Способ консервирования спермы животных Советский патент 1983 года по МПК A61D7/02 

Изобретение относится к области искусственного осеменения сельскохозяйственных животных, в частности к способам консервирования спермы путем замораживания.

Известен способ консервирования спермы животных в пайетах, включающий разбавление спермы до половины конечной стадии разбавления защитной средой, содержащей 3% глицерина, охлаждение разбавленного семени до +4°С за 45-60 мин, вторичное разбавление семени защитной средой, содержащей 11% глицерина, расфасовку, в соломинки, эквилибрацию и, наконец, Зс1мораживание jero с последую-щим оттаиванием iF.

Недостатком этого способа является быстрое охлаждение семени до +4°С, отрицательное- влияние высокой концентрации глицерина и длительного времени контакта с ним живчиков, которое проявляется в нарушении апиксшьного края акросомы, разрушении устойчивости белково-липоидных комплексов, а после замораживания и оттаивания семени быков-производителей снижается подвижность живчиков и абсолютный показатель их живучести.

Кроме того, при длительном контакте живчиков с глицерином имеет место утечка ряда ферментов, амино5 кислот, жирных кислот и функциональных групп из клеток сперматозоидов в плазму что ведет к снижению биологической полноценности спермы.

Известен также способ консерви 0 рования спермл животных, включающий ее разбавление на первом этапе безглицериновой защитной средой, а на втором этапе - защитной средой с глицерином. При этом охлаждение проводят в течение 2 ч от 30 до а

замораживание проводят при -80°С .

Однако длительный контакт (более 30 мин) живчиков с глицерином приводит к нарушению устойчивости белко20во-липидных комплексов, морфологическим изменением акросомы, выходу в плазму из живчиков ферментов.

В результате этого значительно снижается активность живчиков пгосле

25 оттаивания и составляет примерно 22,5 балла.

Целью изобретения является повышение жизнеспособности и биологической полноценности сперматозоидов

30 после замораживания и оттаивания. Цель достигается тем, охлаждение спермы проводят от +30 со скоростью 0,4-0,5°C/MHHf от +15 до +10С со скоростью 0,30,4°С/мин и от +10°до +4°С со скорос.тью о, 2-0,3° С/мин, эквилибрацию и глицерином проводят при +4-+5°С течение 25-30 мин, а замораживание спермы проводят в парах жидкого азо та при температуре -120-140°С в течение 8-3,5 мин. П р и м е р. Технология приготов ления и консервирования семени сель СКОКОВяйственных животных заключает ся в следукмцем. Вначале готовят защитную среду для разбавления семени Для приготовления используют лактозу, фруктозу, рафинозу, сульфат маг ния, куриный желток и спермосан-3. Разбавление семени вышеуказанной средой проводят на половину конечной степени разбавления: температур среды в момент разбавления +30°С. Баночки с разбавленной спермой помещают в ванночки с водой температура KOTopoJ +30°С, и переносят в холодильную витрину с постоянной те пературой +4°С. Охлаждение семени проводят трехступенчато: от +30 до +15С, от +15 до +10°С и от +10 до +4°С. Охлаждение проводят путем добавления кусоч ков тающего льда или воды комнатной температукжа. При проведении опыта взято неско ко режимов охлаждения и изучено их влияние на биохимические и физиологические показатели живчиков после замораживания и оттаивания семени (см табл.1): Установлено, что оптимальным режимом охлаждения является режим 3. После охлаждения и выдержки семени при +4°С в течение 3,0-3,5 ч сперму разбавляют вторично той же защитной средой, но содержащей двполнительно 10 мл глицерина на 100 дистиллированной воды. Температура среды в момент допол нительного разбавления равна .

