СПОСОБ ОЦЕНКИ ИММУНОКОРРЕКЦИИ У БОЛЬНЫХ B-КЛЕТОЧНЫМ ВАРИАНТОМ ХРОНИЧЕСКОГО ЛИМФОЛЕЙКОЗА Российский патент 1994 года по МПК G01N33/53 

Известен способ оценки иммунокоррекции левамизолом, у больных хроническим лимфолейкозом (ХЛЛ), включающий предварительное лабораторное определение чувствительности к препарату в тесте миграции лейкоцитов и спонтанного розеткообразования, введение препарата и определение Т-лимфоцитов у больного в тесте спонтанного розеткообразования.

Однако известный способ не позволяет точно оценить результаты иммунокоррекции из-за индивидуальной вариабельности показателей клеточного иммунитета. Предварительное лабораторное определение чувствительности к препарату в тесте миграции лейкоцитов демонстрирует положительный эффект у 32% больных ХЛЛ, а в тесте спонтанного розеткообразования у 3,5%. Опыт показывает , что только в 20-28% случаев B-клеточного варианта ХЛЛ in vitro определяется чувствительность к иммуномодуляторам в тесте спонтанного розеткообразования. Известно, что тест миграции лейкоцитов не является основным для оценки иммунного статуса, поэтому чувствительность in vitro в данном тесте не определялась.

Таким образом, прогнозирование эффекта левамизола известным способом и отбор больных по указанным показателям не позволяет с большой точностью оценить иммунокоррекцию у больных ХЛЛ, что объясняет несоответствие между количеством больных, лимфоциты которых чувствительны in vitro к препарату и количеством больным со снижением числа инфекционных осложнений, т.е. точность оценки иммунокоррекции невелика, что не позволяет значительно снизить число инфекционных осложнений и их тяжесть и повысить продолжительность жизни больных.

Целью изобретения является повышение точности оценки иммунокоррекции у больных B-клеточным вариантом ХЛЛ за счет определения индивидуальной чувствительности в процессе лечения.

Поставленная цель достигается тем, что в способе оценки иммунокоррекции у больных B-клеточным вариантом хронического лимфолейкоза, включающем введение иммунокорректора и определение Т-лимфоцитов в реакции спонтанного розеткообразования до и после иммунокоррекции с последующей оценкой эффекта лечения, отличием является то, что дополнительно у больного до и после введения иммунокорректора определяют относительное количество субпопуляций Т-лимфоцитов, "стабильных" Е-РОК и "активных" Е-РОК, B-клеток с поверхностными иммуноглобулинами, далее рассчитывают индекс иммунокоррекции для Т-клеточного звена иммунитета по формуле
ИИМ = + + где A - относительное количество Е-РОК после иммунокоррекции;
A_исх. - относительное количество Е-РОК до иммунокоррекции;
B - относительное количество "стабильных" Е-РОК после иммунокоррекции;
B_исх. - относительное количество "стабильных" Е-РОК до иммунокоррекции;
С - относительное количество "активных" Е-РОК после иммунокоррекции;
С_исх. - относительное количество "активных" Е-РОК до иммунокоррекции. При значении индекса иммунокоррекции от 10 и выше и снижении B-клеток с поверхностными иммуноглобулинами от исходного уровня до нормы оценивают иммунокоррекцию, как эффективную, а при индексе иммунокоррекции 1-9 и сохранении B-клеток выше нормы проводят повторный курс иммунокоррекции.

