СПОСОБ ИММУНОКОРРЕГИРУЮЩЕЙ ТЕРАПИИ ДОКЛИНИЧЕСКИХ И КЛИНИЧЕСКИ ВЫРАЖЕННЫХ ФОРМ ИММУНОЛОГИЧЕСКОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ И ЭКСПРЕСС ОТБОРА СРЕДСТВ ДЛЯ ИММУНОКОРРЕКЦИИ ПО ГЕВОНДЯН Российский патент 2002 года по МПК G01N33/53 G01N33/558 

Изобретение относится к области иммунологии, в частности клинической иммунологии, и посвящено разработке способа иммунокоррегирующей терапии доклинических и клинически выраженных форм иммунологической недостаточности и экспресс- отбора средств для иммунокоррекции.

Известны способы иммунокоррегирующей терапии, направленные на коррекцию дисфункций субпопуляции Т- и/или В-лимфоцитов, и/или макрофагов путем селективного влияния на процессы активации, и/или пролиферации, и/или дифференциации их в эффекторные клетки [1].

Этот подход и способ взят за прототип.

Недостатком прототипа является то, что эффективность иммунокоррегирующей терапии оценивается исключительно на основании нормализации процессов активации, и/или пролиферации, и/или дифференциации аффинных клонов В- и Т-лимфоцитов в эффекторные клетки. Однако, как показывают исследования, достижение нормализации субпопуляционного состава лимфоцитов в крови не всегда приводит к снятию явлений иммунологической недостаточности и полноценному иммунокоррегирующему эффекту. Между восстановлением субпопуляционного состава крови и клиническим выздоровлением часто отмечается выраженное несоответствие. Более того, у пациентов, находящихся в доклинической стадии патологии, а также у некоторых больных с ВИД ассоциированными заболеваниями не обнаруживаются расстройства пролиферации и дифференциации В- и Т-субпопуляций лимфоцитов в эффекторные клетки иммунной системы [1, 2].

Ранее нами было показано, что эффективность иммунного ответа лимитируется не расстройствами процессов активации, пролиферации и дифференциации аффинных к антигену клонов В-лимфоцитов в плазматические клетки, как принято считать, а, в первую очередь, расстройствами процесса созревания антител в плазматических клетках (ПК), дисфункция которых наблюдается на самых ранних этапах патологии. Нарушение процесса созревания антител в ПК приводит к секреции антител с низким авидитетом, неспособных оказывать протективный эффект, с последующей дисфункцией других звеньев иммунитета [3, 4].

Целью настоящего изобретения явилась разработка способа иммунокоррегирующей терапии доклинических и клинически выраженных форм иммунологической недостаточности и экспресс-отбора медикаментозных и немедикаментозных средств, повышающих уровень высокоавидных антител в крови, и/или лимфе, и/или секретах.

Поставленную цель удалось реализовать за счет повышения в крови, и/или лимфе, и/или секретах содержания высокоавидных нормальных и/или специфических к антигену антител G класса путем селективного воздействия на процесс созревания антител в плазматических клетках и/или на структуру низкоавидных антител и трансформации их в высокоавидные, при этом об эффективности иммунокоррегирующей терапии и/или средства для иммунокоррекции судят на основании изменения в крови, и/или лимфе, и/или секретах содержания высокоавидных, и/или низкоавидных антител и/или изменения структурных, и/или функциональных, и/или протективных свойств антител, и/или доступных SH-групп в IgG и/или индекса модулирующего воздействия, который определяют на основании соотношения результатов, полученных до и после иммунокоррегирующего воздействия для каждого показателя, соответственно, при этом выбор средства и способа воздействия ведется с учетом степени выраженности иммунологической недостаточности и/или формы иммунологической недостаточности (ЛИН-1, ЛИН-2, ИН-1, ИН-2), и/или клинических проявлений иммунопатологических синдромов (инфекционный, аллергический, аутоаллергический, лимфопролиферативный), и/или природы этиотропного агента.

Увеличение содержания высокоавидных антител до 75-100% при одновременном снижении низкоавидных антител до 25-0% и/или повышение структурных, и/или функциональных, и/или протективных свойств антител и/или увеличение индекса модулирующего воздействия до 0,75-1,0 свидетельствует о нормализации процесса созревания антител в плазматических клетках и/или снижении степени выраженности иммунологической недостаточности, и/или перехода иммунологической недостаточности из формы с большей - в форму с меньшей степенью выраженности (ИН-2 в ИН-1, или ЛИН-2, или ЛИН-1), или норму и/или о высокой эффективности иммунокоррегирующей терапии, и/или высокой эффективности средства для иммунокоррекции, а уменьшение содержания высокоавидных антител до 25-5% при одновременном увеличении низкоавидных антител до 75-95% и/или снижение структурных, и/или функциональных, и/или протективных свойств антител и/или уменьшение индекса модулирующего воздействия до 0,25-0,06 свидетельствует о дисфункции процесса созревания антител в плазматических клетках и/или повышении степени выраженности иммунологической недостаточности и/или перехода иммунологической недостаточности из формы с меньшей - в форму с большей степенью выраженности (ЛИН-1 в ЛИН-2, или ИН-1, или ИН-2), и/или о низкой эффективности иммунокоррегирующей терапии, и/или низкой эффективности средства для иммунокоррекции, остальное - промежуточное состояние.

