ВАКЦИНА ПОЛИВАК-ТМ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ДЕРМАТОФИТОЗОВ ЖИВОТНЫХ Российский патент 1994 года по МПК A61K39/02 

Изобретение относится к ветеринарной микологии, в частности к созданию средств специфической профилактики и лечения дерматофитозов животных.

Дерматофитозы - зооантропонозные болезни кожи и ее производных. Клиническое проявление болезни характеризуется выпадением волоса на месте поражений, гиперемией, шелушением и образованием асбестовидных корок. Нередко воспалительный процесс сопровождается нагноением. Для дерматофитозов характерно очаговое поражение кожи.

Дерматофитозы животных наносят значительный экономический и социальный ущерб. Больные дерматофитозами животные требуют длительного лечения и служат источником возбудителя инфекции для восприимчивых животных и человека.

Известен способ лечения дерматофитозов с помощью различных медикаментозных средств для местной обработки участков пораженной кожи. При этом применялись мази "ЯМ", "Юглон" [1] и ряд других мазей, линиментов, растворов и других форм, содержащих фунгицидные или фунгистатические средства.

Недостатками этих средств были:
- низкая эффективность;
- необходимость проведения карантинных мероприятий, дезинфекцией помещений для содержания животных (питомники, виварии, фермы, зоопарки, цирки и другие предприятия);
- значительные затраты средств на медикаментозные средства и труд ветеринарных специалистов, обслуживающего персонала;
- трудности с фиксацией животных (при содержании диких животных в неволе).

Разработаны вакцины против трихофитии крупного рогатого скота (авт.св. N 268593, А 61 К 39/00, 1970), пушных зверей и кроликов [2], верблюдов (авт.св. N 1190574, А 61 К 39/00, 1985) и др.

Известна также ранее предложенная вакцина для профилактики и лечения трихофитии лошадей С-П-1 [3], включающая в себя вакцинный штамм Trichophyton equinum N 2251/71, депонированный в ВГНКИ ветпрепаратов, СССР, который выращивают в течение 20-25 сут на сусло-агаре при 26-28^оС. Затем снимают грибную массу с поверхности питательной среды, добавляют стерильную дистиллированную воду и гомогенизируют, доводят концентрацию клеток до 600-900 млн/мл. Гомогенат переносят в отдельную колбу и добавляют защитную среду в соотношении 1:1 ( ± 25%), содержащую 2-8% желатина (желатозы) и 10-40% сахарозы и подвергают лиофилизации.

Вакцину применяют с профилактической и лечебной целью молодняку и взрослым животным путем двукратного введения в мышцу в область шеи с интервалом 10-14 сут в дозах 1 - 2 мл в зависимости от возраста лошади. Лечебные дозы удваивались. Предложенная вакцина взята за прототип.

Недостатком вакцин, изготовленных указанным способом, является то, что они не обеспечивают создания иммунитета против микроспории и трихофитии, обусловленной другими возбудителями. Также было отмечено, что на месте введения живых вакцин образуются специфические очаги, из которых в определенное время можно выделить культуру вакцинных штаммов. Вакцинные штаммы обладают остаточной вирулентностью. Учитывая, что некоторые виды домашних животных имеют повышенный контакт с человеком, образование специфических очагов у этой группы животных недопустимо.

Цель работы - получение универсальной вакцины для специфической терапии и профилактики дерматофитозов животных, изыскание иммуногенных штаммов.

Цель достигается благодаря тому, что в качестве вакцинных штаммов используют штаммы грибов Trichophyton verrucosum N ВКПГ F -939/410, T.mentagrophytes N ВКПГ F -930/1032, T.equinum N ВКПГ F -929/381, T.sarkisovii N 551/68, Microsporum canis N ВКПГ F -928/1393, M.canis var. obesum N ВКПГ F -727/1311, M.canis var/ distortum N ВКПГ F -728/120, M.gypseum N ВКПГ F -729/59, причем вакцину можно готовить, смешивая различные комбинации указанных штаммов. Гомогенизацию культур проводят в растворе, состоящем из 0,2 - 2 мас.% ферментативного гидролизата мышечных белков (ФГМ-с), 5-12 мас.% глюкозы, 0,1-1,2 мас.% экстракта дрожжей, остальное вода, доводят концентрацию микроконидий до 40-120 млн/мл и спустя 1-2 сут инактивируют тимерсалом (С₉Н₉О₂SNaHg) из расчета 1:10000-1:25000 в течение 1-2 сут или любым другим инактиватором. Полученную взвесь расфасовывают и применяют на животных.

