где Й1-Ы(СНз)2. - NHC-iHs, . R2 (CHj)2 , - NHC2H5; R/«.-Q -(3 СООН COOCjWj при условии: а) R -N(СИ3)3 К„ N(CH. 1(СНэ)2 пиронин С) б)Кг, -Ы(С11э)2 R2 )2 vQ родамин С в)Ri-NHCjHj R i-NHCjH, «-Q родамин 6Ж При облучении ультрафиолетовым светом липиды обнаруживают в виде темных пятен на общем светящемся фоне. Эффект имеет место за счет липотропности иода и его способно ти в ионной форме гасить флуоресц цию. Пример 1. Готовят суспе зию 2,5 г силикагеля в 6 мл 0,00 ного (вес) водного раствора пирод на G и наносят ее на пластину 9х После высушивания пластины актив руют при 30 мин. На старто линию наносят исследуемый раство экстракт по Фолчу из биопрепарат Протеин - в количестве 0,001 м с содержанием липидов в пробе f50 мкг. В качестве контроля беру экстракт по Фолчу из сыворотки крови/ распределение липидов которого в данной системе растворителей известно и проверено по стандартным растворам кефалина, холестерина, пальмитиновой кислоты, триолеина и эстерифицированного холестерина. Липиды фолчевских экстрактов подвергали хроматографии в системе петролейный эфир:диэтиловый эфир:ледяная уксусная кислота (90:10:1). После разделения липидов пластины помещают на 3-5 мин в камеру с парами иода и затем обнаруживают пятна липидов при облучении ультрафиолетовым светом ( 180-320 нм). Пример 2. Аналогично примеру 1 готовят пластины для хроматографии, на стартовую линию наносят в виде точечных пятен по 1 мкл хлороформного раствора липида (кефалин, свободный холестерин, пальмитиновая кислота, триолеин, эстерифицированный холестерин). На одну пластину наносят один класс липидов в виде растворов с заданным содержанием вещества в 1 мкл, для этого готовят серий разведений - 10, 10, Ю , 10 г/мкл. После проведения хроматографии и проявления пятен в парах иода, как описано в примере 1, пятна липидов обнаруживают в ультрафиолетовом свете. Аналогично готовят взвесь силикагеля в 0,005%-ном (вес) растворе (водном) родамина С или родамина 6Ж и наносят ее на пластины для хроматографии . После приготовления пластин проводят хроматографию и проявление липидов. Чувствительность предлагаемого способа к различным классам липидов в сравнении с известным определением в парах иода представлена в табл. 1. Таблица 1
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| Перхлорат 2,6-ди- @ -метоксифенил-4-фенилэтинилпирилия как импрегнатор в тонкослойной хроматографии | 1984 |
|
SU1189861A1 |
| Реагент для проявления пятен в тонкослойной хроматографии ароматических аминов | 1989 |
|
SU1642372A1 |
| СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КАЧЕСТВЕННОГО СОСТАВА ФОСФОЛИПИДНОГО КОМПЛЕКСА | 2006 |
|
RU2335767C1 |
| СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛИПИДОВ | 2012 |
|
RU2513101C1 |
| Способ определения активного реабилитационного резерва у больных хроническими неспецифическими заболеваниями легких | 1990 |
|
SU1777087A1 |
| СПОСОБ АНАЛИЗА ОТПЕЧАТКА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МАСС-СПЕКТРОМЕТРИИ | 2006 |
|
RU2417749C2 |
| Способ обработки пробы воды для количественного определения содержания алкилсульфатов и алкилбензолсульфонатов | 1975 |
|
SU769429A1 |
| СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ОСТРОГО ТОКСИЧЕСКОГО ПОВРЕЖДЕНИЯ ПЕЧЕНИ | 2012 |
|
RU2527770C2 |
| Способ определения монометиланилина в углеводородных топливах | 2015 |
|
RU2609864C1 |
| СПОСОБ ОЦЕНКИ СТЕПЕНИ ТЯЖЕСТИ АТОПИЧЕСКОГО ДЕРМАТИТА | 2005 |
|
RU2310866C2 |
+
+ 4- +
+ +
+ + + +
+ + +
+ + f
+ +
+ + +
+ + О
+ +
+ + +
+ . + ±
Пиронин G Класс 10Ч 10 10Л .липидов
+ + +
+ + +
+ -f + + + + Примечание. Здесь и далее 4 опытов. Как видно из табл. 1, чувствительность предлагаемого способа на порядок выше по отношению ко всем классам липидов, т.е. составляет 10 влюсто г для всех классов кроме пальмитиновой кислоты, для которой чувствительность составляет 10 вместо г. Пример 3. Готовят суспензию 2,5 г силикагеля в 6 мл водного раствора пиронина G, родамина С и родамина 6Ж различных концентраций и проводят обработку пластин, хромаПродолжение табл. 1
ij j.jb...b/i..Ik «.а . ;. J
Родамин бЖ
Обычное
Родамин С
f
+ -f +
+ + + - 4- t юв 16 блицах в каждс 4 определении не менее тографию и проявление липидов по примеру 1. Липиды на пластины наносят в соответствии с определяемым минимумом Ю г для всех классов липидов, кроме свободных жирных кислот, для которых определяемый минимум 10 г. Результаты определения установления оптимальной концентрации и ее пределов для водных растворов флуорохромов при определении липидов предлагаемым способом приведены в табл. 2.
Как видно из табл. 2, оптимальная концентрация флуорохромов для определения всех классов липидов 0,005%. Снижение концентрации до 0,001% не дает четкой картины при определении всех классов липидов, увеличение свыше 0,025% не влияет на результат определения, .но сильное свечение фона приводит к быстрому утомлению зрения. Поэтому рабочие концентрации растворов лежат в пределах 0,0250,005%. Оптимальная концентрация в этих пределах практически не выявляется.
Пример 4. Определение оптимального времени проявления пятен
1 + + + t + + ± + + + ±
липидоБ на хроматогт}аммах, флуорохромировакных О,005%-ным водным раствором пкронина G.
Аналогично примеру 1 готовят 5 пластин, флуорохромированных Q,005%ным водным раствором пиронина G,
родамина С или родамина бж. На стартовую линию всех пластин наносят в виде точечных пятен хлороформные растворы липидов в концентрации
10 г/мкл в количестве 1 мкл. Хроматографию всех пластин проводят обычным способом, а затем помещают их в камеру с парами иода. Время проявления пятен липидов для каждой
пластины указано в табл. 3.
Таблица 3
+ + + +
+ + + +
+ + +
+ + + +
