ШТАММ ШАМПИНЬОНА ДВУСПОРОВОГО AGARICUS BISPORUS (LANQE) IMBACH - ПРОДУЦЕНТ ПЛОДОВЫХ ТЕЛ Российский патент 2004 года по МПК C12N1/14 A01G1/04 C12N1/14 C12R1/645 

Изобретение относится к сельскому хозяйству, а именно к грибоводству, и может быть использовано в биотехнологии производства плодовых тел шампиньонов.

Известны штаммы ВКМР-2472Д и Р-2471Д шампиньона двуспорового, которые при выращивании на синтетическом компосте дают урожай до 13,2 кг/м². Штаммы устойчивы к колебаниям температуры воздуха в период вегетации и плодоношения (SU а.с. 1069690, 30.01.84, SU а.с. 1069691, 30.01.84).

Недостаток штаммов - низкая урожайность.

Наиболее близким к патентуемому изобретению является штамм 14-2 (прототип) шампиньона двуспорового с урожайностью 18.7-21.8 кг/м² за один оборот культуры при выращивании на синтетическом субстрате в производственных условиях. Плодовые тела крупные, плотные. Штамм слабо поражается грибными болезнями, достаточно устойчив к повреждению личинками грибных комариков и нематодами-микофагами (доклад Макаровой Г.Я. Штаммы шампиньона двуспорового, перспективные для производства в условиях современной технологий выращивания. см. Материалы Международной конференции "Наука и практика грибоводства". - М., 1997, стр.91-92, прототип).

Недостаток штамма 14-2 - низкий уровень продуктивности и качества плодовых тел шампиньона.

Задача изобретения - повысить продуктивность культуры шампиньона, улучшить качество его плодовых тел.

Поставленная задача была достигнута за счет создания нового штамма шампиньона двуспорового Agaricus bisporus(Lange) Jmbach ВКМП: F-818.

Штамм BKTN F-818 шампиньона получен методом многоспоровой селекции мицелия тканевой культуры, выделенной из гимениального слоя плодовых тел штамма 209 (коллекции ДО “Заречье “Московской области).

Штамм выделяли на агаризованном пивном сусле (4 по Баллингу) с антибиотиками, селекцию провели на картофельно-глюкозном агаре, агаризованной среде с компостным отваром и стерильном синтетическом субстрате на основе соломы и куриного (бройлерного) помета.

Мицедиальная культура штамма хранится в криобанке Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов Государственного научно-исследовательского института генетики под номером F-818.

Полученный штамм имеет следующие морфологическую и физиологическую характеристики.

Морфолого-культуральные признаки

Грибы длинные (длина 85-90 мкм, ширина 3.0-3.5 мкм), слабоветвящиеся, тонкостенные, бесцветные, прямоугольной формы. Пряжки на мицелии отсутствуют. Структуры бесполого и вегетативного спороношения отсутствуют.

Суслo-агар (4° по Баллингу). Колония белая, округлая с ровным приподнятым краем. Мицелий тяжистый с обильным воздушным ростом. Реверзум неокрашенный. На. 9-е сутки средний диаметр колонии 43,2±1,6 мм.

Картофельно-глюкозный агар. Колония белая, правильной округлой формы. Поверхность и край ровные. Мицелий тяжисто-паутинный, несколько прижатый к субстрату в центре колонии, по краю - паутинистый, отстающий от субстрата. Воздушный рост слабый. Реверзум неокрашенный. На 15-е сутки роста средний диаметр колонии 56,5±1,2 мм.

Среда с компостным отваром. Колония белая, плотная, с пучками тяжисто-паутинистого мицелия, радиально отходящими от центра. Без обильного воздушного роста. Край колонии слегка изрезанный, приподнятый. Реверзум неокрашенный. На 18-е сутки роста, средний диаметр колонии 84,3±1,7 мм.

Синтетический субстрат (пастеризованный, стерильный). Мицелий белый, густой, тяжисто-паутинистый, прижатый к субстрату. Рост быстрый. На 10-11-е сутки роста сплошное зарастание массы субстрата чашки Петри. Средний диаметр колонии 89,3±1,2 мм.

Физиолого-биохимические свойства

Источники углерода. Использует глюкозу, маннозу, фруктозу, ксилозу, арабинозу, сахарозу, мальтозу, лактозу, крахмал.

Источники азота. Использует сульфат, хлорид и нитрат аммония, аланин, лейцин, глицин серин, треонин, аспарагиновую и глютаминовую кислоты, аспарагин.

Оптимальные условия роста: рН 6.8-7.2, температура 26°С.

Штамм F-818 выращивали в производственных условиях шампиньонного комплекса в культивационных камерах полезной площадью 188,9 м² на стационарных 5-ти ярусных стеллажах, с автоматической системой управления параметрами микроклимата, на синтетическом субстрате состава (кг.): солома - 1000, помет куриный - 850, гипс - 60.

Перед посевом пастеризованный субстрат имел следующие агрохимические показатели (в% на сухое вещество):азот общий - 2.15; азот белковый - 1.98; углерод общий - 37.54; фосфор - 1.38; калий - 1.45; кальций - 2.78; влажность - 67.9%; рН - 7.3; С:N - 17.46.

Ферментацию субстрата проводили в две фазы: первую (спонтанная ферментация) - в буртах, вторую (пастеризация и кондиционирование) - в тоннеле в контролируемых условиях. Технология процесса компостирования синтетического субстрата в буртах представлена в таблице 1.