Предпосылкой к реализации поставленных целей настоящего изобретения явились полученные нами научные данные о существовании ранее неизвестной формы иммунологической недостаточности В-системы иммунитета, характеризующейся преимущественной секрецией антител G класса с низким авидитетом и низкой протективной активностью. Патогенетически эта форма иммунологической недостаточности связана с дисфункцией процесса созревания антител в плазматических клетках и, в частности, механизмов, ответственных за превращение низкоавидных антител в высокоавидные [3, 4].

Супрессия процессов созревания антител в плазматических клетках, происходящая на самых ранних этапах агрессии патогенов, является причиной секреции антител с низким авидитетом и низкой протективной активностью, неспособные выполнять эффекторные функции, т.е. активировать классический путь системы комплемента и клеточно-опосредованные механизмы естественной защиты. В связи с этим, антигены и патогены не уничтожаются и не элиминируются из организма, а их персистенция ведет к:
а) вовлечению в иммунный ответ дополнительных клонов Т- и В-лимфоцитов,
б) снижению эффективности отбора аффинных клонов В-лимфоцитов,
в) снижению аффинитета секретируемых антител,
г) подавлению активности антителпрезентирующих клеток (макрофагов),
д) ухудшению распознавания "своих" и "чужих" антигенов Т-лимфоцитами,
е) нарастанию числа фенотипически и генотипически измененных клеток,
ж) созданию благоприятных условий для экспансии патогенов и условно патогенной микрофлоры в организме.

Таким образом, именно дисфункция процесса созревания антител существенно снижает эффективность иммунного ответа и предопределяет развитие дисфункций других звеньев иммунной системы (Т-клеточного, макрофагального) и прогрессию вторичных иммунодефицитных состояний, при этом секреция низкоавидных антител G класса является триггерным механизмом в развитии иммунологической недостаточности.

Необходимость применения целенаправленной иммунокоррекции процесса созревания антител в ПК, определяется тем, что за счет секреции специфических к патогенам высокоавидных антител в иммунный ответ вовлекаются разнообразные молекулярные и, особенно, клеточно-опосредованные механизмы естественной защиты, которые сами по себе неспособны вести к селективному уничтожению и элиминации патогенов из организма. Высокоавидные антитела активно формируют репертуар защитных механизмов организма, направленных непосредственно против патогена, при этом чем шире круг вовлеченных в иммунный ответ механизмов защиты (молекулярных и клеточных), тем эффективнее протективный эффект иммунного ответа и наоборот.

Необходимость такого альтернативного подхода иммунокоррекции приобретает особую актуальность в современной медицине. Так, при лечении инфекционных больных с применением химиопрепаратов и антибиотиков часто не происходит ликвидация возбудителей, идет формирование хронических форм и бактерионосительства, имеется угроза развития рецидивов. Лечение таких больных крайне сложно, малоэффективно, требует значительных затрат. Реальная ликвидация патогенов, предупреждение развития рецидивов, предотвращение развития хронических вялотекущих форм инфекционных заболеваний возможны только благодаря использования иммунокоррегирующей терапии, направленной на повышение авидитета секретируемых антител и их протективных свойств.

Диагностика латентнотекущих форм иммунологической недостаточности (ЛИН-1, ЛИН-2), патогенетически связанных с дисфункцией процесса созревания антител в плазматических клетках [3, 4], открывает беспрецедентные возможности для активной профилактики многих заболеваний на самых ранних фазах развития патологии с минимальными затратами на лечение, в сжатые сроки и высокой эффективности терапии.

Особая актуальность применения альтернативного пути иммунокоррекции, ведущей к повышению секреции высокоавидных антител, возникает при проведении массовых профилактических вакцинаций у детей. Это связано с тем, что у 40-70% детей отмечаются латентнотекущие формы ИН, на фоне которых эффективность вакцинации значительно снижается, при этом часто развиваются различные поствакцинальные реакции. В этой ситуации селективное применение альтернативных путей иммунокоррекции является необходимым для повышения эффективности профилактических мероприятий и снижения риска развития поствакцинальных осложнений.

Показаниями для проведения иммунокоррегирующей терапии, направленной на нормализацию процесса созревания антител в плазматических клетках и/или на трансформацию низкоавидных антител в высокоавидные в крови, и/или лимфе, и/или секретах служат:
а) наличие и степень выраженности ИН у пациента(ов);
б) клинические проявления иммунодефицитных синдромов (инфекционного, аллергического, аутоаллергического, лимфопролиферативного);
в) выявление так называемых, индикаторных СПИД-ассоциированных инфекционных агентов;
г) снижение риска развития патологии при контакте с экстремальными воздействиями на организм.