Способ осуществляют следующим образом. У обследуемого осуществляют забор крови из локтевой вены в стерильную пробирку с гепарином. Известным способом в камере Горяева подсчитывают количество лейкоцитов в 1 мм³ крови, делают мазок и окрашивают его по Романовскому-Гимза для подсчета лейкоцитарной формулы. Исследуемую кровь инкубируют с карбонильным железом из расчета 1 мг/мл крови, периодически встряхивая, в течение 30 мин при температуре 37^оС для устранения фагоцитирующих клеток. Выделяют лимфоидные клетки известным способом в градиенте верографин-фиколл, плотностью 1,077 г/мл. Примесь аутологичных эритроцитов удаляют инкубацией с 0,83%-ным забуференным хлористым аммонием, pH 7,2 в течение 20 мин при температуре -4^оС. Затем лимфоидные клетки дважды осторожно отмывают 0,5%-ным гидролизатом лактальбумина в растворе Хенкса и определяют концентрацию. Известным способом в реакции спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана определяют количество Е-РОК, "стабильных" Е-РОК, "активных" Е-РОК. Известным способом в реакции прямой иммунофлюоресценции определяют количество B-клеток с поверхностными иммуноглобулинами с помощью суммарной сыворотки против иммуноглобулинов человека, меченной флуоресцеинизотиоционатом (ФИТЦ).

После исследования показателей иммунитета проводят предварительный отбор больных с B-клеточным вариантом ХЛЛ, т.е. с повышением выше нормы B-клеток с поверхностными иммуноглобулинами, снижение ниже нормы Е-РОК, "стабильных" Е-РОК и "активных" Е-РОК. Отобранным больным ХЛЛ в системе комплексного лечения назначают иммунокорректоры: левамизол по известной схеме (декарис, ВНР) по 100 мг в день в течение 21 дня до 10 ч утра после завтрака или тактивин по известной схеме по 100 мкг подкожно в течение 5 дней, затем один раз в 10 дней. Курсовая доза левамизола 2100 мг, курсовая доза тактивина 800 мкг. Интервалы между курсами не менее 4-5 мес от начала предыдущего курса. Во время курсов иммунокоррекции больные не получают химиотерапии, в дальнейшем химиогормональное лечение назначают по мере необходимости. После проведения иммунокоррекции через 4-5 мес от начала предыдущего курса у больных вновь определяют количество Е-РОК, "стабильных" Е-РОК, "активных" Е-РОК, B-клеток с поверхностными иммуноглобулинами и рассчитывают индекс иммунокоррекции по приведенной формуле. Снижение B-клеток с поверхностными иммуноглобулинами от исходного уровня до нормы и значения индекса иммунокоррекции от 10 и выше определяют иммунокоррекцию, как эффективную. Сохранение B-клеток с поверхностными иммуноглобулинами выше нормы и значения индекса иммунокоррекции 1-9 в комплексе являются показанием для назначения повторных курсов иммунокоррекции. Повторные курсы назначают с интервалом не менее 4-5 мес от начала предыдущего курса, поддерживая снижение B-клеток с поверхностными иммуноглобулинами до нормы и значения индекса иммунокоррекции от 10 и выше.

П р и м е р 1. Больной Д., 70 лет, находится на диспансерном наблюдении. Диагноз: хронический лимфолейкоз, начальная стадия, иммунологически B-клеточный вариант с преобладанием клеток, несущих поверхностные иммуноглобулины. На начало наблюдения: лейкоциты 10 ˙ 10⁹/л; лимфоциты 71%; тромбоциты 150 ˙ 10⁹/л; гомоглобин 90 г/л; СОЭ 6 мм/ч. Клинические данные: периферические лимфатические узлы до 2,5 см, печень и селезенка не пальпируются. Показатели иммунитета: B-клетки с поверхностными иммуноглобулинами 60% ; Е-РОК 3% ; "стабильные" Е-РОК 5%; "активные" Е-РОК 2%. Наблюдается повышение от нормы B-клеток с поверхностными иммуноглобулинами, снижение Е-РОК, "стабильных" Е-РОК, "активных" Е-РОК, что является показанием для назначения иммунокорректора. Больному назначен левамизол по схеме 100 мг в день в течение 21 дня, на курс 2100 мг под контролем иммунологических показателей. Повторные курсы проводят в интервалом не менее 4-5 мес от начала предыдущего курса. Улучшение показаталей иммунитета в условиях опухолевой прогрессии происходит медленно. Индекс иммунокоррекции через 2 года от начала приема левамизола составляет 7,7, количество B-клеток с поверхностными иммуноглобулинами 90%. Это послужило основанием для интенсификации иммунокоррекции и увеличения количества курсов до 2-х курсов в год. Через 3 года приема левамизола ИИМ выше 10, количество B-клеток 50%, что позволило перейти на менее интенсивное назначение левамизола, снизив количество курсов до 1 в год. Достигнутый эффект позволил не назначать в течение 7 лет наблюдения химиотерапевтического лечения, не госпитализировать больного в стационар, отмечается стабилизация основного заболевания, снижение числа инфекционных осложнений, сохраняется снижение B-клеток с поверхностными иммуноглобулинами до нормы, ИИМ выше 10.

