СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО ПРОТИВОСКЛЕРОТИЧЕСКИМ ДЕЙСТВИЕМ Российский патент 1994 года по МПК A61K35/78 

Изобретение относится к медицинской и фармацевтической промышленности и может найти применение в производстве средств для лечения и профилактики атеросклероза.

Известны способы получения препарата для регулирования процессов транспорта холестерина из тканей в печень, способ получения антисклеротического средства из якорцев стелющихся.

Известны также способ получения вещества FR-900198 и его солей, обладающих гипохолестеринемической активностью, и средство для профилактики атеросклероза.

Известен способ получения лекарственного вещества, обладающего антихолестериновой активностью и применяемого при лечении атеросклероза (см. заявку N 57-42631 A 61 K 35/78. Япония).

Известен способ получения диосгенина и способ получения препарата-полиспонина.

Недостатком существующих способов получения антисклеротичвеских средств являются дефицитность сырья и низкий выход целевого продукта.

Более близким техническим аналогом является способ осаждения фентиазинов с пектином путем смешивания 10 мл 15% -ного водного раствора лекарственного вещества с 50 мл 2% -ного водного раствора пектина и перемешивания в течение 24 ч при 37^оС. Образовавшуюся при этом суспензию центрифугируют в течение 10 мин при 3000 обор. /мин при 20^оС, затем выдерживают в течение 12 ч и декантируют (см. реферативный журнал "Химия", том 19, N 5, 1983).

За прототип взят способ получения пектинового препарата из кожуры мандарина (Kausar, Nomura. 9. Fac. Agr. Kynshi Univ. , 1980, т. 25, N 2-3, р. 61-71). Способ получения заключается в экстракции кожуры мандарина уншиу при температуре 95^оС в течение 45 мин при рН 1,7 с последующим охлаждением до 20^оС и доведения рН до 2,8 путем добавления концентрированного NH₄OH. Осаждение пектина проводят CuCl₂ (20 мг Cu²⁺ на 100 мл раствора, содержащего 0,5 - 0,55% пектина).

Известно, что пектин ингибирует всасывание холестерина в кишечнике (см. справочник Биологически активные вещества пищевых продуктов. Киев, 1985, с. 6), а флавоноиды, к которым относится гесперидин, снижают уровень триглицеридов и холестерина в крови и в печени (см. Василенко Ю. К. и др. Гиполипидемическая активность флавоноидов из плодов цитрусовых. Тез. докл. Л. : 1981, с. 175).

Комплекс гесперидина с пектином, получаемого соосаждением из отходов цитрусового производства, в литературе не описан. Недостатком взятого прототипа является низкий выход пектина и получение пектина, загрязненного ионами меди, для чего требуется дополнительная очистка, а это увеличивает себестоимость продукции.

Целью данного изобретения является использование выжимок плодов мандаринов, образующихся при прессовании плодов на соки, для получения комплексного лекарственного препарата, обладающего повышенной биологической активностью и производство которого не требует использования химически чистых пектина и гесперидина, сложной технологии и громоздкой аппаратуры.

Поставленная цель достигается следующим образом. Из отжимов мандаринов, образующихся при прессовании плодов на соки, получают последовательно два экстракта: первый - путем обработки отжимов водой, подкисленной до рН 2,8 - 3,2 при температуре 80 - 90^оС в течение 45 - 55 мин. Этот экстракт извлекает пектиновые вещества из выжимок. Затем проэкстрагированные подкисленной водой выжимки обрабатывают водным раствором гидроксида кальция при рН 10 - 11 в течение 24 ч при обычной температуре. При этом получают второй экстракт, содержащий гесперидин. Оба экстракта смешивают и смесь подкисляют соляной кислотой до рН 2,2 - 2,6 и затем добавляют этиловый спирт крепостью 90^оС в количестве: на один объем экстракта 3 объема спирта и выдерживают 8 ч при обычной температуре. При этом в процессе коагуляции пектина происходит образование комплекса гесперидина с пектином. Образовавшийся сгусток комплексного соединения отделяют от жидкости, сушат под вакуумом 550 - 600 мм рт. ст. при температуре 50^оС до остаточной влажности 5% и размалывают в порошок.