Пастеризацию осуществляли в тоннеле размером 300×11×3.5 м, на решетчатый пол которого загружали 25-30 т компостированного субстрата равномерным слоем без уплотнения, высотой до 1.8-2 Ом.

Термическую обработку проводили при температуре 58-60°С в течение 8-10 часов с последующим медленным охлаждением от 55 до 48°С. Перед посевом температуру субстрата снижали до 25-27°С подачей свежего воздуха с помощью системы вентиляции тоннеля в автоматическом режиме.

Для инокуляции использовали посевной мицелий, выращенный на зерне ржи. Норма высева - 400 г/м². При посеве 80% посевного материала в бункере смешивали с пастеризованным субстратом, который с помощью автоматической поточной линии загружали на стеллажи культивационной камеры, 20% мицелия рассыпали по выровненной поверхности субстрата после уплотнения.

В период разрастания мицелия в субстрате температуру воздуха в культивационном помещении поддерживали на уровне 20-23°С, субстрата - 25-27°С, относительную влажность воздуха - 90-95%.

Агротехнический уход за культурой шампиньона после посева мицелия в субстрат осуществляли в соответствии с технологией, принятой в производственных условиях шампиньонного комплекса.

На 12-е сутки после инокуляции на субстрат наносили торфяной покрывной материал слоем 4-5 см состава: переходной торф (90%), доломитовая крошка (10%), влажность - 65.4%; рН - 7.4. На 7-е сутки после насыпки осуществляли рыхление поверхности покровного слоя, а на 10-е сутки - усиленную вентиляцию и циркуляцию воздуха с целью снижения температуры субстрата до 19-22°С, воздуха - до 16-18°С. В период плодоношения относительную влажность воздуха поддерживали на уровне 85-90%, влажность покровного материала - 60-65%.

Проверку урожайности штамма F-818 проводили в трех оборотах культуры шампиньона. Площадь учетной делянки - 1 м². Повторность опытов четырехкратная. Учет урожая проводили в течение 4-5 недель плодоношения по мере достижения плодовыми телами потребительской спелости. После сбора места съема плодовых тел засыпали покровным материалом и проводили полив из расчета 1 л воды на 1 кг собранных грибов.

Мицелий штамма F-818 быстро приживался в субстрате (на 2-е сутки после посева) и за 12 дней после инокуляции интенсивно разрастался на полную глубину слоя субстрата. Через 12 дней после насыпки покровного материала появились первые примордии, через 17 дней - первые плодовые тела. Первый сбор урожая провели на 31-е сутки после посева мицелия в субстрат.

Продуктивность штамма F-818 за один оборот культуры (5 недель плодоношения) составила 25.9 кг/м² и превысила урожайность штамма 14-2 (прототип) на 30.8% (таблица 2). Наиболее интенсивная отдача урожая штамма F-818 приходилась на первые две-три недели плодоношения. За этот период собрано до 70.7 -85.7% обшей урожайности.

При выращивании штамма F-818 рентабельны четырехнедельные сборы урожая, что сокращает цикл производства и дает возможность увеличить число оборотов культуры в год. Продуктивность штамма за 4 недели плодоношения - 25,2 кг/м² (97,3% общей урожайности).

Плодовые тела шт. F-818 крупные, с плотной мякотью, масса плодового тела - 39.3-48.9 г, плотность - 8.9-9.5, диаметр шляпки - 4.4-4.6 см, диаметр ножки - 2.2-2.3 см, длина ножки - 2.4-2.5 см. Шляпка полушаровидная, белая, бархатистая. Плодовые тела на короткой ножке с длительно закрытым покрывалом, что является важным показателем при хранении и транспортировке грибов и позволяет дольше сохранить товарный вид продукции. По этому показателю плодовые тела штамма F-818 выгодно отличались от плодовых тел штамма 14-2 (прототип), склонных к раскрываемости.

Плодовые тела штамма F-818 более крупные и более плотные, чем плодовые тела штамма 14-2 (контроль, таблица 3). Диаметр шляпки плодовых тел штамма F-818 был больше, чем у штамма 14-2 на 12.2%. Средняя масса одного плодового тела штамма F-818 на 27.6% выше, чем штамма 14-2. Различия в плотности обусловлены разницей в массе и диаметре шляпки плодовых тел штаммов.

Плодовые тела штамма F-818 имеют более высокое содержание белка, а 21.7% больше, чем плодовые тела штамма 14-2 (таблица 4).

Изобретение относится к грибоводству и может быть использовано в биотехнологии производства плодовых тел шампиньонов. Штамм шампиньона двуспорового Agaricus bisporus (Lange) Imbach ВКМП F-818 характеризуется высокой жизнеспособностью, быстрой приживаемостью в субстрате и обладает интенсивным ростом в производственных условиях. Штамм имеет короткий период плодоношения с интенсивной отдачей урожая в течение первых двух-трех недель плодоношения. Продуктивность штамма при промышленном выращивании на синтетическом субстрате на основе соломы и куриного помета составляет за один оборот культуры – 24,3-25,9 кг/м². Плодовые тела штамма имеют высокие потребительские качества: белые, диаметр шляпки 4,4-4,6 см, плотные, поверхность шляпки гладкая бархатистая, короткая ножка. Содержание белка в плодовом теле 43,2%, рибофлавина - 0,63 мг %. Плодовые тела длительно сохраняют товарный вид при хранении и транспортировке. Штамм дает возможность увеличить число оборотов культуры в год. 4 табл.

Штамм шампиньона двуспорового Agaricus bisporus (Lange) Imbach ВКПМ F-818 – продуцент плодовых тел.