ИММУНОМОДУЛИРУЮЩЕЕ СРЕДСТВО Российский патент 1994 года по МПК A61K35/78 

Изобретение относится к иммунологии, а именно к средствам растительного происхождения, воздействующим на иммунокомпетентные клетки, и может быть использовано для иммунотерапии в клинической медицине.

Известен иммуностимулятор растительного происхождения - гентиабаварозид, выделенный из корней и корневищ сверции сросшейся Swertia connata Schrenk семейство горечавковых. Гентиабаварозид относится к классу ксантоновых соединений, для которого впервые обнаружена иммуностимулирующая активность. На основании экспериментальных исследований показано, что гентиабаварозид является иммуностимулятором клеточного иммунитета: в 2 раза повышает образование специфических Т-киллеров, в 1,3 раза усиливает пролиферацию лимфоцитов. Наряду с выраженным иммуностимулирующим действием на лимфоциты, опосредующие клеточный иммунитет, не установлено биологическое действие гентиабаварозида на В-систему иммунитета. Следовательно, спектр действия данного соединения ограничен.

Известен иммуностимулятор растительного происхождения - экстракт элеутерококка. Было изучено влияние элеутерококка на лимфоциты периферической крови доноров in vitro. Выделенные в градиенте плотности Lymphaprep 1,077 лимфоциты инкубировались в течение 30, мин при температуре 37^оС с водным извлечением элеутерококка. С обработанным элеутерококком лимфоцитами производили иммунологические реакции. Определялось процентное содержание Т- и В-лимфоцитов (розеткообразующие клетки - РОК). Полученные данные показали, что в результате обработки популяции лимфоцитов периферической крови доноров экстрактом элеутерококка содержание Т-активных РОК повысилось на 15,5% , всего на 3% Т-РОК и на 8% В-РОК. Считается, что выявленная стимуляция иммунологических показателей у здоровых людей дает основание отнести элеутерококк к группе средств, обладающих выраженным иммунным действием и рекомендовать его для применения в иммунотерапии при иммунодефицитных состояниях. Однако экстракт элеутерококка существенно повышает только Т-акт. РОК. Но средство, повышающее показатель всего на 15,5% , нельзя рассматривать как эффективное. На общее количество Т-РОК и В-РОК не оказывает почти никакого влияния. Как видно из приведенных данных, элеутерококк не обладает широким спектром действия на иммунную систему, а именно на Т- и В-лимфоциты. Поставленная цель достигается воздействием на иммунокомпетентные клетки (Т- и В-лимфоциты) фракций: суммы ксантонов и суммы секоиридоидов, выделенных из травы золототысячника Herba Centaurii (ФС 42-1244-86) сем. горечавковых (Gentianaceae).

Трава золототысячника применяется при многих заболеваниях: при раке желудка, при малокровии и золотухе, при заболеваниях сердца, печени и почек, туберкулезе легких, малярии, сахарном диабете, экземе.

В официальной медицине трава золототысячника в виде настоя применяется как горечь для улучшения пищеварения, повышения аппетита, при гипацидных и хронических атрофических гастритах, при анорексии на почве нервных заболеваний, после перенесенных оперативных вмешательств.

Из травы золототысячника (Herba Centaurii) впервые выделены семь ксантоновых соединений; для четырех новых предложена химическая структура. Ксантоновые соединения имеют строение:
1,3,8-триокси-2,4,6-триметоксиксантон;
1,8-диокси-2,3,4,6-тетраметоксиксантон;
1,8-диокси-3,4,6-триметоксиксантон;
1,6-диокси-3,5-диметоксиксантон;
1,5-диокси-5-метоксиксантон;
1,2,3-триокси-5-метоксиксантон. Сумма ксантонов представляет собой порошок желтого цвета, хорошо растворимый в диметилсульфоксиде (ДМСО) и при нагревании в хлороформе. В других растворителях хуже (метанол, этанол).

Кроме того из травы золототысячника была выделена сумма секоиридоидов (сверциамарин, сверозид, генциопикрин). Сумма секоиридоидов представляет собой белый аморфный порошок, растворимый в ДМСО, метаноле, этаноле.