Поиск и отбор принципиально новой группы иммунокоррегирующих препаратов, (прямо или опосредованно) влияющих на процесс созревания антител в плазматических клетках, так и факторов, трансформирующих низкоавидные антитела в высокоавидные в крови, и/или лимфе, и/или секретах, основан на контроле структурных, и/или функциональных, и/или протективных свойствах антител G класса и/или содержания доступных SH-групп в IgG.

Основой для поиска препаратов, оказывающих иммунокоррегирующий эффект на процесс созревания антител в ПК, послужили экспериментальные данные, в которых был обнаружен феномен метаболической супрессии процесса созревания антител в плазматических клетках. Было показано, что в условиях эндогенной гипоксии или токсемии, как правило, развивается дисфункция созревания антител в ПК и секреция низкоавидных антител, тогда как снятие гипоксии и токсемии вело к нормализации процесса созревания антител в ПК и секреции антител с высоким авидитетом.

Стало очевидным, что иммунокорректоры процесса созревания антител в ПК должны быть способны:
а) нормализовывать процесс созревания антител в ПК;
б) повышать активность эндогенных антиоксидантных систем;
в) снижать гипоксию и эндогенную токсемию за счет продуктов ПОЛ;
г) повышать активность механизмов неспецифической защиты;
д) усиливать адаптационно-трофические процессы в организме;
Использование такой группы препаратов в качестве альтернативного пути иммунокоррекции перспективно и позволяет значительно повысить эффективность иммунокоррекции и профилактики ВИД состояний и ассоцированных с ними заболеваний.

Благодаря наличию объективного оперативного контроля за степенью выраженности иммунологической недостаточности и напряженностью системы иммунитета открывается возможность для совершенствования научно-обоснованной стратегии и тактики лечебного процесса.

В процессе экспериментальных и особенно клинических исследований для ряда фармакопейных препаратов, используемых в качестве иммунокорректоров, например таких как: левамизол (Декарис), амиксин, камезол, моноэтаноламин, комбинации витаминов (А, Е, С) и микроэлементов с выраженным антиоксидантным эффектом (селен, цинк), была выявлена ранее неизвестная их способность позитивно влиять на процесс созревания антител в ПК с увеличением секреции антител с высоким авидитетом. Так оказалось, что амиксин способен повышать не только противовирусный иммунитет (за счет интерфероногенеза), но и секрецию высокоавидных вируснейтрализующих антител, что обеспечивает более высокую эффекктивность препарата при терапии хронически рецидивирующих вирусных инфекций.

В результате эмпирического поиска была выявлена группа иммуноактивных пептидов тимуса из костного мозга, положительно влияющих на процесс созревания антител в ПК. В эту группу препаратов вошли Имунофан, Миелопид, Деларгин.

Особый интерес представляют препараты из стенок бактерий, содержащие липополисахариды и пептидгликаны из грам+ и грам- бактерий, которые являются мощными неспецифичкскими активаторами всех звеньев иммунитета. Поисковые исследования этой группы препаратов позволили выделить среди них наиболее эффективные, активно влияющие на процесс созревания антител в ПК. В эту группу препаратов вошли Кодивак, вакцины из коринебактерий группы Крестовниковой-Троицкой, Рузам, Натрий нуклеинат. В результате эмпирического поиска была показана возможность трансформации низкоавидных антител G класса в высокоавидные с помощью физических, и/или биологических, и/или химических факторов, при этом показателями трансформации служат структурные, и/или функциональные, и/или протективные характеристики антител и/или SH-групп в IgG. Так, если до трансформации низкоавидные антитела, взаимодействуя с антигеном, образовывали мелкие, растворимые, непрочные иммунные комплексы, которые имели низкую аффинность к Clq компоненту комплемента, а также к Fc- и CR-клеточным рецепторам иммунокомпетентных клеток (ИКК) и были неспособны активировать классический путь системы комплемента и клеточно-опосредованные механизмы неспецифической защиты, имели низкую опсоническую, антитоксическую, вируснейтрализующую, цитотоксическую активности, имели ограниченную динамичность макромолекулы и глубоко маскированные SH-группы, то в результате трансформации они приобретали способность образовывать средние и крупные прочные, труднорастворимые иммунные комплексы, при этом повышалась их аффинность к Clq компоненту комплемента, к Fc- и CR-клеточным рецепторам ИКК, они становились способными активировать классический путь системы комплемента, клеточно-опосредованные механизмы защиты, кроме того, существенно повышалась их опсоническая, антитоксическая, вируснейтрализующая, цитотоксическая активности, а макроструктура приобретала высокую динамичность, при этом доступность SH-групп в IgG существенно возрастала.