Получаемый указанным способом противоатеросклеротический препарат имеет следующий химический состав (средние данные):
Вещество Содержание, % от
массы препарата Вода 0,5
Пектин водораст- воримый 64,8
Полисахариды: клетчатка, пентозаны 14,0 Гесперидин 13,0 Общая зола 3,2
П р и м е р 1. Выжимки мандаринов, получаемые при прессовании плодов на соки, влажностью 74% , промывают водой температурой 18 - 20^оС для удаления остатка сока и возможных загрязнений. Промытые проточной водой в течение 10 мин выжимки измельчают на небольшие кусочки размером в 15 - 29 мм.

200 кг подготовленных таким путем выжимок загружают в емкость с мешалкой и двутельной паровой рубашкой (реактор), заливают 1000 л воды температурой 18 - 20^оС и добавляют в смесь (при вращении мешалки), концентрированную соляную кислоту до доведения рН смеси 2,8 (около 2,6 л). Смесь нагревают путем передачи пара в двутельную рубашку до 80^оС и при этой температуре при непрерывном вращении мешалки выдерживают 55 мин. Затем массу, непосредственно в реакторе, путем подачи в двутельную рубашку воды из водопровода, охлаждают до 35^о, выгружают в корзины пресса и отжимают экстракт в количестве 850 кг.

Отпрессованная масса в количестве 190 кг снова загружается в реактор и заливается водой при соотношении 1 : 1 к массе добавляется 190 кг воды и при работе мешалки добавляется оксид кальция (около 1,9 кг ) до доведения рН смеси до 10. Эта смесь при обычной температуре (18 - 22^оС) и периодическом включении мешалки выдерживается в течение 24 ч. По истечении указанного времени смесь выгружается в корзины пресса и отжимается щелочной экстракт. Выход щелочного экстракта 180 кг.

В специальный сборник с механической мешалкой сливают 850 кг пектинового экстракта (кислого экстракта) и 180 кг щелочного экстракта , содержащего гесперидин (витамин Р) и при работе мешалки добавляют концентрированную соляную кислоту доведением рН смеси до 2,2. Затем к смеси добавляют трехкратное количество по объему 90% -ного этилового спирта 3030 л, смесь экстрактов со спиртом выдерживают в спокойном состоянии в течение 8 ч. За это время в чане всплывает желеобразная масса. Отделяющийся прозрачный спиртоводный раствор сливают через патрубок в днище сосуда в отдельную емкость, а затем желеобразную массу с частью жидкости направляют по желобу на нутч-фильтр.

После отделения спиртоводной жидкости непосредственно на нутч-фильтре, желеобразная масса промывается 90% -ным этиловым спиртом из приблизительного расчета 10 л спирта на один кг желеобразной массы. Подсушенную таким образом желеобразную массу переносят на противни и подвергают сушке под вакуумом 550 - 800 мм рт. столба при температуре 50 - 55^оС. Высушенный до остаточной влажности 5% препарат размалывают до состояния порошка и фасуют в герметическую тару.

Масса полученного комплекса гесперидина с пектином равна 6,0 кг, что составляет 3% от массы свежих отжимов или 11,5% в пересчете на сухую массу выжимок. Полученный комплекс содержит в среднем около 65% пектина и 13% гесперидина.

П р и м е р 2. 200 кг выжимок влажностью 74% , подготовленных как указано в примере 1, загружают в реактор, заливают 1000 л воды и смесь доводят концентрированной соляной кислотой до рН 3,2, нагревают до 90^оС и при этой температуре выдерживают 45 мин. Затем из смеси, аналогично как в примере 1, отделяют кислый пектиновый экстракт в количестве 880 л. Отпрессованная масса в количестве 195 кг снова вносится в реактор, заливается 195 кг воды и добавляется оксид кальция в количестве, обеспечивающем доведение рН смеси до 11,0. Затем аналогично как в первом примере отделяется щелочной экстракт гесперидина в количестве 185 л.