Вакцина согласно изобретения является инактивированной, что устраняет вероятность перезаряжения и, вместе с тем, обладает высокими иммуногенными свойствами. В отличие от известных вакцин, она создает иммунитет практически ко всем основным возбудителям дерматофитозов животных.

Штаммы, используемые для изготовления вакцины, депонированы во Всесоюзной коллекции патогенных грибов Центра глубоких микозов МЗ СССР, г.Ленинград, и обладают следующими свойствами:
- штамм Trichophyton verrucosum N ВКПГ F-931/410.

Штамм получен путем направленной селекции по признаку спорообразования и аттенуации эпизоотического штамма N 410, выделенного от северного оленя в 1978 г.

Идентификация штамма проведена по определителю Ребела и Таплина (Rebell G., Taplin D., Dermatophytes, their recognition and identification, 1978) и Кашкина П. Н. с соавт. "Определитель патогенных, токсигенных и вредных для человека грибов", 1979 г.

Характеристика штаммов по биологическим свойствам представлена в табл. 1.

Эпизоотический штамм N 410 обладает рядом свойств, из-за которых он не может быть использован для изготовления вакцины: слабое накопление биомассы и образования микроконидий, высокая вирулентность и реактогенность для животных антигенов из него.

Штамм N ВКПГ F-931/410 отличается от эпизоотического более быстрым ростом на питательных средах, обильным образованием микроконидий, ослабленной вирулентностью и ареактогенностью для животных корпускулярных инактивированных антигенов из него.

- штамм Trichophyton mentagrophytes N ВКПГ F-930/1032.

Штамм получен путем направленной селекции по признаку спорообразования и аттенуации эпизоотического штамма N 1032, выделенного от лошади в 1985 г.

Идентификация штамма проведена по определителям Ребела и Таплина (1978) и Кашкина П.Н. с соавт. (1979).

Характеристика штаммов по биологическим свойствам представлена в табл. 2.

Эпизоотический штамм N 1032 обладает рядом свойств, из-за которых он не может быть использован для изготовления вакцины: слабое накопление биомассы и образования микроконидий, высокая вирулентность реактогенность.

Штамм N ВКПГ F-930/1032 отличается от эпизоотического более быстрым ростом на питательных средах и ареактогенностью для животных антигенов из него.

- Штамм Trichophyton equinum N ВКПГ F -929/381.

Штамм получен путем направленной селекции по признаку спорообразования и аттенуации эпизоотического штамма N 381, выделенного от лошади в 1986 г.

Идентификация штамма проведена по определителям Ребела и Таплина (1978) и Кашкина П.Н. с соавт. (1979).

Характеристика штаммов по биологическим свойствам представлена в табл. 3.

Эпизоотический штамм N 381 обладает рядом свойств, из-за которых он не может быть использован для изготовления вакцины: слабое накопление биомассы и образование микроконидий, высокая вирулентность и реактогенность.

Штамм N ВКПГ F-929/381 отличается от эпизоотического более быстрым ростом на питательных средах, обильным образованием микроконидий, ослабленной вирулентностью и ареактогенностью для животных антигенов из него.

- Штамм Microsporum canis N ВКПГ F-928/1393.

Штамм получен путем направленной селекции по признаку спорообразования и аттенуации эпизоотического штамма N 1393, выделенного от кошки в 1988 г.

Идентификация штамма проведена по определителям Ребела и Таплина (1978) и Кашкина П.Н. с соавт. (1979).

Характеристика штаммов по биологическим свойствам представлена в табл. 4.

Эпизоотический штамм N 1393 обладает рядом свойств, из-за которых он не может быть использован для изготовления вакцины: слабое накопление биомассы и образование микроконидий, высокая вирулентность и реактогенность для животных антигенов из него.