Таким образом, с помощью обнаруженного эффекта трансформации низкоавидных антител в высокоавидные открывается принципиально новый подход для иммунокоррегирующей терапии и отбора средств для иммунокоррекции.

Ниже приводятся конкретные примеры влияния некоторых медикаментозных и немедикаментозных средств на нормализацию процесса созревания антител в плазматических клетках и/или трансформацию низкоавидных антител в высокоавидные на доклинической и клинически выраженных стадиях патологии.

Пример 1. Влияние Левамизола на содержание высокоавидных антител в крови.

Левамизол (декарис) известен как типичный иммунокорректор, используемый при расстройствах Т-клеточного и макрофагального звена иммунитета. Этот препарат нашел применение при лечении хронически рецидивирующих заболеваний, а также в онкологии. В настоящее время получены данные о том, что спектр механизмов защиты организма, индуцируемых Левамизолом, не ограничивается Т-системой иммунитета. В связи с этим нами были проведены экспериментальные исследования с выяснением влияния левамизола на коррекцию дисфункции процесса созревания антител в плазматических клетках и увеличение содержания высокоавидных антител у иммунодефитцитных животных.

Экспериментальные исследования велись на двух группах кроликов 6-ти мес. возраста с выраженным вторичным иммунодефицитом, индуцированным В-лимфотропным ретровирусом лейкоза, одна из которых (10 гол.) получала левамизол, другая - (4 гол.) оставалась интактной. В качестве контроля служила группа здоровых кроликов (4 гол.), которая получала левамизол в аналогичной дозе.

Левамизол вводили перорально по следующей схеме: 2,5 мг на 1 кг массы 1 раз в сутки в течение 3-х дней.

Модулирующий эффект левамизола на состояние В-системы иммунитета детектировали путем сравнительного анализа титров нормальных антител, соотношения высокоавидных и низкоавидных антител, определения содержания IgG, количества доступных SH-групп в IgG (моль/моль белка). Все показатели исследовались до и после введения препарата на 3-и, 11-е, 20-е и 30-е сутки и сопоставлялись с результатами контрольной группы. Данные представлены в табл.1.

Анализ результатов свидетельствует об изменении показателей гуморального иммунитета в сыворотке крови инфицированных животных, получавших левамизол, происходили уже на третьи сутки, достигали максимума к одиннадцатым суткам и нивелировали к тридцатым. Так на 3-и сутки титры антител повысились в 4 раза, а на 11-е в 8 раз, в сравнении с исходным уровнем (3 лог₂), причем, прирост титров антител происходил за счет увеличения содержания высокоавидных антител, которое возрастало с 25% на 3-и и 11-е сутки до 80 и 100 процентов, соответственно. При этом также происходило изменение содержания доступных SH-групп в препаратах IgG с 0,25 до 1,0, которое коррелировало с нарастанием титров высокоавидных антител.

В то же самое время в группе инфицированных кроликов, не получавших левамизол, не происходили изменения исследуемых показателей (титры антител, процент высокоавидных антител, количество IgG и SH-групп).

Введение левамизола здоровым кроликам не привело к каким-либо изменениям исследуемых показателей в сравнении с исходными данными.

Таким образом, впервые обнаружена способность левамизола индуцировать секрецию антител с высоким авидитетом и высокой протективной активностью, что позволяет заключить, что иммунокоррегирующий эффект препарата связан, в первую очередь, с коррекцией процесса созревания антител в плазматических клетках и увеличением уровня высокоавидных антител, с последующей активацией каскада молекулярных и клеточно-опосредованных механизмов защиты [3, 4].

Пример 2. Влияние Амиксина на уровень высокоавидных антител в крови.

Амиксин - известен как низкомолекулярный синтетический индуктор ИФН ароматического ряда, относящийся к классу флуоренонов. Иммунокоррегирующий эффект препарата определяется индукцией образования ИФН альфа и бета, которые обладают иммуномодулирующим действием, т.е. усиливают антителообразование, уменьшают степень иммунодепрессии. Амиксин эффективен при лечении острых и хронических вирусных инфекций (гриппа, гепатитов, энтеровирусных инфекций). Максимальная концентрация ИФН в крови отмечается через 12-18 часов (60-120 ME/мл) и полностью исчезает из кроветока через 48 часов.

Несмотря на то, что спектр действия амиксина многогранен, тем не менее нет данных о его влиянии на авидитет вируснейтрализующих антител.

Исследования проводили на группе больных (10 пациентов) с выраженными явлениями вторичного иммунодефицита, ассоциированного с хронической герпес вирусной инфекцией и респираторным хламидиозом.

Амиксин назначали перорально по 0,125 г 2 раза в неделю в течение 14 дней. У исследуемых больных определяли в динамике на 1-е, 2-е, 3-и, 7-е, 14-е, 21-е и 30-е сутки от начала приема препарата соотношение высокоавидных и низкоавидных антител, титры антитоксических нормальных антител, а также количество иммуноглобулинов G, М, - классов, циркулирующие иммунные комплексы. В табл.2 представлены среднестатистические данные исследования.

