ВАКЦИНА ПРОТИВ МИКРОСПОРИИ ВОСПРИИМЧИВЫХ ЖИВОТНЫХ И СПОСОБ ЕЕ ИЗГОТОВЛЕНИЯ Российский патент 1997 года по МПК A61K39/00 

Изобретение относится к области биотехнологии и ветеринарной микологии, в частности, к получению вакцины против дерматомикозов животных.

В настоящее время вопрос микроспории стоит на первом месте среди других возбудителей дерматомикозов. Широта распространения микроспории среди собак, кошек, кроликов, пушных зверей и лошадей достигает наибольшего распространения, чем за все предыдущие годы. Ущерб от микроспории у собак и кошек имеет социальное значение, т.к. заражаются дети, у пушных зверей и кроликов порча шкурок, срыв племенных работ, у лошадей срыв аукционов, спортивных выступлений.

Известна вакцина для профилактики дерматофитозов домашних и лабораторных животных, в частности, против микроспории и трихофитии собак, кошек, кроликов и морских свинок, состоящая из вирулентных культур возбудителей Microsporum canis, Trichophyton mentagrophytes и Microsporum gypscum.

Способ ее изготовления состоит в следующем:
Выращивание культур осуществляют раздельно, гомогенаты в концентрации 600 млн 1 млрд микроконидий смешивают в равных объемах, полученную смесь дополнительно инактивируют 0,5-0,6% раствором формалина в течение 3-4 дней при 37-38^oC с добавлением 0,8-0,9%-ного раствора нуклеаната натрия в соотношении I:I (SU, авт.свид. N 1734762, А61К 39/00,1992).

Наиболее близким аналогом является вакцина против дерматомикоза животных, содержащая антигены из инактивированных вирулентных культур возбудителей микропории и трихофитии, в частности, из штамма Microsporum canis, солевой изотонический раствор и гидроокись алюминия (EP, заявка N 0393371, A 61 K 39/00, 1990).

Технический результат изобретения заключается в получении живой жидкой безвредной вакцины, создающей напряженный иммунитет против возбудителя микроспории у всех видов восприимчивых животных.

Предлагаемая живая жидкая вакцина может быть использована для профилактики и лечения микроспории собак, кошек, кроликов, пушных зверей и лошадей.

Для изготовления вакцины используют один аттенуированный штамм гриба Microsporum canis ВИЭВ N 473. Предложенный штамм обладает следующими вакцинными свойствами.

Культурально-морфологические признаки.

Штамм распадается по популярному составу на 3 основных варианта, которые все используются для изготовления вакцины.

Вариант 1. Колонии белые, округлые, возвышенные, пушистые. Обратная сторона центральной части колонии коричневого цвета; причем 50% колонии 5-7 мм в диаметре и 50% более мелкие 1-3 мм. Мицелий толстый и тонкий. Толстый мицелий крупнозернистый, тонкий без перегородок. Микроконидии овальные, грушевидные 5,2-10,4х2,6-5 мкм.

Вариант 2. Колонии белые, округлые, возвышенные, пушистые. Обратная сторона центра колоний коричневого цвета. Микроскопия такая же как в 1 варианте.

Вариант 3. Колонии светлосерого цвета, однотипные, паутинистые диаметром 3-5 мм. Мицелий толстый и тонкий. Микроконидии округлые, овальные, грушевидные 5,2-10,4х2,6-5,2 мкм. Макроконидни чаще всего абортивные без перегородок или с 1-2 перегородками 19,5-54,6 мкм.

Процентное соотношение микро- и макроконидий в варианте колеблется в пределах 90-99,08% 1,92-10% соответственно.

Наличие макроконидий в вакцине необходимо и является признаком ее иммуногенности.

Вирулентные свойства. При нанесении на скарифицированную кожу кролика растертой в ступке культуры гриба вакцинного штамма в концентрации 300-500 млн/мл грибных клеток на 3-5 день заметна гиперемия скарифицированного участка кожи кролика, которая исчезает на 7-10 день с образованием поверхностного легкого шелушения и выздоровления на 15-20 день.

Иммуногенные свойства. Двукратная иммунизация кошек, собак, кроликов, пушных зверей и лошадей формирует у животных напряженный иммунитет сроком 1,5-2 года (срок наблюдения).

Реактогенные свойства. Внутримышечное введение вакцины у собак, кошек, кроликов, пушных зверей и лошадей не приводит к изменению клинического состояния животных.

При введении вакцины больным микроспории лошадям на месте введения в 1-10% случаях может наблюдаться небольшая припухлость размером с грецкий орех, которая исчезает к 3-5 дню.

Вакцина имеет следующий состав:
Антиген из живой культуры гриба Microsporum canis штамма N 473 с концентрацией 20-50 млн микроконидий в 1 мл 4-6% солевого раствора NaCl с добавлением 0,5 мл обычного ГГОА на каждые 100 мл антигена.

Вакцину готовят следующим образом:
Пример 1
В качестве антигена используют штамм гриба Microsporum canis N 473. Штамм в отличие от эпизоотических обладает низкой вирулентностью, высокоиммуногенен, обильно образует микроконидии, содержит единичные макроконидии, не опасен для людей.

