Изобретение относится к микробиологии и может найти применение при получении иммуноглобулина с диагностического бруцеллезного пероксидазного сухого, используемого при проведении иммуноферментного анализа.
Известен референтный штамм Brucella melitensis 16M, обладающий характерными для данного рода культурально-морфологическими и биологическими свойствами.
Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемому положительному эффекту является штамм Brucella melitensis 565, ранее используемый в сочетании со штаммом Brucella abortus 146 для получения поливалентной сыворотки.
Недостатком вышеназванных штаммов является содержание в них шероховатых колоний более 8% , что не позволяет использовать их для получения сыворотки к S-антигенам.
Целью изобретения является изыскание штамма, находящегося в стойкой S-форме с устойчивой вирулентностью для замены штамма Brucella melitensis 565.
Штамм Brucella melitensis N И-297 выделен от больного, депонирован в коллекции живых культур лаборатории бруцеллеза научно-иссследовательского института эпидемиологии и микробиологии им. Н. Ф. Гамалеи АМН СССР (НИИЭМ) под N 791 и характеризуется следующими культурально-морфологическими и физиолого-биохимическими признаками.
Культурально-морфологические признаки. Мелкие полиморфные коккобациллы размером 0,4-0,8х0,4-2,2 мкм, встречаются по одной, реже в коротких цепочках. Спор и капсул не образуют. Неподвижные. Грамотрицательные. На бульоне Мартена рН 6,8 при 37оС через 48 ч дают стойкое равномерное помутнение. На агаре Мартена с добавлением 1% глюкозы и 1,5% глицерина рН 6,8 образуют выпуклые колонии правильной округлой формы с равными краями, гладкой поверхностью, влажные, маслянистые, белесоватые при падающем и янтарно-желтые в проходящем свете, диаметром 2-3 мм.
Физиолого-биохимические признаки. Аэроб. Температурный диапазон роста 20-40оС. Оптимальная температура роста 37оС. Оптимум рН 6,6-7,4. Каталозоположительный. Индол не образует. Нитраты восстанавливает до нитритов. Обладает высокой уреазной активностью (возникает покраснение среды Кристенсена через 5 мин), не продуцирует сероводород, не лизируется фагом "Тб" (RTД˙104RTД), не диссоциирует, находится в стойкой S-форме, резистентен к разведениям тиотина 1: 25, 1: 50, 1: 100 тысяч) и фуксина (1: 50 и 1: 100 тысяч). Не требует для культивирования повышенного содержания СО2. Агглютинабелен - агглютинируется поливалентной сывороткой до титра 1: 3200 (с. 33; 1267, годн. 06.91 г. ) и моносывороткой антимелитензис; моносывороткой антиабортус не агглютинируется.
Хранение штамма осуществляют в лиофильно-высушенном состоянии в ампулах. После лиофилизации все свойства штамма сохраняются. Многократные пересевы и лиофилизация не влияют на антигенные свойства штамма (срок наблюдения семь лет).
Антигенные свойства. При иммунизации кроликов вызывает образование специфических антител.
Штамм Brucellа melitensis N И-297 отличается от штамма прототипа (Brucella melitensis N 565) отсутствием в суспензии шероховатых колоний и устойчивой вирулентностью.
Сущность изобретения поясняется следующим конкретным примером использования штамма Brucellа melitensis N И-297.
Кроликов породы Шиншилла массой 2,5-3 кг иммунизируют взвесью живых клеток в 0,85% -ном растворе натрия хлорида 48-часовой агаровой культуры бруцелл штаммов Brucella melitensis N И-297 и Brucella abortus 146. Животным вводят подкожно трехкратно в четыре точки спины вдоль позвоночника 0,5 мл (2 ˙109 микробов), 0,75 мл (3˙ 109 микробов), 1,0 мл (4 ˙109 микробов) смеси в равных количествах культур с равным объемом полного адъюванта Фрейнда с недельным интервалом. Через две недели после последней инъекции вводится подкожно в область внутренней верхней трети поверхности бедра 1,0 мл (4 ˙109 микробов) смеси культур в 0,85% растворе натрия хлорида. Через 14 дней после окончания иммунизации кроликов обескровливают. Сыворотку инактивируют прогреванием при 56оС в течение 30 мин и добавлением мертиолата натрия 1: 10000. Агглютинирующая сыворотка бесцветная, слегка опалесцирующая, обладает высокой активностью и специфичностью. Хранится при 4оС в лиофилизированном виде в запаянных ампулах. Специфический титр сыворотки при ИФА составляет 1: 1827889± 155817.