Указанные фракции растворяли в универсальном растворителе ДМСО и добавляли изотонический раствор хлорида натрия. Во всех фракциях количество ДМСО составляет 5% .

Лимфоциты были выделены из периферической крови 19 практически здоровых лиц в возрасте от 20 до 25 лет. Забор крови производили 2,7-ным раствором двунатриевой соли этилендиаминотетрауксусной кислоты (Na₂ ЭДТА), имеющей рН = 7,4. Антикоагулянт использовался из расчета: 1 мл на 10 мл крови. Цельную кровь разводили средой при соотношении 1: 3 (к 3 мл крови приливали 6 мл среды). Разведенную кровь осторожно наслаивали на 3 мл фикол-верографина. Оптимальная плотность этого раствора соответствовала 1,077 - 1,080 г/см³. Кровь, наслоенную на фикол-верографин, центрифугировали в горизонтальном роторе при 400g в течении 30-45 мин. После этого взвесь лимфоцитов из интерфазы переносили в чистые пробирки и отмывали 2 - 3 центрифугированиями по 10 мин при 1500 об/мин в растворе Хэнкса. После отмывки осадок ресуспендировали в 1 мл 199 и подсчитывали количество лимфоцитов обычным методом в камере Горяева.

Суспензию лимфоцитов, выделенную из периферической крови каждого донора, разливали по 2 мл (2 млн/мл) в три центрифужные пробирки. В первую добавляли 0,2 мл среды 199, во вторую - 0,2 мл (20 мкг) исследуемой фракции, растворенной в ДМСО с добавлением изотонического раствора хлорида натрия, в третью - 0,2 мл растворителя, применяемого для растворения фракций (5% -ный раствор ДМСО в 0,9% -ном растворе хлорида натрия). Пробирки помещали на 1 ч в термостат (t 37^оС). После инкубации суспензии клеток во всех трех пробирках осторожно пипетировали и проводили реакции спонтанного и комплементзависимого розеткообразования. Реакции выполнены по широко известным методикам.

Таким образом результаты исследований показали, что химические соединения, выделенные из травы золототысячника, обладают различным спектром действия на иммунокомпетентные клетки. После обработки иммунокомпетентных клеток суммой секоиридоидов количество ЕАС-РОК снижается на 31,8% , а количество Е-РОК остается без изменений. Наряду с этим сумма ксантоновых соединений не оказывает влияния на популяцию В-клеток, но повышает число Е-РОК в среднем на 26% .

Учитывая биологическое действие изученных фракций из травы золототысячника, возможно применение ее в виде настоя, содержащего ксантоны и секоиридоиды, в качестве иммуномодулятора в клинической медицине. (56) Купин В. И. с соавт. Вопросы онкологии. 1986, т. 32, N 7, с. 21-26.

Изобретение относится к иммунологии, а именно к средствам растительного происхождения, воздействующим на иммунокомпетентные клетки, и дает возможность применять настой травы золототысячника Jnfusi herbae Centaurii в качестве иммуномодулятора в клинической медицине. Цель изобретения - выявление средств растительного происхождения с широким спектром действия на иммунную систему (на Т- и В-лимфоциты). Химические соединения, выделенные из травы золототысячника, обладают различным спектром действия на иммунокомпетентные клетки, после обработки которых суммой секоиридоидов значительно снижается количество ЕАС-РОК, а после воздействия суммой ксантоновых соединений существенно возрастает количество Е-РОК. В отличие от известного вещества растительного происхождения (воздействует только на Т-лимфоциты) фракции, выделенные из травы золототысячника (сумма ксантонов и секоиридоидов) обладают более широким спектром действия на иммунокомпетентные клетки (воздействуют на Т- и В-лимфоциты). Настой травы золототысячника, содержащий ксантоны и секоиридоиды, может применяться для иммуномодуляции как Т- так и В-системы иммунитета.

Применение настоя травы золототысячника в качестве иммуномодулирующего средства.