КОМПЛЕКСНАЯ ВАКЦИНА ПРОТИВ ТРИХОФИТИИ И МИКРОСПОРИИ ПУШНЫХ ЗВЕРЕЙ, КРОЛИКОВ, СОБАК И КОШЕК Российский патент 2001 года по МПК A61K39/00 

Изобретение относится к области ветеринарной микологии, в частности к получению вакцины против трихофитии и микроспории плотоядных животных преимущественно пушных зверей, кроликов, собак и кошек.

Известна вакцина против трихофитии пушных зверей и кроликов, включающая культуру гриба штамма Trichophyton gypseum 135/1963 и защитную среду при концентрации микроконидий 100-800 млн в 1 мл защитной среды следующего состава, вес.%:
сорбит или сахароза - 10-40
Желатин - 2,0 - 10,0
Вода - Остальное
Способ изготовления вакцины заключается в следующем: приготовление питательной среды, выращивание при 26-28^oC культуры гриба в течение 15-30 суток, съем культуры, дозировку биомассы и лиофилизацию. Вакцину вводят внутримышечно с внутренней стороны бедра в дозах 0,5 - 10 мл на голову с концентрацией 20 млн в 1 дозе (1 мл) двукратно с интервалом 7-10 дней.

Данная вакцина создает иммунитет только против трихофитии пушных зверей и кроликов и не создает иммунитета против микроспории этих животных [I].

Известна также вакцина против микроспории пушных зверей и кроликов из штамма гриба Microsporum canis N 2585, содержащая грибные клетки - микроконидии в защитной среде (сахароза, желатин), взятые в равных соотношениях. Вакцину готовят обычным способом, присущим известным живым грибным вакцинам (ЛТФ-130, С-П-1, MEHTABAK и др.). Культуру гриба Microsporum canis N 2585 выращивают 12-25 дней, а гомогенат готовят с концентрацией микроконидий 300-1500 млн/мл.

Штамм гриба Microsporum canis N 2585 характеризуется следующими вакцинными свойствами:
Морфологические признаки. Мицелий в виде прямых или изогнутых ветвящихся гиф шириной 2-6 мкм. Микроконидии многочисленные палочковидные, грушевидные, овальные 2,5-5 х 3-7 мкм. Хламидоспоры в старых культурах интеркалярные. Макроконидии встречаются редко и только в старых культурах.

Культуральные свойства. Колония белая, бархатисто-порошистая, приподнятая с реснитчатым растущим краем. Обратная сторона в центре желтоватая. Диаметр колонии на 18 день 80-90 мм.

Вирулентные свойства. При нанесении на скарифицированную кожу кролика или морской свинки гомогенизированной культуры на 10-12 день обнаруживаются отдельные шелушащиеся участки и мелкие корочки. Выздоровление на 15-25 день.

Иммуногенные свойства. При двукратном внутримышечном введении кроликам вакцины, изготовленной из полученного штамма в дозе, содержащей 20-50 млн живых микроконидий, у животного формируется напряженный иммунитет к последующему заражению микроспорией продолжительностью не менее 1,5 лет (срок наблюдения).

Вакцину применяют с профилактической и лечебной целью молодняку и взрослым пушным зверям и кроликам путем двукратного внутримышечного введения с интервалом 5-12 дней в одну или попеременно в две задние конечности в дозах 0,2 - 2 мл в зависимости от возраста животного и назначения вакцины (лечебное или профилактическое). Иммунитет у привитых животных наступает через 20 дней после последней иммунизации.

Данная вакцина создает иммунитет только против микроспории пушных зверей и кроликов и не создает иммунитета против трихофитии этих животных [2].

Задачей наших исследований было получение комплексной вакцины, обеспечивающей создание в организме пушных зверей, кроликов, собак и кошек и других восприимчивых животных длительного и напряженного иммунитета одновременно против трихофитии и микроспории.

Нами получена комплексная вакцина против трихофитии и микроспории пушных зверей, кроликов, собак и кошек, включающая антиген культуры гриба Trichyton (gypseum) mentagrophytes N 135/1963 с концентрацией микроконидий 100-800 млн в 1 мл гомогената и из антигена культура гриба Microsporum canis N 473 с концентрацией 350-600 млн микроконидий в 1 мл гомогената, взятых в равных соотношениях. Она также содержит защитную среду, состоящую из 35-45% сахарозы и 5-7% желатина. Наполнитель берется в соотношении 1:1 с гомогенатом.

