Способ идентификации у.pSeUDo-тULеRеULоSIS U у.ентеRосоLIтIса Советский патент 1983 года по МПК C12N1/00 

1 Изобретение относится к медицине а именно микробиологии. Известен способ идентификации у. pseudotuberculosiS и Y, enterocolitica, основанный на их свойстве ферментировать мочевину l. Известен способ идентификации У. pseudotuberculosis и У. enterocolltica путем посева исследуемого материала на плотную селективную среду с последующим пересевом чисто культуры на цветную дифференциальну среду, содержащую мочевину, инкубацией и учетом результатов 21. Однако известный способ является недостаточно точным и не позволяет дифференцировать У. pseudotuberculo sis от У. enterocolitica. Цель изобретения - повышение точ ности способа. Поставленная цель достигаетсялте что согласно способу идентификации У, pseudotuberculosis и У. enterocolittca путем посева исследуемого материала на плотную селективную среду с последующим пересевом чистой культуры на цветную дифференциальную среду, содержащую мочевину, инкубацией и учетом результатов культуру . дополнительно пересевают на питательный агар с содержанием 5,1-5,3% NaCC и питательный агар с содержанием 3,6-3,7% NaCE и при наличии ферментации мочевины на цветной дифференциальной среде и отсутствии роста на обеих средах, содержащих NaCe, идентифицируют У. pseudotuberculosis, а при наличии ферментации моЧевины на цветной дифференциальной среде и отсутствии рюста на питательном агаре с содержанием 5,1-5,3% NaCE идентифицируют У. enterocolItica. Пример. Производят посев фекалий больного на среду Эндо. Колонию бактерий, выросшую на среде Эндо через 2k ч инкубации при 37С, снимают петлей и суспендируют в капле 0, стерильного раствора NaCE на стекле стерильной чашки Петри. Од ну петлю взвеси бактерий засевают на скошенный столбик цветной дифференциальной среды, содержащей 900 мл 1%-го агара Хоттингера и 100 мл раст вора, представляющего собой глюкозу (1 г), лактозу (10 г), мочевину (10 г), комплексный индикатор, состоящий из индикатора Андреде (100 мл), бромтимолового синего (О, г) - 20 мл. Цветную дифференциальную среду готовят по известной методике 21. Одновременно по одной петле взвеси бактерий засевают радиальным штри хом на сектор питательного агара с содержанием 5,,3 NaCB и сектор питательного агара с содержанием 3,7 NaCC в чашках Петри. Посевы выращивают при 37°С 18-2 ч, после чего учитывают результаты. На цветной диф ференциальной среде рост бактерий сопровождается синей окраской косячка и столбика, что свидетельствует о ферментации мочевины. На солевом питательном агаре с содержанием 5,3% NaC6 нет роста бактерий, на солевом питательном агаре с содержанием 3,7% NaK есть рост бактерий по ходу посева, следовательно, выделенный микроорганизм относится к виду Y. enterocoli t ica. Изучена чувствительность к различным концентрациям NaC6 в питатель ном агаре у 75 штаммов Y. enterocoli tica (35 эталонных культур - 7 штаммов серогрупп 1А, IB, II, Ml, IV, V, yi, 28 штаммов серогрупп от 01 до ОЗ всех пяти биоваров) и 0 клинических штаммов преимущественно серогрупп 03 (1А) и 09 (V), 60 штаммов Y. pseudotuberculosiS (13 эталонных культур - 6 штаммов серогрупп 1А, IB И, III, IV, V, 7 штаммов тех же серогрупп из другой коллекции) и Ц7 клинических штаммов всех сероваров, .преимущественно серовара 1А, 12 клинических штамма всех видов Proteus и 39 клинических штаммов других энтеробактерий KlebsielJa pneumoniae, Citrobacter breunchi, Enterobacter cloacae, Serratta marcescens. Указанные культуры засевают на среду Эндо для получения изолированных колоний и инкубируют при 37 С 2Ц ч.-По одной колонии суспенди руют в капле 0, раствора NaCC и засевают по одной петле взвеси на сектора питательного агара с различными концентрациями NaCE от 1,5 до Q%. Через ч инкубации учитывают рост бактерий по ходу посева. Солевой питательный агар готовят на основе стандартного питательного агара из рыбного гидролизата, при отом при добавлении в среду NaCP до требуемой концентрации учитывают его первоначальное содержание (0,6% NaCP) в сухом питательном агаре. Среду стерилизуют при 120 С 20 мин и разливают в стерильные чашки Петри. Рост всех исследуемых штаммов Y. pseudotuberculosiS и Y. enterocol it ica подавляется при концентрациях в питательном -агаре NaCE 5,05,3%, при которых все остальные энтеробактерий хорошо растут, их рост подавляется преимущественно при концентрации NaC6 779%..Хлористый натрий в концентрации ,3% в питательном агаре позволяет четко дифференцировать 100% штаммов Y. pseudotuberculosi s и Y. enterocolitica от других видов энтеробактерий, ферментирующих мочевину. Хлористый натрий в концентрации 3,5-3,7% подавляет рост 100% штаммов Y. pseudotuberculos и % штаммов Y. enterocolitica, т.е. испытание роста бактерий на питательном агаре с содержанием 3,5-3,7% NaCP позволяет провести дифференциацию 9б + 2,2% штаммов Y. enterocolitIca от Y. pseudotuberculosis. Использование изобретения позволяет повысить точность идентификации в 3,6 раз и тем самым улучшить диагностику псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза. Формула изобретения Способ идентификации Y. pseudotur berculosis и Y. enterocolitica путем посева исследуемого материала на плотную селективную среду с последующим пересевом чистой культуры на цветную дифференциальную среду, содержащую мочевину, инкубацией и учетом результатов, отличающий с я тем, что, с целью повышения точ ности, культуру дополнительно пересевают на питательный агар с содержанием 5,,3% NaCB и питательный агар с содержанием 3,6-3,7% NaCf и при наличии ферментации мочевины на

5988865

цветной дифференциальной среде и от-Источники информации, сутствии роста на обеих средах, со-принятые во внимание при экспертизе держащих NaC6, идентифицируют Y.pseu- 1. Лабораторная диагностика псевdotuberculosis, а при наличии фермен-дотуберкулеза. Методическое письмо, тации мочевины на цветной дифферен- 5Владивосток, 1968, 12. циальной среде и отсутствии роста на 2. Методические рекомендации по питательном агаре с содержанием 5,1-лабораторной диагностике кишечного 5,3 NaCE идентифицируют Y. entero-иерсиниоза. Иркутск, 1979, 8 (просо It tea.тотип).