Режимы охлаждения семени

Таблица После второго разбавления семени лактозо-фруктозо-магниево-желточной средой, содержащей дополнительно глицерин, проводят расфасовку семени вручную или автоматически в полимерные соломинки объемом 0,5 мл, выдерживают их в витрине холодильника в течение 30 мин, после чего семя сразу замораживают. Замораживание проводят в широкогорлом сосуде Дьюара, для чего соломинки раскладывают горизонтально на специальной рампе и помещают ее над парами жидкого азота на уровне 3-4 см от уровня азота при следующих температурах (см. табл. 2) . Время замораживания составляет . 8 мин. Температуру замораживания семени контролируют термопарой и регулируют расстоянием от уровня жидкого азота до рампы, где горизонтешьно были расположены соломинки с семенем. Время выдержки семени в парах жидкого азота составляет 8 мин, после чего соломинки опускают в жидкий азот, где их карантируют в течение 30 дней, а затем переводят в спермобанк для дальнейшей отправки в хозяйства. В результате контакта семени с глицерином в течение 30 мин улучшаются биохимические и физиологические показатели живчиков,в частности такие , как подвижность живчиков и продолжительность их жизни после оттаивания (см. табл. 3). При предложенном режиме охлгждения достигается стабилизация морфологических, биохимических и физиологических показателей семени (см. табл. 4).. Данные показатели характеризуютсемя до его замораживания. В табл. 5 приведены качественные показатели семени быков-производителей после оттаивания. Предложенный способ позволяет улучшить качество оттаянной спермы, повысить оплодотворяемость животных при снижении количества доз семени.

Влияние различных режимов замораживания семени быков-производителей на подвижность и продолжительность жизни живчиков после оттаивания

Таблица2

различия статистически достоверны по отношению к прототипу

го

(в а

S С5 О

m EH

S Ш

ж S а м so ш ш о is

S

к ю

S я

Е е ш

R S m

(и 0)

о я со к гв О

0 Ш

og

о I в X д о t; S

Ш Ю ffl

н о S (d к к к S

о - т к я S

OS

и

ег. а

Ш S

Ш d с; ц. S Ш и R н

о h П5 с со

« m

к 0) «

я а о Ф я е S и

Ш о,

и 0).

sg

i; о К а Ш S

3

Ш ш а. ts; о я

0) S

Sо

шS

о.и

яш

V

и S

S ti

ж ш в; ЕН к ш

R S 03 ,и

.

с

S

н о в о ft

G

9 S

X

ш 3 о я н о

о и

я S

ш п о н и о «

S

к

о ш

g

и и S

н

ПЗ

н о

к

я

g

ti

(О

(d

at

9 864ll10

Морфологические, бийхимические и физиологические показатели семени до замораживаиия

„-„.„.. Предложенный способ Патент Великобритании

показательохлаждения семени 1479648 Устойчивость белково-хслестериновых комплексов. мкг холестерина на . живчиков22116, Устойчивость белково-фосфолипидных комплексов, мкг%фосфолипидов2195fl7,2 % живчиков с нормальной акросомой75±1, Активность глутаминоаспаргиновой трансаминазы в плазме семени16112,5 Подвижность живчиков8,, 0,01; ,05. Результаты испытания предложенного замораживания с применением ЛФРИ : . ::.1.1 Опыт, №Показатель

7Устойчивость белково-холестериновых комплексов, мкг холестерина

на 10 живчиков .185

8Оплодотворяемость коров от первого осеменения67,5

Формула изобретения ,60 ьм защитной средой,содержащий глицеСпособ консервирования сперкы жи- раживание,о тличающийся тем, вотных, включающий ее разбавление что, с целью повышения жиэнеспособбезглицериновой защитной средой, ох- ности и биологической полноценности лаждение, повторное разбавление спер-65: спермотозоидов замораживания

Таблица4

{М1Н,эквилибрацию с глицерином и. Зсшо203±5,8 . . ,2 69,0±1,3 184t2,8 7,5±0,06 аблица5 емпературного аемый .способ 11 9864И t и оттаинания, охлаждение спермы проводят от +30 до со скоростью 0,4-0 jS C/MHH, от +15 до со скоростью 0,3-0,4 С/мин и от +10 до со скоростью 0,2-0,3 С/мин, эквилибрацию с глицерином проводят при +4-:+5 С в течение 25-30 мин, а замораживание спермы проводят в па12pax жидк.ого аЗота при температуре --120-140 С в течение 8-8,5 мин. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Ihe French straw techniqui, 1976, 2. Патент Великобритании №1479648, кл. А 01 N 1/202, 1977 (прототип).