Штамм Microsporum canis N 473 обладает следующими вакцинными свойствами:
Культурально-морфологические признаки. Штамм распадается по популяционному составу на 3 основных варианта, которые все используются для изготовления вакцины.

Вариант 1. Колонии белые, округлые, возвышенные, пушистые. Обратная сторона центральной части колонии коричневого цвета; причем 50% колоний 5-7 мм в диаметре и 50% более мелкие 1-3 мм. Мицелий толстый и тонкий. Толстый мицелий крупнозернистый, тонкий - без перегородок. Микроконидии овальные, грушевидные 5,2-10,4 х 2,6-5 мкм.

Вариант 2. Колонки белые, округлые, возвышенные, пушистые. обратная сторона центра колоний коричневого цвета. Микроскопия такая же, как в 1 варианте.

Вариант 3. Колонии светло-серого цвета, однотипные, паутинистые диаметром 3-5 мм. Мицелий толстый и тонкий. Микроконидии округлые, овальные, грушевидные 5,2-10,4 х 2,6-5,2 мкм. Макроконидии чаще всего абортивные без перегородок или с 1-2 перегородками 19,5 - 54,6 мкм.

Процентное соотношение микро- и макроконидий в варианте колеблется в пределах 90-99,08% - 1,92-10% соответственно.

Наличие макроконидий в вакцине необходимо и является признаком ее иммуногенности.

Вирулентные свойства. При нанесении на скарифицированную кожу кролика растертой в ступке культуры гриба вакцинного штамма в концентрации 300-500 млн/мл грибных клеток на 3-5 день заметна гиперемия скарифицированного участка кожи кролика, которая исчезает на 7-10 день с образованием поверхностного легкого шелушения и выздоровления на 15-25 день.

Иммуногенные свойства. Двукратная иммунизация кошек, собак, кроликов, пушных зверей и лошадей формирует у животных напряженный иммунитет сроком 1,5 - 2 года (срок наблюдения).

Реактогенные свойства. Внутримышечное введение вакцины у собак, кошек, кроликов, пушных зверей и лошадей не приводит к изменению клинического состояния животных.

При введении вакцины больным микроспорией лошадям на месте введения в 1-10% случаев может наблюдаться небольшая припухлость размером с грецкий орех, которая исчезает к 3-5 дню.

Штамм депонирован и хранится в Музее грибных культур лаборатории микологии и антибиотиков Всероссийского научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко, г. Москва, под N 473.

Справку о депонировании прилагаем.

Данный штамм получен нами и описан в ранее поданной заявке согласно приоритетной справке N 94025884 от 12.07.94 г. "Вакцина против микроспории восприимчивых животных и способ ее изготовления", в которой описанный штамм используют для профилактики и лечения микроспории собак, кошек, кроликов, пушных зверей и лошадей.

Вакцину готовят следующим образом.

Пример 1.

В качестве антигена используют штамм гриба Microsporum canis N 473. Штамм в отличие от эпизоотических штаммов обладает низкой вирулентностью, высокоиммуногенен, обильно образует микроконидии, содержит единичные макроконидии, не опасен для людей.

С матрасов проводят съем грибницы, которую гомогенизируют в стерильной дистиллированной воде, содержащей 400-600 млн микроконидий в 1 мл.

В качестве второго антигена берут штамм гриба Trichophyton mentagrophytes (Trichophyton gypseum) N 135/1963. Гомогенат получают таким же образом, как и штамм гриба Microsporum canis N 473. Оба гомогената смешивают в равных соотношениях и добавляют защитную среду (сахароза 30%, желатин 8%, вода остальное).

Для изготовления 1 л вакцины берут полученный таким образом гомогенат в количестве 260 мл с концентрацией 500 млн в 1 мл иммуногенных микроконидий культуры гриба Microsporum canis N 473 и смешивают с 240 мл гомогената культуры гриба Trichophyton Mentagrophytes N 135/1963 с концентрацией 580 млн в 1 мл иммуногенных микроконидий. После этого смеси гомогенатов соединяют с 500 мл защитной среды, состоящей из сахарозы 30%, желатина 8%, воды остальное, расфасовывают по 2 мл в пенициллиновые флаконы, замораживают в низкотемпературном холодильнике до -50^oC в течение 6 ч и лиофилизируют.

Полученную вакцину применили двукратно внутримышечно с профилактической целью для кошек и собак в дозе 1 мл - 42 головы. Эффективность составила - 91,5%, на лошадях - 57 голов в дозе 1 мл, эффективность составила 93%, на пушных зверях и кроликах - 1,5 тыс. голов, эффективность составила 98%.