П р и м е р 2. Больной Ш., 41 года, находится на диспансерном наблюдении. Диагноз: хронический лимфолейкоз, морфологически атипичный вариант, стадия развернутых проявлений, иммунологически B-клеточный вариант с преобладанием клеток с поверхностными иммуноглобулинами. На начало наблюдения: лейкоциты 24 ˙10⁹/л; лимфоциты 71%; тромбоциты 110 ˙ 10⁹/л; гемоглобин 153 г/л; СОЭ 4 мм/ч. Лимфоидная инфильтрация костного мозга составляет 79,8%. Клинические данные: увеличение периферических лимфатических узлов до 2-2,5 см, селезенка выступает из-под левого реберного края на 5 см, печень - на 2 см. С учетом относительно молодого возраста, морфологически атипичного варианта проводили дифференциальный диагноз с лимфоцитарной лимфосаркомой в стадии лейкемизации. Течение заболевания шло по типу ХЛЛ. Клинические данные на начало наблюдения указывают на необходимость назначения специфического лечения. Показатели иммунитета: B-клетки с поверхностными иммуноглобулинами 45%; Е-РОК 40%; "стабильные" Е-РОК 12%; "активные" Е-РОК 5%. Наблюдается некоторое повышение B-клеток с поверхностными иммуноглобулинами, Е-РОК у нижней границы нормы, снижение "активных" Е-РОК , что является показанием для назначения иммунокорректора. Больному назначен тактивин по 100 мкг в день в течение 5 дней, затем один раз в 10 дней, утром до 10 ч утра, на курс 800 мкг под контролем иммунологических показаталей. Улучшение показаталей в условиях опухолевой прогрессии происходит медленно. Назначение тактивина по одному курсу в год не привело к достижению ИИМ выше 10. B-клетки с поверхностными иммуноглобулинами 52%, ИИМ 7,4. Интенсификация иммунокоррекции до двух курсов в год привела к снижению B-клеток с поверхностными иммуноглобулинами до 30%, ИИМ выше 10. Достигнутый эффект позволил в течение 4 лет не назначать специфического лечения, заболевание протекало по спокойному варианту с тенденцией к медленному прогрессированию, отмечается снижение числа инфекционных осложнений. Продолжительность жизни от установления стадии развернутых проявлений 7 лет.

Обследовано 76 больных ХЛЛ: 28 больных получали левамизол в системе комплексного лечения, 10 больных получали тактивин в системе комплексного лечения и 38 больных представляют контрольную группу, получавшую комплексное лечение без левамизола или тактивина по аналогичным программам. Группа больных, получавших левамизол или тактивин в системе комплексного лечения, состояла из 27 мужчин и 11 женщин. Возраст мужчин на начало назначение иммунокорректора колебался от 42 до 84 лет, женщин от 47 до 76 лет (средний возраст мужчин составлял 56 лет, женщин 56,4 года). 14 больных ХЛЛ на начало назначения левамизола получали химиотерапию, которая была прекращена за 2-6 месяцев до назначения курсов иммунокоррекции, остальные больные до назначения иммунокорректоров не получали химиотерапевтического лечения. Больные получали левамизол курсами по 2100 мг или тактивин курсами по 800 мкг по указанным схемам, интервалы между курсами составляли не менее 4-5 месяцев. Во время назначения левамизола или тактивина больные не получали химиотерапевтического лечения, после окончания курса иммунокоррекции химиотерапия назначалась по мере необходимости. Иммунологически у больных отмечалось увеличение B-клеток с поверхностными иммуноглобулинами, снижение Е-РОК, "стабильных" Е-РОК и "активных" Е-РОК на начало назначения иммунокорректоров. Частоту курсов иммунокоррекции контролировали в зависимости от ИИМ и количества B-клеток с поверхностными иммуноглобулинами. Контрольная группа из 38 больных ХЛЛ, сходная по возрасту, полу, клиникогематологическим проявлениям основного заболевания получала комплексное лечение по известным аналогичным схемам (хлорбутин, программа ЦОП). 14 больных контрольной группы на начало наблюдения получали химиотерапию. На начало наблюдения в группе больных, получавших иммунокорректоры, и аналогично в контрольной группе 12 больных находились в начальной стадии, 9 больных - в переходной стадии и 17 больных - в стадии развернутых проявлений. Срок наблюдения за больными - 7 лет от установления соответствующей стадии заболевания.