С матросов проводят съем грибницы, которую гомогенизируют в стерильном 4-6% солевом растворе NaCl, содержащем после гомогенизации в нем грибной пленки от 300 до 1000 млн микроконидий в 1 мл. Гомогенат разводят таким же солевым раствором до концентрации 30 млн в 1 мл микроконидий и добавляют гель гидроокиси алюминия из расчета 0,5 мл геля на 100 мл антигенной взвеси. Полученную таким образом вакцину разливают в ампулы по 2 мл и запаивают.

На приготовление 1 л вакцины берут: 100 мл гомогената антигена Microsporum canis штамм N 473, с концентрацией 300 млн/мл микроконидий и 5 мл официального (обычного) геля гидроокиси алюминия, остальное 5% раствор NaCl.

Полученную вакцину применили внутримышечно с целью профилактики для кошек и собак в дозе 1 мл 518 голов. Эффективность составила 91,5% на лошадях - 48 голов в дозе 1 мл, эффективность составила 88,5% для пушных зверей и кроликов в дозе 1 мл, 232 головы, эффективность составила 93,7%
Пример 2
Гомогенат антигена готовят таким же способом, как в примере 1 и разводят до концентрации 50 млн микроконидий в 1 мл солевого раствора NaCl и добавляют гель гидроокиси алюминия в том же количестве, что и в первом примере, т. е. по объему.

Полученную таким образом вакцину применили с положительным профилактическим эффектом для собак и кошек в дозе 0,8 мл 111 голов. Эффективность составила 95% на лошадях 30 голов в дозе 0,8 мл, эффективность составила 93% для пушных зверей и кроликов в дозе 0,8 мл 300 голов, эффективность составила 100%
Пример 3
Гомогенат антигена готовили так же, как в примере 1 и разводили до концентрации 18-20 млн микроконидий в 1 мл солевого раствора NaCl, добавляли гель гидроокиси алюминия в том же количестве, что и в первом примере.

Полученную таким образом вакцину применяли с положительным профилактическим эффектом для собак и кошек в дозе 1,2 мл 50 голов. Эффективность составила 97% на лошадях 18 голов в дозе 1,2 мл, эффективность составила 95% для пушных зверей и кроликов в дозе 1,2 мл 200 голов, эффективность составила 98,5%
Вакцина может быть использована с лечебной целью, в этом случае доза удваивается.

Предложенный штамм гриба Microsporum canis, используемый для изготовления вакцины против микроспории восприимчивых животных, хранится в музее грибных культур лаборатории микологии и антибиотиков Всероссийского научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии им. Я.Р.Коваленко г. Москва под N 473.

Предложенная вакцина апробирована нами в условиях лаборатории и хозяйств с положительным результатом на поголовье собак 1520, кошек 3280, лошадей 220, пушных зверей и кроликов 700 голов.

Результаты испытаний показали, что вакцина является безвредной и создает напряженный иммунитет длительностью 1,5-2 года (скор наблюдения).

Вакцина найдет применение на ипподромах, в частных секторах и других учреждениях для профилактики и лечения микроспории восприимчивых животных.

Использование: биотехнология, микология, вакцина против дерматомикозов животных. Сущность изобретения: вакцина против микроспории восприимчивых животных содержит штамм гриба Microsporum canis ВИЭВ N 473 на солевом растворе NaCl с добавлением геля гидроокиси алюминия. Вакцину готовят обычным способом, присущим трихофитийным или микроспорийным вакцинам, но без использования защитной среды. И получают жидкую живую вакцину путем ресуспензирования культуры гриба в солевом растворе NaCl с добавлением геля гидроокиси алюминия. Вакцину используют с профилактической и лечебной целью против микроспории всем видам восприимчивых животных, внутримышечно с интервалом 10-14 дней. Вакцина апробирована с положительным результатом. Она обеспечивает создание напряженного иммунитета и найдет применение на ипподромах, частных секторах и других учреждений для профилактики и лечения микроспории восприимчивых животных. 2 с.п. ф-лы.

1. Вакцина против микроспории восприимчивых животных, содержащая антиген из штамма гриба Microsporum canis в солевом растворе и гидроокись алюминия, отличающаяся тем, что из антигенов она содержит штамм гриба Microsporum canis ВИЭВ N 473 в концентрации 20 50 млн микроконидий в 1 мл 4 6%-ного солевого раствора NaCl, а гидроокись алюминия в количестве 0,5 мл на каждые 100 мл вакцины. 2. Способ изготовления вакцины против микроспории восприимчивых животных, включающий посев и выращивание культуры гриба Microsporum canis, получение гомогената грибной массы в солевом растворе с последующим добавлением гидроокиси алюминия, отличающийся тем, что выращивают культуру гриба штамма Microsporum canis ВИЭВ N 473, гомогенат готовят с концентрацией 20 50 млн микроконидий в 1 мл 4 6%-ного солевого раствора NaCl, а гидроокись алюминия добавляют из расчета 0,5 мл на каждые 100 мл вакцины.