиванием фос- форновольфрамовой кислотой, о т л и5 чающийся тем, что, с целью получения комплексов, свободных от хроматина, до нанесения комплекса на сеточки проводят электрофоретическое разделение суспензии синаптонемных
0 комплексов в агарозном геле, а нане- секие проводят путем помещения сеточки в гель на пути прохождения комплекса под углом 85-90°, при этом сеточку экспонируют в геле в течение 4- 5 мин
Подписное
