Способ размораживания биологических объектов Советский патент 1983 года по МПК A01N1/02 

(54Х СПОСОБ РАЗМОРАЖИВАНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИХ

ОБЪЕКТОВ

1

Изобретение относится к криобиологии, а именно к способам разморажийания биологических материалов.

Известен способ размораживания спермы быков в ампулах объемом. 1-1,5 мл путем погружения их в воду с температурой 5 30-40 С на 1 -1,5 мин и выдерживания в ней до тех пор, пока в ампулах останется тонкий стержень льда. Дальнейшее оттаивание проводится при комнатной температуре 1.10

Известен способ размораживания биологических объектов в водяной бане при воздействии колебаний (механических) 2.

Недостатками известных способов является низкая выживаемость i клеток, обусловленная неравномерностью распределе- 15 ния температуры по объему контейнера и длительностью процесса размораживания.

Целью изобретения является повышение выживаемости клеток.

Поставленная цель достигается тем, что 2о согласно способу размораживания биологических объектов в водяной бане при воздействии колебаний, колебания производят ультразвуком интенсивностью -3 Вт/см и частотой 20-2640 кГц.

Способ осуществляют .,следуюш,им образом.

Замороженный в ампулах или в контейнерах биологический материал погружают в теплую воду (водяную баню) с температурой 40-45°С. Одновременно через воду пропускают ультразвуковые колебания интенсивностью 1-3 Вт/см и частотой 20- 2640 кГц. Оттаивание длится до тех пор, пока температура клеток не достигнет 5- 10°С. После чего ампулы или контейнеры с биологическим материалом вынимают из ванны и прекраш,ают воздействие ультразвуковыми колебаниями.

Пример 1. Контейнеры с костным мозгом, замороженным до -196°С с 15% ПЭО-400, опускают в водяную баню с температурой 40°С. Одновременно с этим головку преобразователя ультразвуковых колебаний вводят в акустический контакт с баней. Интенсивность УЗ-колебаний составила 1,0 Вт/см, а частота 20 кГц. После того, как температура оттаявшего костного мозга достигла 37°С, контейнер вынимают из бани, а УЗ-колебания отключают. Выживает в среднем 92,2±3,57оклеток.

Пример 2. Контейнер с костным мозгом, замороженным до - 196°С с 15% ПЭО-400, опускают в водяную баню с температурой 40°С. Включают источник УЗ-колебаний, находящийся в акустическом контакте с баней. Интенсивность УЗ-колебаний 3.5 Вт/см , частота 3500 кЦ. После того, как температура оттаявшего костного мозга составила 3°С, контейнер вынимают из бани, а источник УЗ-колебаний отключают. Выживает 93,9 ± 3,9% клеток.

Пример 3. Контейнер с костным мозгом, замороженным до -196°С с 15% ПЭО-400, опускают в водяную баню с температурой 40°С, включают источник УЗ-колебаний с интенсивностью 0,8 Вт/см, частотой 15 кГц. После того, как температура оттаявшего костного мозга составит 37°С, контейнер вынимают из бани, источник УЗ-колебаний выключают. Выживает 83,0 ± 4,5% клеток.

Пример 4. Контейнер с костным мозгом, замороженным до - Юб с -15% ПЭО-400, опускают в водяную баню с температурой 40°С одновременно включают источник УЗ-колебаний, интенсивность колебаний 3,5 Вт/см , частота 3500 кГц. После того, как температура оттаявшего мозга составила 37°С, контейнер вынимают из водяной бани, а источник УЗ-колебаний отключают Выживает 84,5 ±4,0% клеток.

Приведенные примеры показывают, что сочетание действия нагрева и УЗ-колебаний способствует повышению сохранности живых клеток в среднем на 20-25% в диапазоне частот 20-2640 кГц и интенсивности колебаний 1-3 Вт/см. При выходе

характеристик УЗ-колебаний за указанные пределы выживаемость клеток резко снижается.

Сочетание действия нагрева и УЗ-колебаний ускоряет теплообмен между стенками контейнера и теплой водой с одной стороны и между нагреваемыми стенками и содержимым контейнера с другой стороны. Ускорение теплообмена происходит с одновременным увеличением равномерности распреде4 1ения температур в ванне и размораживаемой жидкости, что устраняет опасные градиенты температур и способствует выживаемости клеток на 20-25%.

Формула изобретения

Способ размораживания биологических объектов в водяной бане при воздействии колебаний, отличающийся тем, что, с целью повышения выживаемости клеток, колебания производят ультразвуком интенсивностью 1-3 Вт/см 2 и частотой 20-2640 кГц.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

при температуре - 196°С. Харьков. «Прапор 1963,

2.Виноград-Финкель Ф. Р. и др. Методы долгосрочного хранения в замороженном состоянии эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов, предназначенных для трансфузий. Методическое письмо. М., 1969 (прототип).