Способ получения моногалактозилдиглицерида Советский патент 1983 года по МПК A61K35/78 

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МОНОГАЛАКТОЗИЛДИГЛИЦЕРИДА 1 /. Изобретение относится к медицинской) прсмьгашенности и касается получения гликолипидов из сырья растительного происхождения. Известен способ получения моногалак-i тоаипдиглицерида, иключаютций экстракцию липидов органическ{а1 1 растворителем из сырья растительного происхождения с последующим растворенией упаренного экстракта в хлороформе, выделением пелевого продукта на колонке с силикагелем и его эпюцией смесью хлорофо{%1 ацетон Cl}. Однако известный способ не обеспечивает достаточно высокого выхода целевого продукта получаемого в смеси с пип ментом. Целью взобрегения является повыш&ние выхода и чистоты целевого продукта. Цель достигается тем, что в способе получения моногалактозилдиглицерида, включающем экстракцию липидов оргаш.. ческим растворителем из сырья раститеяь ного происхождения с последующим рас-. творением упаренного экстракта в хлороформе, выделением целевого продукта на колонке с силикагелем и его элюцией смесью хлороформ-ацетон, экстракции ацетоном подвергают водоросли Petvet 0 wrijyliHi затем проводят их повторную экстракшю смесью хлороформ-ацетон при их соотношении 1:1, упаренный экстракт предварительно растворяют в смеси метанол-гексан щми их соотношении 1:1 и пос ле перерастворения в хлороформе выделяют целевой продукт на колонке с силикагелем при соотношений экстракт-силикагель 1:30, а элюцию целевого продукта смесью хлороформ-ацетон Проводят при их соотношении 9:1 и дополнительно испопь«( зуют смесь хлороформ - серный, эфир при их соотношении /9:1/ - /8:2/. Пример 1. а) получение экстракта. 0,7 кг сырой ткани водоросли PeBvei a writjhi i измельчают на мясорубке, экстрагируют ацетоном (ткань-растворвнтель 1:5) в гомогенизаторе в течение 3 минJ фильтруют. Остаток ткани экстра- гвруют дважды гслороформ-вцетоном 1:1 (ткань растворитель 1:5). К ацетоновому экстракту добавляют равное количество хлороформа и небольшое колщество воды до разделения на 2 фазы. Водный слой и межслой отбрасывают. Нижний хлороформенный слой объединяют с хлорофо мацетоновыми экстрактами, упаривают, досуха, перерастворяют в 20 мл метанолгексана 1:1 и проводят противоточное распределение. В делительную воронку с 1 л метанрл-гексановой смеси 1:1 ливают обогащенный глшсолшшдамн экстракт водоросли, перемешивают и оставляют до полного разделения, после чего нижнюю мета вольную фазу сливают в другую делительную воронку и добавляют до полного разделения. Процедуру повторяют 6 раз, после чего нижний метанольный спой упаривают досуха и перерастворяют в хлороформе. Из 0,7 кг водоросли получают 1,5 г обогащенного гликолипидами экстракта, гликолипиды составляют 74,2%. В их состав входят: моногалактозшщиглидерид 24,4%,дигалак тозилдиглицерид - 30,5%, сульфохиновозилдиглицерид - 31,4%, неизвестный гпиколишад - 13,6%. Вьщеление моногалактозилдиглицерида на колонке с силикагелем, б) 45 г силикагеля oL4O/lOOM (Чехословакия) замачивают в хлороформе и Ейыливают, в колонку (диаметр 1,9; вы.сота столбца адсорбента - .26 см). 1,5 г обогащенной гликолипидами фракции растворенной в 30 мл хло роформ садят на приготовленную колонку, исполь зуя соотношение гликолипидный экстракт силикагель 1:30 (г/г). Ноума тока 3,5 мл/мин. 1.16 колоночных объемов (1,3 л) системы хлороформ-серный эфир 9:1 эл8 ируют пизрменты (желтые, оранжевые). 2.23 колоночных объема (1,8 л) сис темы хлорЪформ-серный эфир 8:2 элюИруют зеленые пигменты; 3.3 колоночных объ&Лй (0,2 л) сио темы хлороформ-серный эфир 1:1 ируют следы пигментов; 4.42 колоночны с о&ь&ла (3,4 л) си т«у1ы хлороформ-ацетон 9:1. Первые пят колоночных объемов отбрасывают. 6-26 колоночных объемы собирают отдельно, как содержащие основную часть монога- лактозилдиглицерида, составляющего) 85% от всего количества мокогалактозилд глрцерила в исходном липидномэкстренте или 15,3% от общих липидов исходно экстракта. Чистота продукта 99,5%. Вы од 230 мг. 27-42 колоночными объмами элюируют моногалактоаилдиглицеид с примесью зеленого шсгтлента. Выод 30 мг, чистота Э8%. Общий выход целевого п эодукта 17,3% т общих липидов исходного экстракта. Вьзделенный.продукт имеет структурую формулу: Н Кои Н-С-О-С-R им/ I-к Я -с-R , R жирные кислоты. Для )-тошсослойной хроматографии целевого продукта использовали: 1.одномерную хроматографию в системе ацетон-бензол-вода 91:30:8. На пластинке, обнаруживается единственное пятно; 2.двумерную: 1, направление хлороформацетон-метанол-муравьиная кислота 150:43:43: 9:8; 2, напре1вление ацетоибевзол-муравьиная кислота-вода 200: :27:2,7:8,5. Двумерная микро-тонкослойная хроматография показывает единственное пятно. Жирные кислоты: 1,4% . 0,7% О,1% 4,6% 9,7% C g:3ur6 3,4% 15,4% v g:4u;3 25,3% С2о:4и 6 16,j8% C2o:4ur3 1,2% C2(j:5ur3 14,6% Молекулярный вес 795,30 Пример 2, а) по;1учение экстрак та.. Экстракт получают как в примере 1. б) Выделение моиогада 1тозилдиглицервда на колонке с силикагэлем. 34 г сшшкагеля ci 4О/1ООМ (Чехословакия) замачивают в хлороформе и выливают в колонку (диаметр 1,9 см; высота столба адсорбента - 19 см).2,3г обогащенной гликолипидами фракции, раотворенной в 20 мл хлороформа, садят на приготовленную колонку, используя соотношение гликолипидвыб эк(;тракт: силикагель 1:15 (г/г) Норма тока растворителя 4,5 мл/мии. Для элюции используют: 1. 2О колоночных (1,О6 л) системы хлороформ: серный эфир 9:1. Эпюируют красные пигмешъ и наблюдают проскок гпикопшщдов (моно-.дигапактозипдигпицерва, супьфохйновозилдиглицернд, неизвестный гликотшид).