Из табл. видно, что из всех показателей гуморального иммунитета наиболее чувствительным и информативным является авидитет антител, который изменялся уже в первые сутки от начала приема препарата. На 14-е сутки процент высокоавидных антител у большинства больных достиг нормы.

Кроме того, у большинства больных (7 из 10) на третьи сутки после приема амиксина отмечались увеличение уровня IgM с 188.4 +/- 13,1 мг% до 257,5 +/- 18,6 и тенденция к увеличению IgG (1326,7 +/- 86,2 мг% и 1523 +/- 91 мг%, соответственно), которые имели тенденцию к нарастанию к 14 суткам. Достоверных изменений ЦИК в указанные сроки обнаружить не удалось.

Таким образом, помимо ИФН индуцирующего действия прием амиксина оказывал отчетливое положительное влияние на авидитет антител и некоторые показатели гуморального иммунитета.

Таким образом, положительный эффект амиксина на гуморальный иммунитет усиливается за счет повышения с первых же часов процента секретируемых высокоавидных антител к вирусам, что ведет к клинической ремиссии.

Используя разработанный экспресс способ определения состояния иммунитета [3, 4], создается возможность для оперативного контроля эффективности лечения и поиска средства для иммунокоррекции в зависимости от степени выраженности иммунологической недостаточности.

Пример 3. Влияние Имунофана на содержание высокоавидных антител у больных с ВИД ассоциированными заболеваниями.

Имунофан - регуляторный синтетический гексапептид - аналог естественных гормонов тимуса, превосходящий в 1000 раз иммунофармакологический эффект гормона тимуса - Т-активина. Механизм действия имунофана связан с его способностью влиять на пролиферативную активность иммунокомпетентных клеток и баланс субпопуляций Т- и В-лимфоцитов, на уровень интерлейкинов - ИЛ-2, ФНО и др., а также на активацию эндогенных антиоксидантных систем организма.

Несмотря на многогранность исследований имунофана, тем не менее не известно влияние этого регуляторного пептида на процесс созревания антител в плазматических клетках и авидитет секретируемых антител.

Ниже приводятся результаты исследования группы больных (20 пациентов) с атопическим дерматитом, получавших лечение исключительно имунофаном.

Схема монотерапии имунофаном: больным вводили имунофан ежедневно по 1 мл в/м в течение 5-и дней, далее по два раза в неделю, всего 10 доз. Усредненные результаты представлены в табл.3.

Результаты исследования свидетельствуют о том, что у больных с клиническими проявлениями атопии с поражением кожи отмечалось повышение числа эозинофилов до 8%, выраженная суперактивация В-системы иммунитета, характеризующаяся увеличением числа В-лимфоцитов в периферической крови до 40% (норма 10), абсолютного уровня антител к антигенам 1, 2 и 3 (до 8 лог₂ при норме 5-6 лог₂), снижение процента высокоавидных антител до 25% и нарастание низкоавидных антител до 75%. Со стороны клеточного звена иммунитета отмечалось увеличение CD8+ лимфоцитов. Интерфероновый статус был в пределах нормы, а у некоторых больных - подавлен.

На основании полученных данных иммунограммы можно слелать вывод о том, что у больных с атопическим синдромом:
а) имело место усиление пролиферативной активности В-лимфоцитов;
б) отмечались выраженные расстройства процесса созревания антител в плазматических клетках;
в) развитие атопического синдрома протекало на фоне преимущественной секреции антител с низким авидитетом.

Применение курса имунофана привело к снижению числа эозинофилов до 4%, к увеличению лимфоцитов (43%), CD4 до 42%, снижению CD8 до 26%, снижению числа В-лимфоцитов, нормализации процесса созревания антител.

Приведенные данные свидетельствуют о стойком иммунокоррегирующем эффекте имунофана, сопровождающимся увеличением биосинтеза высокоавидных антител, ведущих к снятию клиники атонического синдрома.

Пример 4. Влияние Кодивака на содержание высокоавидных антител у больного с ОРВИ.

Кодивак - препарат относится к группе иммуномодуляторов бактериального просхождения, содержит пептидгликаны мембран коринебактерий. Применяется как неспецифический иммунокорректор, влияющий на все звенья иммунной системы и макрофагальную систему. Кодивак применяют при хронических рецидивирующих инфекциях, бациллоносительстве токсигенных дифтерийных бактерий, а также для повышения эффективности противодифтерийной вакцины.

В связи с высокой иммунокоррегирующей активностью кодивака особый интерес представляло выяснение механизмов его влияния на процесс созревания антител в плазматических клетках и повышение уровня антител с высоким авидитетом у пациента с ОРВИ.

Больной ВСГ, 56 лет. Диагноз: ОРВИ средней тяжести, сопровождающееся ознобом, повышением температуры тела до 38,5^oС, ринореей, психовегетативными расстройствами. На фоне симптоматического лечения в разгар заболевания на 2-е сутки была сделана в/м инъекция Кодивака в количестве 1 мл.