Штамм Brucella melitensis N И-297 и Brucella abortus 146 использовались для получения двадцати серий кроличьей поливалентной гипериммунной сыворотки к бруцеллам.
Сыворотку используют для получения иммуноглобулина с диагностического бруцеллезного пероксидазного сухого. (56) Joint FAO/WHO Expert Committee on Brucellosis. - Sixth Report World Health Organization. Technical Serlеs 740, World Health Organization, Geneva, 1986. - 133 p.
Методические рекомендации по обнаружению возбудителя бруцеллеза иммуноферментным методом (С. П. Меринов, Т. Ю. Загоскина, Е. П. Голубинский, О. Д. Захлебная и др. - Иркутск. - 1984. - 7 с.
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИВАЛЕНТНОЙ ДИАГНОСТИЧЕСКОЙ БРУЦЕЛЛЕЗНОЙ СЫВОРОТКИ | 1999 |
|
RU2173169C2 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКОЙ СЫВОРОТКИ | 1991 |
|
RU2010577C1 |
| ШТАММ ГИБРИДНЫХ КУЛЬТИВИРУЕМЫХ КЛЕТОК ЖИВОТНЫХ MUS MUSCULUS L. - ПРОДУЦЕНТ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ, СПЕЦИФИЧНЫХ К ПРЕПАРАТУ БЕЛКОВ БРУЦЕЛЛ С МОЛЕКУЛЯРНЫМ ВЕСОМ 18 И 38 КД | 1996 |
|
RU2113475C1 |
| ШТАММ BRUCELLA ABORTUS, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ И ПРОФИЛАКТИЧЕСКИХ БИОПРЕПАРАТОВ ПРОТИВ БРУЦЕЛЛЕЗА ЖИВОТНЫХ | 1997 |
|
RU2130068C1 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКОЙ АГГЛЮТИНИРУЮЩЕЙ СЫВОРОТКИ ПРОТИВ БРУЦЕЛЛ В L-ФОРМЕ | 2003 |
|
RU2242765C1 |
| ШТАММ БАКТЕРИЙ BRUCELLA ABORTUS, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ПРИ ПОЛУЧЕНИИ МОНОСПЕЦИФИЧЕСКОЙ СЫВОРОТКИ ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ БРУЦЕЛЛ В R-ФОРМЕ | 1999 |
|
RU2159808C2 |
| АНТИГЕН ПОЛИВАЛЕНТНЫЙ КОРПУСКУЛЯРНЫЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ЛЕЧЕБНЫХ И ПРОФИЛАКТИЧЕСКИХ БИОПРЕПАРАТОВ ПРОТИВ БРУЦЕЛЛЕЗА | 2006 |
|
RU2330681C1 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИГЕННОГО ПРЕПАРАТА ИЗ БРУЦЕЛЛ В L-ФОРМЕ | 2009 |
|
RU2416429C2 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-СУБКУЛЬТУР ШТАММА BRUCELLA ABORTUS И-206 | 2003 |
|
RU2263142C2 |
| Способ получения бруцеллёзной моноспецифической сыворотки anti-abortus | 2016 |
|
RU2639127C2 |
Использование: микробиология, получение поливалентной гипериммунной сыворотки к бруцеллам, иммуноглобулин диагностический бруцеллезный пероксидазный сухой, обнаружение бруцеллезного микроба, иммуноферментный анализ. Сущность изобретения: штамм Brucella meliten SiS И-297 выделен от больного, не диссоциирует, агглютинабелен - агглютинируется поливалентной бруцеллезной сывороткой /до титра 1: 3200/, моносывороткой антимелитензис /1: 160/, моносывороткой антиабортус не агглютинируется. Антигенные свойства - при иммунизации кроликов вызывает образование специфических антител. Сыворотка положительно реагирует в ИФА 1:1827889 ± 155887 . Штамм Brucella meliten SiS И-297 депонирован в коллекции живых культур лаборатории бруцеллеза НИИЭМ им. Н. Ф. Гамалеи, под. N 791.
Штамм бактерий Brucella melitensis биовара I N И-297 ГИСК N 791, используемый для получения поливалентной гипериммунной сыворотки к бруцеллам.
