ШТАММ БАКТЕРИЙ LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ КОРРЕКЦИИ ДИСБАКТЕРИОЗА ПРИ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ И У БОЛЬНЫХ РАКОМ ТОЛСТОЙ КИШКИ Российский патент 1998 года по МПК C12N1/20 A61K35/74 C12N1/20 C12R1/23 

Изобретение относится к производству лечебного кисломолочного продукта и представляет собой новый штамм молочнокислых бактерий - Lactobacillus acidophilus n.v. 92 (Ани).

Целью изобретения является получение нового штамма Lactobacillus acidophilus, отвечающего современным требованиям, предъявляемым к лечебным кисломолочным продуктам, и обладающего высокой биохимической активностью.

Выделение нового штамма Lactobacillus acidophilus, устойчивого к антисептическим, химиотерапевтическим тест-препаратам осуществлено методикой разработанной авторами. Идентификацию штамма проводили согласно определителю Берги. Кроме общепринятых таксономических показателей впервые дополнительно предложены новые критерии для отбора молочнокислых бактерий, закваски молочных продуктов;
устойчивость к ядохимикатам, широко используемым в сельском хозяйстве, ветеринарии;
способность к активному заселению слизистой оболочки пищеварительного тракта и толстой кишки;
сохранение нормального биоценоза кишечника;
способность подавления роста патогенных микроорганизмов широкого спектра действия (8-10 патогенных микроорганизмов);
способность, кроме лечения, коррекции дисбактериоза разного вида желудочно-кишечных заболеваний и рака толстой кишки при лучевой болезни;
способность подавления роста микроорганизмов, инфицирующих гинекологические, кожные заболевания разного вида и характера.

Выделенный новый штамм Lactobacillus acidophilus-92 отвечает вышеперечисленным требованиям и прошел клинические испытания в Институте практологии Минздрава Республики Армения, во втором клиническом родильном доме.

Штамм Lactobacillus acidophilus-92 депонирован в музее культур Института микробиологии НАН Армении под номером 9605.

Штамм имеет следующие свойства.

Морфологические: палочки 2-22 х 0,8-0,9 мм, клетки расположены одиночно или в виде коротких цепочек. При окрашивании метиленовой синью в клетках наблюдаются четко выраженные метахроматические зерна. Спор и капсул не имеет. Неподвижны.

Культуральные признаки: при росте в стерильном обезжиренном молоке образует плотный сгусток. При 33-40^oС восстанавливает лакмусовое молоко и образует сгусток. Б бульоне (МПБ) с NaCl в концентрации 2-4% наблюдается рост, с 6,5% роста нет. В гидролизованном молоке с pH 9,2 растет очень слабо, с pH 9,6 не растет, а при pH 3,0-3,5 рост также ингибирован. Хорошо растет на средах, приготовленных на основе гидролизата молока с дрожжевым автолизатом.

Растет па жидких питательных средах: мясо-пептонный бульон с добавлением 1-2%, глюкозы или лактозы, гидролизованное молоко, молочная сыворотка и на тех же средах с агаром.

При внесении 1,5-2% культуры сквашивание молока происходит в течение 4 ч при оптимальной температуре роста 38-40^oС. Максимальное (предельное) кислотообразование - 500^oТ.

Микроаэрофилы. Колонии на элективных агаризованных питательных средах глубинные, мелкие, чаще образуют клубки в виде перепутанных нитей;
Физиологические признаки: минимальная температура роста 20-22^oС, оптимальная - 38-40^oС, летальная - 68-72^oС. Нитраты и нитриты не восстанавливают, каталазу не образуют. По Граму окрашиваются положительно, Индол и скатол не образуют. Желатин не разжижает. Не обладают гемолитической активностью.

Факультативный анаэроб. Сбраживает и ассимилирует лактозу, глюкозу, сахарозу, фруктозу, маннозу, раффинозу, декстрин, крахмал, сорбит, маннит, дульцит. Не сбраживает инозит. Устойчивость к фенолу в молоко 0,5%, устойчивость к фталазолу 1,0-1,1%, устойчивость к антибиотическим препаратам - 0,003%. Хорошо растет на среде в присутствии 2% соли, на гидролизованном молоке с 20% желчи;
Поддержание штамма.