Ниже представлены результаты иммунологического обследования больного до и после введения препарата на 4-е, 10-е, 20-е и 40-е сутки (табл.4).

Исследования показали, что в острой фазе течения ОРВИ у больного отмечались:
1) преимущественный биосинтез (до 88%) антител с низким авидитетом,
2) явления выраженного функционального антагонизма между высоко и низко аффинными антителами.

3) снижение аффинитета антител,
4) угнетение антителогенеза и пролиферации и дифференциации аффинных к антигену клонов В-лимфоцитов в плазматические клетки.

После введения препарата Кодивак положительный эффект наблюдался уже к четвертым суткам, который выражался в:
а) нормализации уровня антителогенеза (увеличение с 4 лог₂ до 5 лог₂),
б) повышении процента высокоавидных антител с 12% до 50%,
в) исчезновении явления функционального антагонизма,
г) снижении уровня циркулирующих иммунных комплексов с 180 до 60,
д) увеличении уровня IgG с 868 мг% до 1200 мг%,
е) снижении степени выраженности иммунологической недостаточности с ИН-2 до ИН-1 и ЛИН-2,
ж) уменьшении клинических проявлений.

На 5-6-е сутки отмечалось клиническое выздоровление, а на 10-е сутки - нормализация иммунного статуса, которое носило стойкий и продолжительный характер.

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о том, что Кодивак обладает способностью влиять на нормализацию процесса созревания антител в плазматических клетках, процессов пролиферации и дифференциации аффинных к антигенам клонов В-лимфоцитов, на повышение авидитета антител и их титров, резко увеличивая, тем самым, в организме эффективность восстановительных процессов.

Препарат Кодивак удалось эффективно проанализировать, используя диагностическую тест-систему в сочетании с тест-набором [3, 4] и предложить этот препарат в качестве эффективного иммунокоррегирующего средства, ведущего к повышению содержания высокоавидных антител.

Пример 5. Влияние немедикаментозных средств на содержание высокоавидных антител у иммунодефицитных больных.

Известны методы иммуномодулирующей терапии с помощью специальных приборов и процедур. Среди них широкое распространение получила процедура плазмафереза, основанная на технической возможности удаления части сыворотки крови больного с возвращением всей клеточной массы в циркуляцию. Было установлено, что в результате плазмафереза нередко у пациентов с иммунодефицитами отмечается нормализация показателей, в частности, повышение фагоцитарной активности нейтрофилов, моноцитов, макрофагов, снижается концентрация ЦИК, снижается гипоксия и эндогенная токсемия, отмечается тенденция к нормализации субпопуляционного состава лимфоцитов. В связи с этим представлялось необходимым выяснить, как процедура плазмафереза отражается на гуморальном иммунитете и содержании в крови высокоавидных и низкоавидных антител.

Исследования были проведены на группе больных (10 человек), страдающих хроническими инфекциями респираторного тракта бактериально-вирусной этиологии. Исследования сывороток проводили до и на 3-и, 7-ые, 14-ые и 30-ые сутки от первой процедуры плазмафереза с определением уровня иммуноглобулинов А, М, G, Е, высокоавидных и низкоавидных нормальных антител, циркулирующих иммунных комплексов, фагоцитарной активности нейтрофилов и моноцитов, активности комплемента (табл.5).

Из приведенных данных видно, что в результате плазмафереза (ПФ) на 7 сутки отмечается увеличение процента высокоавидных антител с 29,2 до 82%, а на 14 сутки до 92%. Содержание IgM нарастало только к 14 суткам после ПФ. Показатели уровня IgG, фагоцитарной активности нейтрофилов и моноцитов в результате плазмафереза практически не изменялись в сравнении с исходными.

Из данных видно, что процедура ПФ ведет к выраженному увеличению содержания высокоавидных антител у больных с клиническими проявлениями иммунодефицита, при этом между содержанием высокоавидных антител и клиническим улучшением отмечается выраженная корреляционная связь. Оказалось, что из всех показателей, характеризующих состояние гуморального иммунитета, только авидитет антител подвергался существенным изменениям при ПФ. На фоне увеличения высокоавидных антител в крови в результате ПФ отмечалась выраженная иммунологическая и клиническая ремиссия у большинства пациентов. Это свидетельствует о том, что эксклюзия значительной части плазмы индуцирует в организме секрецию антител с высоким авидитетом с повышением эффективности функционирования иммунной системы, а также о возможности четкого контроля эффективности средства для иммунокоррекции.

Пример 6. Влияние физических, химических и биологических факторов на трансформацию низкоавидных антител в высокоавидные.

