(54) СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПРЕПАРАТА ЖИВОГО НЕЙРОНА БЕСПОЗВОНОЧНОГО ЖИВОТНОГО
1
Изобретение относится к медицине и может быть использовано в нейрофармакологии, нейрофизиологии.
Известен способ приготовления препарата живого нейрона беспозвоночного животного путем помещения ганглия в раствор ггротеолитических ферментов 1.
Однако известный способ не позволяет сохранить целостную структуру всей нервной клетки.
Цель изобретения - сохранение целостной структуры всей нервной клетки.
Указанная цель достигается тем, что согласно способу приготовления препарата живого нейрона беспозвоночного животного предварительно инъецируют 0,02- 0,05°/о-ный раствор тдго же фермента в синусы межклеточного пространства ганглия и выдерживают его в растворе в течение 20-30 мин при концентрации 0,3-0,5«/о.
Способ осуществляют следующим образом.
Внутрь синусов сосудисто-нервной системы беспозвоночного (например, Clione limacina), которые омывают отдельные
клетки, вводят протеолитические ферменты в низких концентрациях (например, 0,02-0,05°/о-ная проназа) для того, чтобы расщепить самую прочную межнейронную связь в области щели синапса, которая
5 имеет белковую природу. После этого мозг беспозвоночного помещают в 0,3-0,5/о-ную проназу, которая омывает капсулу ганглиев снаружи. Мозг выдерживают в растворе 20-30 мин при 17-20°С. Затем его пе,Q реносят в 0,05-0,5%-ный раствор для наружной капсулы. Для этого коннективы мозга зажимают под пластамассовыми зажимами и под микроскопом типа МБС-2 производят декапсуляцию заточенными иглами, разделяя коллагеновые волокна в
15 Направлении коннектив. Далее препарат переносят в морскую воду (или соответствующий раствор Рингера). Продолжающуюся механическую препаровку на часовом стекле (без пипетирования объекта)
2Q осуществляют по ходу основных пучков нервных отростков в нейропиле и чередуют с покачиванием и промыванием объекта слабой струей раствора. Выделяют крупные и мелкие нейроны с больщим количеством дендритных ветвлений вплоть до концевых
постсинаптических шипикоподобных структур и пресинаптических бутонов.
Пример. Морскому ангелу длиной 4 см иньсцируют 0,7 мл 0,05%-ного раствора проиазы в синусную систему окологлото lioio нервного кольца. Препарируют нервное Ko.ihuo, состоящее из ганглиев и по.мещают его в ОЛ /о-ный раствор проназы на 25 мин для наружной обработки капсулы. Переносят препарат в О.Об /о-ный раствор, закрепляют в чашке Петри коннективы нласт.массовыми зажимами и под микроскопом iVlБ(2 уда.гяют капсулу одного или двух ганглиев. Тупыми электролитически заточенны.ми иглами осторожно разволокняют колЛагеновые волокна в направлении коннектиБ. Далее пипеткой осторожно пе)еносят препарат в морскую вод,у и там, че.редуя нромывапие объекта с чабой струей морской воды, с нокачивание.м и осто)ожным расплавлением, добиваются вымывапия изганглия сначала групп интактных. нейроно{5,.а затем 6 одиночных нейроiioii с сохран.е.нной системой депдритпых иств;1си.ййГ копневых бутонов и постсинапГПЧССК11.Х.ЛП.ИИИКОВ.
С но.мЬпдью предлагаемого способа осуществляют мягкую одновременную нротеолитическую обработку всех структурных компонентов нейрона, сводящую к минимуму его травматизапию. В то же вре.мя пропикакилпй в межклеточные и синаптические nie.iH фе)мепт разделяет наиболее прочную сая.1 на пре- и постсинаптические компопепты.
Получепный препарат пригоден д;1я диф(|)е|1епц|-1а.1ьного анализа пейротроппых
веществ, действующих раздельно на преили постсинаптическую часть синапса, для поиска способов облегчения регенерации поврежденного синапса, oпpeдev eния реальной сократительной снособности его компонентов. Препараты, полученные известными ранее способами, непригодны для этого.
Препарат, изготовленный предлагаемым снособо.м, перспективен для исследования ионных токов в мембране отростков методикой фиксации потенциалов. Он является пока единственным препаратом отростка, который полностью лишен глиальной оболочки и имеет достаточные для исследования линейные размеры.
Формула изобретения
Способ приготовления препарата живого нейрона беспозвоночного животного путе.м помещения ганглия в раствор протео;1итических ферментов, отличающийся тем, что, с пелью сохранения целостной структуры всей нервной клетки, предварительно инъецируют 0,02-0,050/о-ный раствор того же фермента в синусы межклеточного пространства ганглия и выдерживают его в растворе в течение 20-30 мин при концентрации 0,3--0,5%.
Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Костенко М. А., Вепринцев Б. П. Выделение изолированных нейронов прудовика и их электрические характеристики. - В кн; Биофизика живой клетки вып. 3. Пущино, 1972, с. 132 137.