методы хранения: на жидкой питательной среде при 5-6^oС; лиофилизированная культура при 5-6^oC; в жидком азоте при -190^oC;
среды хранения: молоко цельное стерилизованное; молоко обезжиренное стерилизованное; молочная сыворотка стерилизованная.

Среда культивирования: молоко коровье, цельное, нормализованное или обезжиренное.

Температура культивирования 38-40^oС.

Время инкубации: 5-7 ч в зависимости от температуры инкубации, количество закваски, вносимое в молоко 1,5-2%, частота пересевов 1 раз в месяц. Высокая активность штамма относительно стабильна, при длительном хранении три года в лиофильном состоянии в среде, разработанной авторами.

Штамм фагоустойчив благодаря наличию слизистой капсулы. Аммиак из аргинина не образует. Для приготовления лабораторной закваски в 100 мл стерилизованного (1 атм 15 мин) обезжиренного молока вносят одну порцию 1,0-1,5 мл закваски и выдерживают при 38-40^oС в течение 4-5 ч до образования сгустка. Для приготовления производственной закваски в 10 л стерилизованного (1 атм 15 мин) молока вносят 100-150 мл лабораторной закваски. Молоко с закваской перемешивают и выдерживают при 38-40^oС в течение 6-7 ч до образования сгустка. Титруемая кислотность 80-95^oТ. Производственная закваска и продукт имеют плотный сгусток с вязкой консистенцией и выраженный кисломолочный вкус и аромат с кислотностью 120-140^oТ.

Новый штамм Lactobacillus acidophilus-92 проявляет высокую антимикробную активность в отношении подавления роста и развития грамположительных и грамотрицательных болезнетворных, а также вредных для производства микроорганизмов (табл. 1). Обогащает молоко витаминами (табл. 3). Образует в молоке летучие кислоты до 2,5-3,1 ДЧ диацетил - 0,435 мг%, ацетоин - 8,65 мг% (табл. 3). Проявляет высокую протеолитическую активность и синтез аминокислот (табл. 3).

Штамм Lactobacillus acidophilus-92 проявляет устойчивость к ядохимикатам, используемым в сельском хозяйстве и ветеринарии (табл. 2). Клинические испытания показали, что штамм Lactobacillus acidophilus-92 активно заселяется в слизистой пищеварительного тракта и толстой кишки, сохраняется нормальный биоценоз кишечника.

Новый штамм Lactobacillus acidophilus-92 благодаря своим сильным антагонистическим свойствам, кроме лечения желудочно-кишечных заболеваний, имеет выраженное корректирующее свойство дисбактериоза разного вида желудочво-кишечных заболеваний и рака толстой кишки.

Штамм Lactobacillus acidophilus-92 может быть использован в бактериальных заквасках, а также в отдельности для приготовления лечебно-диетических продуктов.

Использование: производство лечебного кисломолочного продукта, штамм молочнокислых бактерий, Zactobacillus acidophilus. Сущность изобретения: получен новый Z. acidophilus-92, отвечающий современным требованиям, предъявляемым к лечебным кисломолочным продуктам и обладающий высокой биохимической активностью. Штамм способен размножаться при 39-40^oС и обогащать молоко витаминами, аминокислотами. Новый штамм Zactobacillus acidophilus-92 n.v. /Ани/ проявляет высокую антимикробную активность в отношении подавления роста и развития грамположительных и грамотрицательных болезнетворных, а также вредных для производства микроорганизмов. Новый штамм проявляет устойчивость к антибиотическим, химиотерапевтическим, антисептическим препаратам, ядохимикатам. Штамм Zactobacillus acidophilus-92, благодаря своим сильным антагонистическим свойствам, кроме лечения желудочно-кишечных заболеваний, имеет выраженное свойство корректировать дисбактериоз, различные желудочно-кишечные заболевание и рак толстой кишки. 4 табл.

Штамм бактерий Lactobacillus acidophilus-92 (депонированный в коллекции культур Института микробиологии НАН Армении под номером 9605), используемый для коррекции дисбактериоза при желудочно-кишечных заболеваниях и у больных раком толстой кишки.