В результате эмпирического поиска средств для иммунокоррегирующей терапии, повышающих содержание высокоавидных антител в крови, и/или лимфе, и/или секретах, нами была выявлена группа факторов (физических и/или химических и/или биологических), способных индуцировать в низкоавидных антителах G класса структурные изменения, ведущие к трансформации низкоавидных антител в высокоавидные с изменением структурных, функциональных и протективных свойств антител. Эффект трансформации низкоавидных антител в высокоавидные открыл принципиально новые возможности для иммунокоррегирующей терапии и отбора средств для иммунокоррекции.

Иммунокоррегирующая ценность трансформации низкоавидных антител в высокоавидные заключается в следующем. Так, если до трансформации низкоавидные антитела, взаимодействуя с антигеном, образовывали мелкие, растворимые, непрочные иммунные комплексы, которые имели низкую аффинность к Clq компоненту системы комплемента, а также к Fc- и CR-клеточным рецепторам иммуннокомпетентных клеток (ИКК) и были неспособны активировать классический путь системы комплемента и клеточно-опосредованные механизмы неспецифической защиты, имели низкую опсоническую, антитоксическую, вируснейтрализующую, цитотоксическую активности, имели ограниченную динамичность макромолекулы и глубоко маскированные SH-группы, то в результате трансформации они приобретали способность образовывать средние и крупные прочные, трудно растворимые иммунные комплексы, при этом повышалась их аффинность к Clq компоненту системы комплемента, к Fc- и CR-клеточным рецепторам ИКК, они становились способными активировать классический путь системы комплемента, клеточно-опосредованные механизмы защиты, кроме того, существенно повышалась их опсоническая, антитоксическая, вируснейтрализующая, цитотоксическая активности, а макроструктура приобретала высокую динамичность, при этом доступность SH-групп в IgG существенно возрастала.

Ниже приводятся конкретные примеры влияния физических, химических и биологических факторов на структурные и функциональные свойства антител G класса здоровых и больных со вторичным иммунодефицитом. Материалом для исследования служили:
а) сыворотка крови больного с выраженными явлениями иммунодефицита (ИД), содержащая 12% высокоавидных и 88% низкоавидных антител,
б) сыворотка крови донора, содержащая исключительно высокоавидные антитела,
в) препараты IgG, выделенные из исследуемых сывороток крови донора и больного с ИД до и после действия на сыворотку физических, химических и биологических факторов.

Степень воздействия трансформирующих факторов подбиралась эмпирически с учетом структурных и/или функциональных изменений низкоавидных антител до выявления критической точки, после которой прекращались какие-либо структурно-функциональные изменения антител.

В качестве физического фактора воздействия использовали УФО. В качестве химического фактора воздействия использовали соль двухвалентного металла. В качестве биологического фактора воздействия использовали сывороточный альбумин.

Из табл.6 видно, что процесс трансформации низкоавидных антител в высокоавидные стереотипен как для сыворотки крови, так и для препаратов IgG и не зависит от природы трансформирующих факторов.

Между степенью воздействия трансформирующего фактора и увеличением числа SH-групп в препаратах IgG (с 0-0,3 до 1,5-2,0 моль/моль белка) и/или нарастании титров нормальных антител в РПГА (с 1:8 до 1:64) прослеживается линейная зависимость.

Высокоавидные и низкоавидные антитела существенно различаются по количеству SH-групп, доступных к селективным реагентам, и по реакционной способности нормальных и/или специфических к антигену антител, выявляемых в РПГА. Эти различия носят выраженный дискретный характер.

Отражением степени трансформации низкоавидных антител в высокоавидные является индекс модулирующего воздействия, который коррелирует с интенсивностью воздействия. Достижение стабильного значения индекса свидетельствует о завершенности процесса трансформации низкоавидных антител.

Величина индекса, близкая к 1,0, является показателем исключительного содержания в пробе антител с высоким авидитетом, толерантных к трансформирующим воздействиям, и характерна для здоровых людей (доноров), величина индекса ниже 0,5 свидетельствует о наличии низкоавидных антител, чувствительных к действию трансформирующих факторов и характерна для больных с иммунодефицитом, остальное - промежуточное состояние.

Идентичность результатов процесса трансформации низкоавидных антител как в сыворотке крови, так и препаратах IgG свидетельствует о том, что в обоих случаях точкой приложения трансформирующего фактора являются исключительно низкоавидные антитела.

Исходя из данных эксперимента можно заключить, что:
а) антитела с высоким и низким авидитетом отличаются по структурным и/или функциональным свойствам и что с помощью трансформирующего фактора можно целенаправленно коррегировать функциональную и протективную активности антител;
б) на основании величины индекса модулирующего воздействия можно контролировать эффективность иммунокоррегирующей терапии и проводить скрининг средств для иммунокоррекции.

В табл.7 представлены обобщенные данные, свидетельствующие, что трансформирующее воздействие ведет к существенным изменениям структурных, функциональных и протективных свойств низкоавидных антител.

