ШТАММ БАКТЕРИЙ LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ЛЕЧЕБНО-ДИЕТИЧЕСКОГО КИСЛОМОЛОЧНОГО ПРОДУКТА Российский патент 1998 года по МПК C12N1/20 A23C9/127 C12N1/20 C12R1/23 

Изобретение относится к производству лечебно-диетического кисломолочного продукта и представляет собой новый штамм молочно-кислых бактерии.

Целью изобретения является получение нового штамма Lactobacillus acidophilus-13, отвечающий современным требованиям, предъявляемым к лечебно-диетическим кисломолочным продуктам, и обладающим высокой биохимической активностью.

Выделение нового штамма Lactobacillus acidophilus Арагац 1 устойчивого к антибиотическим, антисептическим и химиотерапевтическим тест-препаратам осуществлено по методике разработанной авторами [1].

Известны штаммы ацидофильных молочнокислых бактерий [2 и 3], которые отбирались по устойчивости к поваренной соли 2-4% с высоким кислотообразованием, по антагонистической активности, микропрепарату, количеству клеток и др. для ферментации молочной сыворотки. Штаммы полученные только по вышеперечисленным свойствах не удовлетворяют современным требованиям.

Наиболее близким к изобретению по технической сущности и достигаемому положительному эффекту является способ получения штамма молочнокислых бактерий Lactobacillus acidophilus 5ДС, используемый в производстве кисломолочных продуктов [4], предусматривающий получение Lactobacillus acidophilus, способного активно развиваться в молоке при пониженных температурах культивирования, характеризуется невысоким пределом кислотообразования, устойчивым свойством биосинтеза внеклеточных вязких углевод-белковых комплексов, способностью активизировать рост слизистых культур молочнокислых стрептококков и стабилизировать их по основным биохимическим свойствам. Однако штамм используется только в составе бактериальных заквасок для кисломолочных продуктов. Нет данных о его использовании в лечебных целях при различных заболеваниях, в том числе как санирующее средство.

В представленной нами заявке указаны действия штамма Lactobacillus acidophilus-13 (Арагац) при лечении различных, в том числе, желудочно-кишечных заболевании и как санирующее средство. Штамм апробирован в клинических условиях.

Целесообразность организации производства лечебно-диетических кисломолочных продуктов на основе закваски ацидофильных палочек необходима в связи с тем, что ацидофильные молочнокислые бактерии обладает высокой антагонистической активностью в отношении патогенной и условно-патогенной микрофлоры. Антагонистическая активность ацидофильных молочнокислых палочек коррелирует с выраженной санирующей эффективностью против различных форм кишечных заболеваний.

В отличие от прототипа предлагаемый штамм, при оптимальном режиме культивирования по сравнению с прототипом, обладает более высокой антагонистической активностью. Сравнительные данные приведены в табл. 5
В отличие от прототипа предлагаемый штамм характеризуется рядом биохимических свойств: количество летучих кислот, ароматических веществ, накопление свободных аминокислот, устойчивость к антибиотическим, химиотерапевтическим, антисептическим препаратам, что обуславливает его диетическое и лечебное назначение. В отличие от прототипа кроме общепринятых таксономических показателей впервые дополнительно предложены новые критерии для выделения и отбора молочнокислых ацидофильных бактерий:
устойчивость к ядохимикатам, широко используемым в сельском хозяйстве, ветеринарии;
способность к активному заселению слизистой пищеварительного тракта и толстой кишки,
сохранение нормального биоценоза кишечника.

Полученный новый штамм Lactobacillus acidophilus-13 (Арагац) отвечает вышеперечисленным требованиям, положительно влияет на реперативные процессы в кишечнике при лечении желудочно-кишечных заболеваний, для коррекции дисбактериоза разного вида и характера у новорожденных и взрослых.

Новый штамм можно использовать в производстве лечебно-диетического продукта питания, способствующего подавлению роста патогенных форм микроорганизмов и нормализации микрофлоры кишечника.

В отличие от прототипа предлагаемый штамм характеризуется высоким антагонистическим свойством, зоны угнетения роста 19-22 мм, против 12-15 мм. Данные испытаний показали, что в отличие от прототипа, штамм Арагац-13 обладает антагонистическим действием в отношении 10 патогенным и условно-патогенным штаммам.

В отличие от прототипа предельная кислотность очень высокая - 400^oТ, против 130^oТ.

Известно, что низкая кислотность, особенно для лечебных молочнокислых продуктов, не дает положительного эффекта при лечении различных форм желудочно-кишечных заболеваний.

