ВАКЦИНА "МИКРОДЕРМ" ПРОТИВ ДЕРМАТОФИТОЗОВ ЖИВОТНЫХ Российский патент 1997 года по МПК A61K39/00 C12N1/14 

Изобретение относится к ветеринарной микологии, в частности к вакцинам против дерматофитозов животных, преимущественно плотоядных и грызунов.

Известна также вакцина против дерматофитозов сельскохозяйственных животных, в частности крупного рогатого скота, а также кроликов, содержащая антиген из штамма гриба Trichophyton mentagrophytes ВГНКИ N 27, сахарозу, желатин, дистиллированную воду /см. патент РФ N 2013445, по заявке N 92015463, кл. C 12 N 1/14, A 61 K 39/00, 1992/.

Недостатком известных вакцин является то, что они предназначены, в основном, для профилактики отдельных инфекционных заболеваний, только трихофитин или микроспории, а при смешанном течении болезни они не обеспечивают надлежащего профилактического и терапевтического эффекта.

Известно, что представители плотоядных /кошки, собаки и др./ и грызуны /кролики, нутрии и др./ поражаются различными видами дерматофитов (Trichophyton и Microsporum), при этом у одного животного в дерматофитозном очаге или отдельных очагах при их множественности могут наблюдаться как Trichophyton mentagrophytes, так и Microsporium canis /см. Dvorak F.A. Otenaeek M. Natural relationahip of dermatophytos to the millen of their enistance. A review. Mykosen, 1982, v. 25, Neft 4, p, 197-209.

Целью изобретения является вакцина, обладающая высокой иммуногенной активностью, безвредностью и высоким защитным эффектом по отношению к T. mentagrophytes, также и по отношению к M. canis.

Указанная цель достигается тем, что она дополнительно содержит антиген из штамма гриба Microsporum canis ВГНКИ N 2293 с концентрацией 70-90 млн микроконидий/см³ при следующем соотношении компонентов /мас./:
Антиген из штамма гриба T. mentagrophytes ВГНКИ N 27 с концентрацией 70-90 млн. микроконидий/см³ 20-30
Антиген из штамма гриба M. canis ВГНКИ N 2293 с концентрацией 70-90 млн. микроконидий/см³ 20-30
сахароза 10-20
желатин 1,5-4,0
дистиллированная вода остальное.

Для изготовления вакцины используют штамм гриба Microsporum canis ВГНКИ N 2293.

Штамм гриба Microsporum canis выделен от собаки, больной дерматофитозом. Свойства штамма стабилизированы методом ступенчатой селекции по скорости роста, однородности состава популяции, по культурально-морфологическим и другим признакам.

Штамм M. canis N 2293 депонирован в коллекции Всероссийского Государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов и ему присвоен номер 2293.

Штамм M. canis N 2293 характеризуется следующими признаками и свойствами.

Морфологические признаки. Мицелий не окрашен, ровный, ветвистый, септированный, диаметром 2,0-2,5 мкм. Микроконидии многочисленные, чаще овальные, сферические, грушевидные, располагаются на поверхности мицелия гроздьями. Размер 1,5х4,0 мкм. Микроконидии с четко выраженной шиповатой двуконтурной оболочкой, веретенообразные, многоклеточные /до 12 клеток/. Размер 10-25х50-100 мкм. Относительно редко наблюдаются терминальные, интеркалярные, латеральные хламидоспоры. Размер 3-5 мкм в диаметре. Они обычно образуются в стареющих культурах или при неблагоприятных условиях культивирования.

Культуральные свойства. На сусло-агаре растет в виде плоской белой с кремовым оттенком, кремовой, бархатисто-пушистой, порошистой колонии, плоской по периферии /ближе к растущему краю/, в центре сильно складчатой, глубоко врастающей в агар, по ребрам складок наблюдается растрескивание, растущий край паутинистый, реверс от темно-желтого до коричневого, более темный в центре, диаметр колонии 82-86 мм /20-дневная культура/.

На агаре Григораки растет в виде белой с кремовым оттенком, радиально складчатой, бархатисто порошистой колонии, ближе к растущему краю паутинистой со слабо развитым воздушным мицелием, растущий край паутинистый, реверс на окрашен, диаметр колонии 72-80 мм /20-дневная культура/.

На агаре с пшеничной мукой растет в виде плоской, порошисто-мучнистой, кремового цвета колонии со средне развитым воздушным мицелием, растущий край паутинистый, реверс не просматривается, диаметр колонии 65-70 мм /20 дневная культура/.