Кислый и щелочный экстракты смешиваются с получением 1015 л смеси, доводится концентрированной соляной кислотой до рН 2,6 и добавляется 3045 л 90% -ного этилового спирта.

Выделившаяся желеобразная масса смеси пектина и гесперидина отделяется и размалывается после высушивания до порошка, аналогично как в первом примере.

Выход препарата 6,1 кг, что составляет 3,05% от свежих отжимов или 11,8% в расчете на сухую массу выжимок.

П р и м е р 3. Выжимки мандаринов в количестве 200 кг, предварительно подготовленных как в примере 1, загружают в реактор, заливают 1000 л воды и смесь доводят концентрированной соляной кислотой до рН 3,0, нагревают до 85^оС и при этой температуре выдерживают 50 мин. Затем аналогично как в первом случае, отделяют кислый пектиновый экстракт в количестве 840 л.

Отпрессованная масса в количестве 193 кг снова вносится в реактор, заливается 193 кг воды и добавляется оксид кальция в количестве, необходимом для доведения рН смеси до 10,5. Затем, аналогично как в первом примере, отделяется щелочной экстракт гесперидина в количестве 183 кг. Кислый и щелочной экстракты смешиваются с получением общего объема смеси 1023 л, концентрированной соляной кислотой доводится рН смеси до 2,4 и добавляется 3069 л 90% -ного спирта.

Выделившаяся желеобразная масса смеси пектина с гесперидином отделяется, высушивается и размалывается до порошка, аналогично как в первом примере. Выход препарата 6,05 кг, что составляет 3,025% от массы свежих выжимок или в пересчете на сухую массу выжимок 11,6% .

Влияние рН среды на выход пектина отражено в табл. 1.

Влияние времени обработки выжимок раствором соляной кислоты на выход пектина отражено в табл. 2.

Влияние температуры на выход пектина отражено в табл. 3.

Влияние рН на извлечение гесперидина отражено в табл. 4.

Влияние рН среды на выход препарата отражено в табл. 5.

Влияние спирта на осаждение препарата отражено в табл. 6.

Влияние времени на процесс осаждения препарата: желеобразная масса всплывает через 8 ч.

Обоснование предельных значений параметров.

Получение пектинового экстракта при рН экстрагента ниже 2,8, продолжительности обработки выжимок более 55 мин и температуры нагрева свыше 90^оС ведет к разрушению структуры пектина и соответственно этому изменяются его физико-химические свойства;
при рН экстрагента выше 3,2, температуры экстракции ниже 80^оС и продолжительности менее 45 мин не проходит полного гидролиза протопектина и соответственно этому неполное извлечение пектина.

Получение экстракта гесперидина:
в пределах рН водного раствора оксида кальция 10 - 11, получается прозрачный экстракт и наиболее высокий выход геспередина.

при рН экстрагента ниже 10 резко снижается извлечение гесперидина, а при рН выше 11 происходит разрушение ткани вытяжки, получаемый при этом экстракт приобретает темно-желтый цвет, имеет значительное количество взвеси, что в дальнейшем загрязняет препарат.

Использование предлагаемого способа позволит получать антисклеротический препарат из отходов производства цитрусовых соков, не обладающих токсичностью и побочным действием. При производстве препарата из мандариновых выжимок при среднем выходе препарата 6% из тонны выжимок можно получить 60 кг препарата.