Таким образом описываемый способ повышает точность оценки иммунокоррекции у больных B-клеточным вариантом хронического лимфолейкоза за счет определения индивидуальной чувствительности в процессе лечения, что позволяет повысить эффективность лечения.

Способ относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использован при проведении иммунокоррекции у больных B-клеточным вариантом хронического лимфолейкоза. Целью изобретения является повышение точности оценки иммунокоррекции у больных B-клеточным вариантом ХЛЛ за счет определения индивидуальной чувствительности в процессе лечения. Способ заключается в том, что дополнительно у больного до и после введения иммунокорректора определяют относительное количество субпопуляций Т-лимфоцитов, "стабильных" Е-РОК и "активных" Е-РОК, B-клеток с поверхностными иммуноглобулинами, далее рассчитывают индекс иммунокоррекции для Т-клеточного звена иммунитета по формуле ИИМ=А/А_исх+B/B_исх+C/C_исх , где A - относительное количество Е-РОК после иммунокоррекции; A_исх - относительное количество Е-РОК до иммунокоррекции; B - относительное количество "стабильных" Е-РОК после иммунокоррекции; B_исх - относительное количество "стабильных" Е-РОК до иммунокоррекции; C - относительное количество "активных" Е-РОК после иммунокоррекции; C_исх - относительное количество "активных" Е-РОК до иммунокоррекции, при этом при значении индекса иммунокоррекции от 10 и выше и снижении B-клеток с поверхностными иммуноглобулинами от исходного уровня до нормы оценивают иммунокоррекцию как эффективную, а при индексе иммунокоррекции 1 - 9 и сохранении B-клеток выше нормы проводят повторный курс иммунокоррекции.

СПОСОБ ОЦЕНКИ ИММУНОКОРРЕКЦИИ У БОЛЬНЫХ B-КЛЕТОЧНЫМ ВАРИАНТОМ ХРОНИЧЕСКОГО ЛИМФОЛЕЙКОЗА, включающий введение иммунокорректора и определение Е-РОК в реакции спонтанного розеткообразования до и после иммунокоррекции с последующей оценкой эффекта лечения, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, дополнительно до и после введения иммунокорректора определяют количество "стабильных" Е-РОК и "активных" Е-РОК, B-клеток с поверхностными иммуноглобулинами, далее рассчитывают индекс иммунокоррекции для T-клеточного звена иммунитета по формуле
ИИМ = + + ,
где A - относительное количество Е-РОК после иммунокоррекции;
A_исх. - относительное количество Е-РОК до иммунокоррекции;
B - относительное количество "стабильных" Е-РОК после иммунокоррекции;
B_исх. - относительное количество "стабильных" Е-РОК до иммунокоррекции;
C - относительное количество "активных" Е-РОК после иммунокоррекции;
C_исх. - относительное количество "активных" Е-РОК до иммунокоррекции,
при этом при значении индекса иммунокоррекции от 10 и выше и снижении B-клеток с поверхностными иммуноглобулинами от исходного уровня до нормы оценивают иммунокоррекцию, как эффективную, а при индексе иммунокоррекции 1 - 9 и сохранении B-клеток выше нормы недостаточно эффективную.