Штамм N ВКПГ F-928/1393 отличается от эпизоотического более быстрым ростом на питательных средах, обильным спороношением, ослабленной вирулентностью и ареактогенностью для животных антигенов из него.

- Штамм Microsporum canis var.obesum N ВКПГ F-727/1311.

Штамм получен путем направленной селекции по признаку спорообразования и аттенуации эпизоотического штамма N 1311, выделенного от тигра в 1986 г. Идентификация штамма проведена по определителям Ребела и Таплина (1978) и Кашкина П.Н. с соавт. (1979).

Характеристика штаммов по биологическим свойствам представлена в табл. 5.

Эпизоотический штамм N 1311 обладает рядом свойств, из-за которых он не может быть использован для изготовления вакцины: слабое накопление биомассы и микроконидиальное спороношение, высокая вирулентность и реактогенность.

Штамм N ВКПГ F-727/1311 отличается от эпизоотического более быстрым ростом на питательных средах, обильным образованием микроконидий, ослабленной вирулентностью и ареактогенностью для животных антигенов из него.

- Штамм Microsporum canis var.distartum N ВКПГ F-728/120.

Штамм получен путем направленной селекции по признаку спорообразования и аттенуации эпизоотического штамма N 120, выделенного от черной пантеры в 1987 г.

Идентификация штамма проведена по определителям Ребела и Таплина (1978) и Кашкина П.Н. с соавт. (1979).

Эпизоотический штамм N 120 обладает рядом свойств, из-за которых не может быть использован для изготовления вакцины: слабое накопление биомассы и образование микроконидий, высокая вирулентность и реактогенность.

Штамм N ВПКГ F-728/120 отличается от эпизоотического более быстрым ростом на питательных средах, обильным образованием микроконидий, ослабленной вирулентностью и ареактогенностью для животных антигенов из него.

Характеристика штаммов по биологическим свойствам представлена в табл. 6.

- Штамм Microsporum gypseum N ВКПГ F-729/59.

Штамм получен путем направленной селекции по признаку спорообразования и аттенуации эпизоотического штамма N 59, выделенного от лошади в 1985 г.

Идентификация штамма проведена по определителям Ребела и Таплина (1978) и Кашкина П.Н. с соавт. (1979).

Характеристика штаммов по биологическим свойствам представлена в табл. 7.

Эпизоотический штамм N 59 обладает рядом свойств, из-за которых он не может быть использован для изготовления вакцины: слабое накопление биомассы и образование микроконидий, высокая вирулентность и реактогенность антигенов из него.

Штамм N ВКПГ F-729/59 отличается от эпизоотического более быстрым ростом на питательных средах, обильным образованием микроконидий, ослабленной вирулентностью и ареактогенностью для животных антигенов из него.

Для изготовления вакцины также используется штамм Trichophyton sarkisovii N 551/68 (см. а.с. N 1177972, СССР).

П р и м е р N 1. Для изготовления 1 л вакцины берут культуры штаммов NN ВКПГ F-931/40, 930/1032, 929/381, 551/68, 928/1393, 727/1311, 728/120, 729/59 и выращивают в течение 15 сут на сусло-агаре при 26^оС. Каждую культуру выращивают на 8 матрацных колбах. Затем грибную массу снимают, гомогенизируют, заливают раствором из расчета 200 мл на каждый миксер. Используют раствор, содержащий 1% ФГМ-с, 10% глюкозы, 1% экстракта дрожжей, остальное вода. Концентрацию микроконидий на 1 мл гомогенатов доводят до 90 млн. Через 2 сут выдерживания берут по 125 мл взвеси каждой культуры и смешивают между собой в одной емкости. Вакцину можно готовить, смешивая различные комбинации указанных штаммов.

Для инактивации смеси гомогенатов используют тимерсал в соотношении 1: 20000, который добавляют непосредственно во взвесь клеток. На 1 л гомогената добавляют 50 мг тимерсала. Смесь клеток выдерживают при комнатной температуре в течение 2 сут.