Источники информации
1. Новиков Д. К., Новикова В.И., Деркач Ю.Н., Новиков П.Д. Кн.: Основы иммунокоррекции. / Изд. Витебского медицинского института, 1988, 105 с.

2. Иммунокоррекция в пульмонологии/Под ред. А.Г. Чучалина - М.: Медицина, 1989-256 с.

3. Гевондян B.C., Гевондян Н.М. Патент РФ на изобретение 2137133. Экспресс-способ оценки функциональной активности В-системы иммунитета по Гевондян. /Приоритет от 24.07.1996 /Регистрация г. Москва, 10 сентября 1999 г.

4. Гевондян B. C. , Гевондян Н.М., Гевондян М.В. Заявка на изобретение патент РФ Способ и набор для экспресс диагностики доклинических и клинически выраженных форм иммунологической недостаточности /Приоритет от 6.03.2000.

Изобретение относится к области иммунологии, в частности клинической иммунологии и касается способа иммунокоррегирующей терапии доклинических и клинически выраженных форм иммунологической недостаточности и экспресс отбора средств для иммунокоррекции. Иммунокоррекция звеньев иммунной системы достигается за счет повышения в крови и/или лимфе, и/или секретах содержания высокоавидных нормальных и/или специфических к антигену антител G класса путем селективного воздействия на процесс созревания антител в плазматических клетках и/или на структуру низкоавидных антител и трансформации их в высокоавидные. Об эффективности иммунокоррегирующей терапии и/или средства для иммунокоррекции судят на основании изменения в крови, и/или лимфе, и/или секретах содержания высокоавидных и/или низкоавидных антител и/или изменения структурных, и/или функциональных, и/или протективных свойств антител, и/или доступных SH-групп в IgG и индекса модулирующего воздействия, который определяют на основании соотношения результатов, полученных до и после иммунокоррегирующего воздействия для каждого показателя, соответственно. Выбор средства и способа воздействия ведется с учетом степени выраженности иммунологической недостаточности и/или формы иммунологической недостаточности (ЛИН-1, ЛИН-2, ИН-1, ИН-2) и/или клинических проявлений иммунопатологических синдромов (инфекционный, аллергический, аутоаллергический, лимфопролиферативный) и/или природы этиотропного агента. Преимущество изобретения заключается в повышении эффективности иммунокоррегирующей терапии. 1 з.п.ф-лы, 7 табл.

1. Способ иммунокоррегирующей терапии доклинических и клинически выраженных форм иммунологической недостаточности и экспресс отбора средств для иммунокоррекции, включающий воздействие медикаментозных и немедикаментозных средств, направленных на восстановление процессов пролиферации и дифференциации В- и Т-клонов субпопуляций лимфоцитов и активности клеток макрофагальной системы, отличающийся тем, что иммунокоррекция звеньев иммунной системы достигается за счет воздействия на процесс созревания антител в плазматических клетках и/или на структуру низкоавидных нормальных и/или специфических к антигену антител и трансформации их в высокоавидные, при этом об эффективности иммунокоррегирующей терапии и средства для иммунокоррекции судят на основании изменения в крови и/или лимфе и/или секретах содержания высокоавидных и/или низкоавидных антител и величины индекса модулирующего воздействия, характеризующего изменения структурных и/или функциональных и/или протективных свойств антител и/или доступности SH-групп в IgG, который определяют на основании соотношения результатов, полученных до и после иммунокоррегирующего воздействия для каждого показателя, соответственно, при этом выбор средства и способа воздействия ведется с учетом степени выраженности иммунологической недостаточности и/или формы иммунологической недостаточности (ЛИН-1, ЛИН-2, ИН-1, ИН-2), и/или клинических проявлений иммунопатологических синдромов (инфекционный, аллергический, аутоаллергический, лимфопролиферативный) и/или природы этиотропного агента. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что увеличение содержания высокоавидных антител до 75-100% при одновременном снижении низкоавидных антител до 25-0% и значение индекса модулирующего воздействия 0,75-1,0 свидетельствуют о нормализации процесса созревания антител в плазматических клетках и/или снижении степени выраженности иммунологической недостаточности и/или перехода иммунологической недостаточности из формы с большей - в форму с меньшей степенью выраженности (ИН-2 в ИН-1 или ЛИН-2 или ЛИН-1), или норму, и/или высокой эффективности иммунокоррегирующей терапии и средства для иммунокоррекции, а уменьшение содержания высокоавидных антител до 25-5% при одновременном увеличении низкоавидных антител до 75-95% и значение индекса модулирующего воздействия 0,25-0,06 свидетельствуют о дисфункции процесса созревания антител в плазматических клетках и/или повышении степени выраженности иммунологической недостаточности и/или перехода иммунологической недостаточности из формы с меньшей - в форму с большей степенью выраженности (ЛИН-1 в ЛИН-2 или ИН-1 или ИН-2), и/или отсутствии иммунокоррегирующего эффекта и низкой эффективности средства для иммунокоррекции, остальное - промежуточное состояние.