2.25 КОПОВОЧЯЫ5С объема (1,3 п)сиотемы хлороформ : серный эфир 8:2. Элюируются зепевйе пигмейты с проскоком рлшсопщгадов.

3.3 колоночных объема (0,16 л) системы хлороформ: серный эфир 1:1. Эшоируются следы пигментов, небольшое .копичество гликолтащдов.

4.5р колоночный объемов (2,6л) системы хлороформ: ацетон 9:1. Элюи|)уют моногалактоэшадирлицерид с примесью неизвестного гликолипида- и дигалактозш диглшериаа. Чистота целевого продукта сбставляет около 83%.

Использование предлагаемого способа выделения моногалакгозилдиглицер1ода по с раввению с известным способом позволяет быстро и просто получить хроматографически чистый продукт за счет получения обогащенного гликолипидами экстракта, его предварительной очистки от пигментов йротивоточным распределением и разделения на силикагелевой колонке, с дочисткой щсплентов смесями хлороформсерный эфир и элюпкей целевого продукта хлорофо1м-ацетоном.

Получаемый моногалактозилдиглицерИд в 4О.-45 раз дешевле стоимости продукта близкой чистоты, выпускаемого в США фигмой Supeeco.

Формула изобретения Способ получения моногалактозилдпглицерида, включающий экстракцию органическим растворителем из сырья растительного происхождения с последу- ющим растворением упаренного экстракта в хлоро4юрме, выделением пелевогр продукта на колонке с силикагелем и его элюцией смесью хлороформ-апетон, о т л и ч а ю щ и И с я тем, что, с целью пов1Ь1шения выхода и чистоты целевого продукта, экстракщш ацетоном подвергают водоросли Peevetia wriSS i , затем проводят их повторную экстракцию смесью хлороформ-ацетон при их соотношении 1:1, упаренный экстракт предварительно растворяют в смеси метанол-Гексан 1ФИ их соотношении 1:1 и после перерастворения в хлороформе выделяют целевой продукт на копцнке с силикаге- лем при соотношении экстракт-силикагель 1:ЗО, а элюдшо целевого продукта смесь хлороформ-ацетон проводят при их соотношении 9:1 и дополнительно используют смесь хлороформ - серный эфир при шс соотношении /9:1/ - /8:2/.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. М. 3amada and М. Ohmori. The separation and the quantitutive determination of glucoand phospbglyceri des from leaves by a single silticic column chromabography. Sci pap.col. ; gen, educ. univ. Tokyo, 1974, 24(1), 53-63.