Кисломолочные продукты с низкой кислотностью можно употреблять для диетического питания. Для лечения острых, тяжелых форм желудочно-кишечных заболеваний (дисбактериозов, сальмонеллезов, дизентерией и др.) нужно употреблять кисломолочный продукт с высокой кислотностью. Ацидофильные молочнокислые бактерии кроме молочной кислоты синтезируют антагонистические вещества, ввиду того, что молочная кислота тоже имеет бактерицидное действие против патогенных и условно-патогенных микроорганизмов в отличие от прототипа прелагаемый штамм обладает как высоким антагонистическом действием, так и высоким кислотообразованием.

Штамм Lactobacillus Acidophilus-13 депонирован в музее культур Института микробиологии НАН Армении под номером 9606.

Штамм имеет следующие свойства.

Культурально-морфологические:
Палочки 2-20 х 0,8-0,9 мм, клетки расположены одиночно или в виде коротких цепочек, неподвижны, спор и капсул не образуют.

По Граму окрашиваются положительно. При окрашивании метиленовой синью в клетках наблюдаются четко выраженные метахроматические зерна.

Гомоферментативные, микроаэрофилы. Колонии на элективных агаризованных питательных средах глубинные, мелкие, чаще образуют клубки в виде перепутанных нитей.

Физиологические:
Минимальная температура роста 20^oC, оптимальная - 37-39^oC, летальная - 65-68^oC.

Нитраты не редуцирует. Индол и скатол не образует. Желатин не разжижает. Не обладает гемолитической активностью. Факультативный анаэроб. Слизистая. Максимум кислотообразования (предельная) в молоке 350-400^oТ.

Сбраживает и ассимилирует лактозу, глюкозу, сахарозу, фруктозу, маннозу, раффинозу, крахмал, декстрин, сорбит, маннит, дульцит. Не сбраживает инозит.

При развитии в жидких средах (гидролизированное молоко, молочная сыворотка, среда SURS) штамм вызывает равномерное помутнение. Штамм не образует газ из глюкозы, аммиак из аргинина.

Устойчивость к фенолу в молоке 0,5%, устойчивость к антибиотическим препаратам - 0,003%, устойчивость к фталазолу - 0,9-1,0%.

Биохимические свойства приведены в табл. 1-3.

Как видно из приведенных данных (табл. 1-3), предлагаемый штамм повышает протеолитическую, ароматообразующую, антагонистическую активность, синтезирует в молоке витамины, аминокислоты.

Кисломолочный продукт, полученный с использованием этого штамма, отличается высокими биохимическими свойствами.

Поддержание штамма.

Методы хранения: на жидкой питательной среде при 5-6^oC; лиофизированная культура при 5-6^oC; в жидком азоте при - 193^oC.

Среды хранения: молоко цельное стерилизованное; молоко обезжиренное стерилизованное; молочная сыворотка стерилизованная.

Среда культивирования: молоко коровье цельное, нормализованное или обезжиренное (обрат).

Температура культивирования: 37-39^oC.

Время инкубации: 5-7 ч, в зависимости от температуры инкубации количество закваски вносимой в молоко 1,5-2%.

Частота пересевов: 1 раз в месяц.

Штамм Lactobacillus acidophilus-13 может быть использован в бактериальных заквасках, а также для приготовления лечебно-диетических продуктов.

Источники информации
1. Авторское свидетельство, СССР, N 958479, кл. C 12 N 1/02, 1982.

2. Авторское свидетельство, СССР, N 489789, кл. C 12 K 3/09, 1976.

3. Авторское свидетельство, СССР, N 1243682, A 23 C 21/02, 9/127, (C 12 N 1/20, C 12 1.23), 1986.

4. Авторское свидетельство, СССР, N 1266858, кл. C 12 N, 1986. (прототип).

5. Красильников М.А. Определитель бактерий и актиномицетов.- М., 1949.

6. Берге Д. Определитель микробов.- Балтимор, США, 1957.

Изобретение относится к производству лечебно-диетического кисломолочного продукта и представляет собой новых штамм молочнокислых бактерий Lactobacillus acidophilus-13. Целью изобретения является получение нового штамма Lactobacillus acidophilus-13, отвечающего современным требованиям, предъявляемым к лечебно-диетическим кисломолочным продуктам, и обладающего высокой биохимической активностью. Кроме общепринятых таксономических показателей разработаны новые критерии для выделения и отбора молочнокислых бактерий: устойчивость к ядохимикатам, широко используемым в сельском хозяйстве, ветеринарии; способность к активному заселению слизистой пищеварительного тракта и толстой кишки; сохранение нормального биоценоза кишечника; устойчивость к действию магнитных полей на выживаемость и сохранение активных биохимических свойств. Выделенный новый штамм Lactobacillus acidophilus-13. отвечает вышеперечисленным требованиям. 5 табл.

Штамм бактерий Lactobacillus acidophilus 9606 коллекция Музея культур Института микробиологии НАН Армении, используемый для приготовления лечебно-диетического кисломолочного продукта.