Способ выделения молочнокислых бактерий,устойчивых к антибиотическим,антисептическим и химиотерапевтическим тест-препаратам Советский патент 1982 года по МПК C12N1/02 

(54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ МОЛОЧНОКИСЛЫХ БАКТЕРИЙ, УСТОЙЧИВЫХ К АНТИБИОТИЧЕСКИМ, АНТИСЕПТИЧЕСКИМ И ХИМИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИМ ТЕСТ-ПРЕПАРАТАМ

1

Изобретение относится к микробиологии и может найти применение в микробиологической технике, в частности при выделении молочнокислых бактерий, устойчивых к химиотерапевтическим, антибиотическим и антисептическим препаратам.

Известны способы выделения молочнокислых бактерий, устойчивых к антибиотическим (фенолу) и антнбиологическим (пеницилину) тест-препаратам, путем совместного термостати- ,Q рования исследуемой пробы культуры и тестпрепарата при. оптимальной температуре ее раз- вития с последующим определением устойчивости культуры по скорости образования сгустка или титруемой кислотности пробы (1.,5

Однако известные етособы не позволяют и не предусматривают одновременно выявить культуры, устойчивые к химиотерапевтичеСким тест-препаратам.

Наиболее близким по технической сущности 20 и достигаемому результату является способ вмделения молочнокислых бактерий, устойчивь1х к антибиотическим, антисептическим и химиотерапевтическим тест-препаратам, предусматривающий посев исследуемой культуры в питательную среду, инкубирование с последующим исследованием заданных свойств культуры 2.

Согласно зтому способу образцы молочнь1х продуктов высевают в стерильное обезжиренное молоко; из пробирок со сверн)тшимся молоком берут пробы и производят посев на твёрдые агаризованные питательные среды в чащках Петри; производят выделение чистых культур молочнокислых бактерий из одной колонки; изучение морфологических, физиологичеосих, биохимических и культуральных свойств выделенных культур; отбор активных щтаммов; изучение устойчивости активных штаммов к антибиотическим, химиотерапевтическим и антисептическим препаратам.

Однако данный способ выделения молочнокислых бактерий трудоемок и требует больщих затрат питательных сред и времени и не всегда обеспещшает получение наиболее устойчивых форм молочнокислых бактерий к исследуемым препаратам, так как в 1 г любого кисломолочного продукта обычно общее количество молоЧг

3958497

нокислых бактерий достигает нескольких миллионов. Если срели них окажутся устойчивые клетки к исследуемым препаратам, то их количество среди миллионов исчисляется несколькими единиидмн. Следовательно, при разведении j образца, вероятность попадания этих клеток с первого же разве ния иослючается, не говоря уже о 5-ом или 6-ом разведениях. Соответственно сводится к нулю получение наиболее устойчивых клеток молочнокислых бактерий к ис- ю следуемым тест-препаратам.

Цель изобретения - выявление наиболее УСТОЙЧИВЫХ форм молочнокислых бактерий.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу выделения молочнокислых 15 бактерий, устойчивых к антибиотическим, антисептическим и химиотерапевтическим тест-препаратам, предусматривающему посев исследуемой культуры в питательную среду, инкубирование с последующим исследованием заданных JQ свойств культуры, перед посевом в питательную феду вносят средне-летальные к исследуемым тест-препаратам дозы этих препаратов, а исследованию подвергают выжившие формы молочнокислых бактерий.25

Кроме того, в качестве исследуемой культуры используют образцы кисломолочных продуктов, сквашенных спонтанным путем. .

Сущность предложенного отособа состоит в TQM, что ередйе-летальные концентрации иоследуемых препаратов для большинства молочнокислых бактерий вносятся в самом начале вьщеления, а именно в исходную пробирку со стерильньпл молоком (обратом), последующие приемы выделения и их последовательность не изменены, что и обеспечивает получение наиболее устойчивых форм молочнокислых бактерий.

Для молочнокислых палочек средне-летальные концентрации антисептика (фенола) - 0,5% антибиотических препаратов - 0,001%, химиотерапевтических (фталазол) - 1%. Для молоч- нокислых стрептококков соответственно - 0,4; 0,001; 0,8%. И, если получают пробирки со свернувшимся молоком, это значит, что путем естественного отбора получают популяцию наиболее устойчивых культур. После чего прово- дят исследования остальных физиолого-биохимических показателей.

П р и м е р. В пробирки с обратом прибавляют в соответствукящтх для палочек и стрептококков средне-летальные концентрации 50 исследуемых препаратов. Пробирки инкубирую1

в термостате при оптимальной температуре роста для молочнокислых палочек и стрептококков. Затем из устойчивых образцов, т.е. из пробирок cb свернувшимся молоком, проводят выделение чистых культур с последующим изучением морфо-физиологических, биохимических и культуральных свойств. Результаты выделения устойчивых форм молочнокислых бактерий к антибиотическим, химиотерапевтическим препаратам и фенолу обобщены в таблице.

Предложенным способом было выделено из 51 образца 40 штаммов молочнокислых бактерий, из них устойчивых к фенолу (0,30,55%) - 15 штаммов; фталазолу (0,5 - 1,1%)17 штаммов; пенициллину, биомицину, синтомицину (0,001-0,003) - 6-8 щтаммов, что составляет 78,4% устойчивых культур молочнокислых бактерий из общего числа образцов.

Таким способом выделяют наиболее устойчивые формы лактобактериум ацидофилум Н.В. Ер 317/402, стрептококкус термофилус М7 лактобактериум мацуни № 2 Карииэ, стрептококкус лактвс и другие бактерии. Указанные штаммы бактерий в° настоящее время успешно используются при производстве лечебно-диетического кисломолочного продукта Каринз. Штаммы стерптококкус термофилус М7 и лактобактериум мацуни № 2 Каринэ используют при выработке витаминизированных рассольных сыров и иовых лечебно-диетических молочных продуктов.

Культуры, выделенные предложенным способом, находят применение в. молочной промышленности, в медицине и животноводстве при лечении острьц; форм желудочно-кишечных заболеваний у новорожденных детей, телят и поросят.

Кроме того, на выделение и получение наиболее устойчивых форм молочнокислых бактерий к вь1шеуказанным препаратам по известному способу выделения требуется 2/3 г, тогда как .но предлагаемому способу затрачиваю 6-8 мес исследований.

Предлагаемый способ позволяет сократить объем работы, материальные затраты за счет экономии питательных сред, продолжительность выделения и его сроки, причем повышается возможность получения наиболее устойчивых форм молочнокисльк бактерий, которые сохраняют свои производственно ценные свойства при длительном хранении (боле 5 лет).

++4-I+4--I

I

4-

(Л

4-

4. + 4-I« 4- 4II4. 4- 4-I4-4- I44. 4- 4 + 4-1 44- 4g k «I sl-2 §4t 4- 4- I о 9 w о E

S..2

4- 4St

C0

II4- 4-11I

S I

I4-4:I

4- 4II I II II III

-I sj

5 Pt Cu я S3 a

I i Ig

t2

4- 44- 4- 4- 44-I4-4-44-4-1I4-II

4-II+ 4- 44-4-4-. I4-4- . 44- 44т4-«I 4-4 .«f i I 5 .

+ + +

+ + +1

I A

+ + +

+ +

+ + +

+4-+,+ + -f +I

о

I

I I

I § fN I

Формула и ) обретения

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

2.Скородумова А. М. Практическое руководство по технической микробиологии молока и молочных продуктов, М., Пищепромиздат, 1963, с. 64-22..