Пример 2.

Гомогенат антигенов готовили аналогично примеру 1.

Для изготовления 1 л вакцины берут полученный таким образом гомогенат в количестве 220 мл с концентрацией 600 млн в 1 мл иммуногенных микроконидий культуры гриба N 473 и смешивают с 350 мл гомогената культуры гриба Trichophyton mentagrophytes N 135/1963. После этого смеси гомогенатов соединяют с 430 мл защитной среды состава как в примере 1, расфасовывают по 2 мл в пенициллиновые флаконы и лиофилизируют.

Полученную таким образом вакцину применили внутримышечно двукратно с целью профилактики для кошек и собак в дозе 0,8 мл - 37 голов, эффективность 95,6%, для собак и кошек в дозе 1,2 мл - эффективность 93%, для собак и кошек - 138 голов в лечебной дозе 2 мл - 100% эффективность, для пушных зверей с целью профилактики в дозе 1 мл эффективность 100% - 300 голов, для лошадей в лечебной дозе 2 мл - 146 голов эффективность 100%.

Пример 3.

Гомогенат антигенов готовили аналогично примеру 1.

Для изготовления 1 л вакцины берут полученный таким образом гомогенат в количестве 280 мл с концентрацией 400 млн в 1 мл иммуногенных микроконидий культуры гриба Microsporum canis N 473 и смешивают с 200 мл гомогената культуры гриба Trichophyton mentagrophytes N 135/1963 с концентрацией 600 млн в 1 мл гомогената. После этого смеси гомогенатов соединяют с 520 мл защитной среды состава как в примере 1, расфасовывают по 1,8-2,2 мл в пенициллиновые флаконы и лиофилизируют.

Полученную таким образом вакцину применили двукратно внутримышечно с целью профилактики для кошек и собак в дозе 0,8 - 1,2 мл - 43 головы, эффективность 98%; 138 головам собак и кошек в лечебной дозе 1,8 - 2,2 мл, эффективность - 100%, 9 взрослым медведям больным микроспорией - в дозе 2 мл. Все медведи выздоровели, шерсть отросла, заблестела, что особенно важно в аттракционах. На 227 больных дерматомикозами песцах и серебристо-черных лисах, из которых 7 песцов и 12 лис были больны одновременно трихофитией (Trichophyton mentagrophytes) и микроспорией (Microsporum canis), испытана лечебная доза 0,8 - 2,2 мл данной вакцины. Эффективность 100%.

Предложенная вакцина апробирована нами в условиях лаборатории и хозяйств с положительным результатом на поголовье собак 245, кошек 88, лошадей 57, пушных зверей и кроликов 1727, медведей 9.

Результаты испытаний показали, что вакцина является безвредной и создает напряженный иммунитет длительностью 1,5 - 2 года (срок наблюдения).

Вакцина найдет применение в зверохозяйствах, частных секторах, клубах собаководства, цирках, зоопарках для профилактики и лечения микроспории и трихофитии восприимчивых животных.

Указанный в ссылке 1 антиген из гриба Trichophyton mentagrophytes не соответствует названию гриба Trichophyton gypseum в указанном источнике. Это связано с новой номенклатурой гриба этого вида.

Источники информации
1. Авт. св. СССР N 835446, кл. A 61 K 39/00, 1978 г.

2. Авт. св. СССР N 1632031, кл. A 61 K 39/00, 1990 г.

Изобретение относится к ветеринарной микологии и касается вакцины против трихофитии и микроспории пушных зверей, кроликов, собак и кошек. Вакцина содержит антигены гриба Trichophyton mentagrophytes и гриба Microsporum canis, а также защитную среду в эффективных соотношениях. Вакцина обеспечивает создание в организме пушных зверей и других восприимчивых животных длительного иммунитета одновременно против трихофитии и микроспории.

Комплексная вакцина против трихофитии плотоядных животных, преимущественно пушных зверей, кроликов, собак и кошек, включающая антиген из штамма гриба Trichophyton mentagrophytes ВИЭВ 135 в защитной среде, содержащей сахарозу в количестве 10 - 40%, желатин в количестве 2,0 - 10,0%, вода остальное, отличающаяся тем, что дополнительно содержит антиген гриба культуры Microsporum canis ВИЭВ 473 в равных соотношениях с концентрацией микроконидий обоих штаммов 20 - 50 млн, в 1 мл защитной среды.