Полученную вакцину разливают по флаконам, контролируют на стерильность, безвредность и иммуногенность согласно общепринятым методикам и хранят в холодильнике при плюс 4^оС.

Изготовленная таким образом вакцина была использована для иммунизации животных.

С профилактической и лечебной целью вакцину применяют в следующих дозах (табл.8):
П р и м е р 2. Полученная по примеру 1 вакцина Поливак-ТМ была испытана на лабораторных животных и животных разных видов с профилактической и лечебной целями. Данные представлены в табл.9.

П р и м е р 3. Полученная по примеру 1 вакцина Поливак-ТМ также была испытана для лечения больных дерматофитозами животных. Данные представлены в табл.10.

Вакцина Поливак-ТМ обладает следующими свойствами:
- при внутримышечном введении создает иммунитет у многих видов восприимчивых животных;
- вызывает иммунитет против основных возбудителей дерматофитозов животных;
- имеет стабильные иммуногенные свойства;
- стандартна в изготовлении в связи с применением штаммов со стабильными биологическими свойствами;
- экономична при изготовлении;
- включает в себя полный набор экзо- и эндоантигенов культур дерматофитов;
- не реактогенна для животных.

Вакцина Поливак-ТМ испытана более чем на 500 животных различных видов, как правило, в очагах инфекции с положительным эффектом.

Использование: вакцина специфическая терапия и профилактика дерматофитозов животных, иммуногенные штаммы. Сущность изобретения: в качестве вакцинных штаммов используют штаммы грибов Trichophyton verrucosum N ВКПГ F-939/410, Trichophyton mentagrophytes N ВКПГ F-930/1032, Trihophyton egninum N ВКПГ F-929/381, T. Sarkisovil n 551/68, Miorosporum canis n ВКПГ f-928/1393, M. canis vur. obesum n ВКПГ f-727/1311, M.canis vur, distortum n вКПГ f-728/120, M. gypsent n вКПГ F-729/59, причем вакцину можно готовить, смешивая различные комбинации указанных штаммов. Гомогенизацию культур проводят в растворе, состоящем из 0,2 - 2 мас.% ферментативного гидромезата мышечных белков (ФГМ - с), 5 - 12 мас.% глюкозы, 0,1 - 1,2 мас.% экстракта дрожжей, остальное вода, доводят концентрацию микроконидий до 40 - 120 млн/мл и спустя 1 - 2 сут, инактивируют тимерсалом (C₉H₉O₂SNaHg) из расчета 1 : 10000 - 1 : 25000 в течение 1 - 2 сут или любым другим инактиватором. Полученную взвесь расфасовывают и применяют на животных. Вакцина является инактивированной, что устраняет вероятность перезаряжения и, вместе с тем, обладает высокими иммуногенными свойствами. В отличие от известных вакцин она создает иммунитет практически ко всем основным возбудителям дерматофитозов животных. 3 з.п. ф-лы, 10 табл.

1. Вакцина для профилактики и лечения дерматофитозов животных, содержащая антигенный материал из культур дерматофитов Trichophyton verrucosum ВКПГF N 931/410 и/или Trichophyton mentagrophytes БКПГF N 930/1032 и/или Trichophyton eguinum БКПГF N 929/381 и/или Microsporum canis ВКПГF N 928/393 и/или Murosporum canis var. obesum. ВКПГF N 727/1311 и/или Microsporum canis var. ductortum N 728/120 и/или Microsporum gypseum ВКПГ N 729/59, инактиватор и физиологически приемлемый носитель. 2. Вакцина по п.1, отличающаяся тем, что содержит антигенный материал культур дерматофитов в количестве 40 - 120 млм микроконидий в 1 см³. 3. Вакцина по п.1, отличающаяся тем, что в качестве инактиватора она содержит тимерсал, или формалин, или 2-пропиолактон. 4. Вакцина по п. 1, отличающаяся тем, что в качестве физиологически приемлемого носителя она содержит водный раствор 0,2 - 2 мас.% ферментативного гидролизата мышечных белков, 5 - 12 мас.% глюкозы и 0,1 - 1,2 мас.% экстракта дрожжей.