Изобретение относится к ветеринарной микологии, в частности к получению штамма Microsporum canis, используемого для контроля иммуногенности вакцин против дерматофитозов животных, в состав которых в качестве антигена входит гриб Microsporum canis.
Известен штамм гриба Microsporum canis 2084, используемый для контроля иммуногенности вакцин против микроспории животных. Данный штамм обладает характерными, присущими ему культурально-морфологическими, спорообразующими признаками, вирулентными свойствами (Авт. св. СССР N 1336559 51/3 С 12 N 1/14, A 61 K 39/00, 1986).
Недостатком данного штамма является снижение его вирулентных свойств, вследствие преобладания в его популяции слабовирулентных вариантов, неоднородности состава популяции по морфологическим признакам и признаку спорообразования, что приводит к необъективной оценке иммуногенных свойств вакцин против дерматофитозов животных.
Целью изобретения является получение штамма Microsporum canis, обладающего высоким уровнем спорообразования, однородным состав популяции, высокими вирулентными свойствами, обеспечивающими объективный контроль иммуногенной активности вакцин против дерматофитозов животных.
Штамм Microsporum canis N с.20 получен от больной микроспорией кошки методом повышения спорообразования,путем ступенчатого отбора колоний, стабильных по культурально-морфологическими признакам, депонирован в коллекции Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов и имеет регистрационный номер с.20.
Штамм Microsporum canis N с.20 характеризуется следующими признаками и свойствами.
Морфологические признаки. Мицелий не окрашен, ровный, ветвистый, септированный. Микроконидии овальные, грушевидные, располагающиеся на поверхности мицелия отдельно или гроздьями, размером 1,5 х 40 мкм. Макроконидии веретенообразные, с двуконтурной оболочкой, многокамерные, до 10 клеток, размером 15-25 х 50-100 мкм. Иногда наблюдаются терминальные, интеркалярные и латеральные хламидоспоры, размером 3-9 мкм в диаметре (обычно образуются в стареющих культурах или при неблагоприятных условиях культивирования).
Культуральные свойства. На сусло-агаре растет в виде колонии приподнятой в центре, иногда сильно складчатой радиально, ближе к растущему краю плоской, пушистой, с паутинистым растущим краем, белого цвета или с бледно кремовым оттенком, диаметр колонии 52-78 мм (20 дней роста).
На агаре Григораки растет в виде колонии приподнятой в центре, сильно складчатой радиально, по периферии почти голой со слабо развитым воздушным мицеллием, ровным растущим краем, белого цвета с кремовым оттенком, реверс не окрашен, вокруг колонии очень слабая зона осветления питательной среды, диаметр колонии 65-68 мм (20 дней роста).
На картофельном агаре растет в виде плоской колонии, сильно складчатой в центре и приподнятой за счет образования пушистого ватообразного белого мицеллия, по периферии мицелий паутинистый, воздушный мицелий развит слабо, более развит по радиусам колонии, в центре колония белого цвета, по периферии желтоватого, растущий край ровный, реверс бледно-желтый, диаметр колонии 63-65 мм (20 дней роста).
На агаре Чапека-Докса растет в виде прозрачной, паутинистой колонии, мицелий в основном субстратный, но в центре белый воздушный мицелий развит достаточно хорошо, бархатисто-пушистый, иногда идущий от центра по радиусам, растущий край паутинистый, реверс светло желтый, диаметр колонии 72-76 мм (20 дней роста).
Спорообразование: максимальный уровень спорогенеза на сусло-агаре 57,7-138,0 млн/см3.
Вирулентные свойства. При аппликации гомогенизированной культуры штамма Microsporum canis N с.20 вместе со средой выращивания (сусло-агар) на эпиллированный и скарифицированный участок кожи площадью 3 х 3 см в пояснично-крестцовой области у кроликов или морских свинок вызывает типичную клинику микроспории. Заражающая доза 0,2-0,5 см3млн/см3 микроконидий. На месте аппликации культуры на 5-8 день отмечается резко выраженная экссудативно-воспалительная реакция, поверхность кожи эрозируется с наслоением на ней толстых дерматофитозных корок. Самовыздоровление животных, в частности кроликов, наблюдается в течение 30-50 дней.
Субкультуры штамма гриба, выделенные после аппликации культуры M.canis N с.20 из дерматофитозного очага, по своим признакам и свойствам соответствует культурам, взятым для заражения.