Гиполипидемический эффект и противоатеросклеротическое действие комплекса гесперидина с пектином исследовали в опытах на морских свинках с экспериментальным атеросклерозом по Н. Н. Аничкову (см. Аничков Н. Н. , Цирзерлинг В. Д. Атеросклероз. М. : 1953, с. 7 - 8) путем скармливания холестерина в дозе 200 мг/кг в морковных брикетах. Параллельно животные получали либо исследуемый комплекс гесперидина с пектином в дозе 25 мг/кг (8 животных), либо вещество сравнения-официнальный противоатеросклеротический препарат мисклерон в дозе 25 мг/кг (8 животных), либо не получали какого-либо лечения (8 животных контрольная группа). Кроме того в работе использована группа интактных животных (8 морских свинок). В сыворотке крови декапетированных животных определяли общий холестерин, триглицериды и пребета- и бета-липопротеиды (см. Колб В. Г. , Камышников В. С. Справочник по клинической химии. Минск, 1982), а в тканях аорты и печени-общий холестерин по Т. Н. Ловягиной и Э. Б. Баньковской (см. Вопросы медицинской химии, 1965, N 5, с. 17 - 22). Результаты опытов обрабатывали методом вариационной статистики.

Как видно из представленных в табл. 7 данных, экспериментальный атеросклероз у морских свинок характеризовался значительным увеличением содержания в крови холестерина, триглицеридов и пребета-и бета-липопротеидов, а в тканях аорты и печени - холестерина. Применение исследуемого комплекса оказало существенный нормализующий эффект: холестерин в крови понизился на 66,6% (р< 0,001), триглицериды в крови на 63,6% (р< 0,001), пребета- и бета-липопротеиды - на 56,4% (р< 0,001), холестерин печени - на 58,0% (р< 0,001) и холестерин аорты - на 42,3% (р< 0,05). Этот эффект находился либо на уровне влияния мисклерона, либо превосходил его особенно в отношении триглицеридов крови.

Полученные результаты позволяют считать, что исследованный комплекс гесперидина с пектином, обладающим выраженным гиполипидемическим и противоатеросклеротическим действием, является весьма перспективным для создания новых лекарственных средств. (56) Kausar, Nomura. 9. Fac. Agr. Kynshi Univ. 1980, m. 25, N 2-3, р. 61 - 71.

Использование : изобретение относится к медицинской и фармацевтической промышленности, может найти применение в производстве средств для лечения и профилактики атеросклероза. Целью изобретения является повышение специфической активности. Сущность изобретения заключается в экстрагировании отжимов мандарина, полученных при прессовании плодов на соки, последовательно водой, подкисленной соляной кислотой, при рН 2,8 - 3,2, при температуре 80 - 90С в течение 45 - 55 мин, и затем раствором гидроксида кальция при рН 10 - 11 в течение 24 ч, затем экстракты смешивают и целевой продукт осаждают этиловым спиртом. Положительный эффект заключается в значительном снижении в крови холестерина, триглицеридов и пребета- и бета-липопротеидов, а в тканях аорты и печени - холестерина. Этот эффект оказался на уровне такого высокоактивного препарата, как мисклерон. 2з. п. ф-лы, 7 табл.

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО ПРОТИВОСКЛЕРОТИЧЕСКИМ ДЕЙСТВИЕМ, путем экстрагирования отходов мандарин, подкисления экстракта соляной кислотой и осаждения целевого продукта и сушки, отличающийся тем, что, с целью повышения специфической активности, в качестве сырья используют отжимы мандарин, образующиеся при прессования плодов на соки, экстрагирование проводят последовательно водой, подкисленной соляной кислотой при рН 2,8 - 3,2, при 80 - 90^oС в течение 45 - 55 мин и затем раствором гидроксида кальция при рН 10 - 11 в течение 24 ч, экстракты смешивают и целевой продукт осаждают этиловым спиртом. 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что осаждение проводят добавлением к одному объему смеси трех объемов этилового спирта и выдерживают в течение 8 ч. 3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что сушку целевого продукта проводят под вакуумом 550 - 600 мм рт. ст. при 50 - 55^oС.