Биохимические свойства. Штамм M.canis N с.20 активно образует комплекс экзопротеаз при выращивании на жидких питательных средах (Сабуро, Чапека с человеческими волосами). Фильтрат культуральной жидкости, содержащий экзопротеазы, разрушает эмульсионный слой фотопленки в течение 165-210 мин.
Штамм M. canis N с. 20 отличается высоким уровнем спорогенеза и вирулентностью, что при заражении ранее не иммунизированных и не болевших дерматофитозом (микроспорией) животных, воспроизводит у них дерматофитозный очаг с классическими признаками заболевания. Данный штамм используют для контроля иммуногенности вакцин против дерматофитозов животных, в состав которых входят штаммы M.canis.
Пример 1. Культуру штамма Microsporum canis N с.20 выращивают на сусло-агаре в пробирках при температуре 26-28oС в течение 15-25 дней. В пробирки с выросшей культурой заливают 5 см3 стерильной дистиллированной воды, с помощью микологического крючка готовят суспензию культуры штамма. Суспензию последовательно разводят до необходимой концентрации микроконидий, которая определяется путем подсчета с помощью камеры Горяева. При приготовлении суспензии с необходимой концентрацией микроконидий в нее добавляют сусло-агар перед аппликацией.
Испытание полученных концентраций (0,5; 0,25; 0,125 млн/см3) проводят на кроликах.
Кроликов заражают общепринятым методом накожно в пояснично-крестцовую область. Оценку вирулентности проводят по длительности переболевания животных, характеру и тяжести инфекционного процесса. Результаты заражения кроликов культурой штамма M.canis N с.20 представлены в таблице.
Пример 2. Культуру M.canis N с.20 готовят по примеру 1. Отбирают 12 кроликов массой 2,5-3,0 кг, одного возраста, одной породы, иммунизируют вакциной Микродерм в дозе 1 см3, содержащей 40±5 млн/см3 микроконидий, двукратно, с интервалом 10-14 дней. Спустя 40 дней после второй иммунизации 6 иммунизированных (из 12 кpоликов иммунизируют 6) и 6 кроликов контрольной группы (не иммунизированных) экспериментально заражают вирулентной культурой M.canis N с.20 в пояснично-крестцовую область в дозе 0,25 млн/см3 микроконидий.
Спустя 30 дней после экспериментального заражения, устанавливают отсутствие клинических признаков дерматофитоза у иммунизированных кроликов. У кроликов контрольной группы наблюдают типичную клинику микроспории: дерматофитозный очаг, обычно шелушащийся. Пик развития очага у этих кроликов отмечают на 20-25 день после заражения, с картиной резко выраженной экссудативно-воспалительной эрозии и формированием дерматофитозных корок.
Штамм Microsporum canis N с.20 высоко эффективен при испытании иммуногенности вакцин против дерматофитозов животных, в состав которых входит M.canis.
Использование культуры штамма M.canis N с.20 на предприятиях-изготовителях вакцин, в учреждениях, применяющих вакцины против дерматофитозов животных, в научно-исследовательских лабораториях позволит с большей достоверностью судить о качестве изготавливаемых биопрепаратов, с возможностью ее применения в качестве эталона при изучении вирулентности эпизоотических штаммов, выделенных из природных источников, в частности от больных дерматофитозом животных.
Использование: ветеринарная микология, штамм гриба Microstorium canis, контроль иммуногенности вакцины против дерматофитозов животных. Сущность изобретения: получен новый штамм Microsporium canis, обладающий высоким уровнем спорообразования, однородностью состава популяции, высокими вирулентными свойствами, обеспечивающими объективный контроль иммуногенной активности вакцин против дерматофитозов животных. Штамм Microsporium canis депонирован в коллекции микроорганизмов ВГНКИ ветпрепаратов под N с. 20 - ДЕП. При оценке иммуногенных свойств биопрепаратов контрольный штамм Microsporium canis ВГНКИ N с. 20-ДЕП дает более стабильные и достоверные результаты, может быть применен в качестве эталона при изучении вирулентности эпизоотических штаммов. 1 табл.
Штамм гриба Microsporium canis ВГНКИ N с. 20-ДЕП, используемый для контроля иммуногенности вакцин против дерматофитозов животных.
| Авторское свидетельство СССР N 1336559, кл | |||
| Способ гальванического снятия позолоты с серебряных изделий без заметного изменения их формы | 1923 |
|
SU12A1 |