На картофельном агаре растет в виде плоской белого цвета паутинистой колонии, с отдельными участками пушистого мицелия в центре и по периферии /мицелий в основном, субстратный/, растущий край паутинистый, реверс желтоватый, более яркий в центре, диаметр колонии 64-72 мм /20 дневная культура/.

На агаре Чапека-Докса растет в виде плоской белой полупрозрачной паутинистой колонии, в центре звездчатой, со слабо развитым воздушным мицелием, по периферии мицелий субстратный, реверс не окрашен по периферии, в центре желтый, диаметр колонии 76-78 мм/20 дневная культура/.

Спорообразование: максимальный уровень спорогенеза на сусло-агаре 66,8-146,8 млн/см³. Биохимические свойства. Скорость разрушения эмульсионного слоя фотопленки фильтратом культуральной жидкости после выращивания культуры штамма гриба 235-290 мин.

Вирулентные свойства. При аппликации культуры M. canis N 2293 в дозе 0,25 млн/см³ микроконидий на предварительно эпиллированный и скарифицированный участок кожи животных, ранее не болевших дерматофитозом /микроспория/ и не иммунизированных вакцинами против этого заболевания, на 5-10 сутки развивается специфический дерматофитозный очаг. Клиника экспериментального дерматофитоза старая, отмечается воспалительный процесс с разной степенью гиперемии кожи и образованием экссудата, образованием шелушащихся корочек или струпа.

Естественное переболевание животных продолжается в течение 15-40 дней, в зависимости от вида. Субкультуры штамма гриба, выделенные из экспериментального очага, по своим признакам и свойствам соответствуют исходной культуре, взятой для заражения.

Антигенные свойства. При внутримышечном введении суспензии культуры штамма в организме животных /кролики, нутрии, морские свинки/ образуются специфические агглютинины /РА/ в титрах 1:80-1:160.

Иммуногенные свойства. При двукратном внутримышечном введении вакцины из штамма M. canis ВГНКИ N 2293 кроликам в дозе 0,5-1,0 см³ у 95-100% животных спустя 20-30 дней наблюдается образование стойкого и напряженного иммунитета. Продолжительность два года /срок наблюдения/.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Для изготовления вакцины культуры T. mentagrophytes ВГНКИ N 27 и M, canis ВГГКИ N 2293 выращивают отдельно на сусло-агаре в пробирках в течение 12-20 дней. Затем из культур каждого штамма готовят суспензию спор и засевают скошенный сусло-агар в матрацах. Культуры выращивают в течение 12-20 дней при температуре 26-28^oC. После выращивания культуры штаммов грибов снимают с поверхности питательной среды специальными скребками с соблюдением строгой асептики и помещают в стерильные банки. Полученную массу гриба T. mentagrophytes ВНГКИ N 27 гомогенизируют в коллоидной мельнице или миксерах, добавляя стерильную воду до концентрации 80 млн микроконидий/см³. Аналогично гомогенизируют массу гриба M. canis ВГНКИ N 2293 смешивают в равном объеме. К полученной смеси гомогенатов грибов добавляют равное количество водного раствора сахарозы с желатином, которые тщательно перемешивают, расфасовывают в стирильные флаконы и лиофильно высушивают.

Полученная вакцина до лиофильного высушивания имеет следующий компонентный состав /мас./:
Антиген из штамма гриба T. mentagrophytes ВГНКИ N 27 с концентрацией 80 млн микроконидий/см³ 25,0
Антиген из штамма гриба M. canis ВГНКИ N с концентрацией 80 млн микроконидий/см³ 25,0
Сахароза 10,0
Желатин 1,5
Дистиллированная вода остальное.

Пример 2.

Вакцину против дерматофитозов животных готовят аналогично примеру 1, используя для ее приготовления смесь гомогенатов из штаммов T. mentagrophytes ВГНКИ N 27 и M. canis ВГНКИ N 2293 с концентрацией 70 млн микроконидий/см³, взятых в соотношении 1:1,5.

Полученная вакцина до лиофильного высушивания имеет следующий компонентный состав /мас./:
Антиген из штамма гриба T. mentagrophytes ВГНКИ N 27 с концентрацией 70 млн микроконидий/см³ 20,0
Антиген из штамма гриба M. canis ВГНКИ N 2293 с концентрацией 70 млн микроконидий/см³ 30,0
Сахароза 15,0
Желатин 2,8
Дистиллированная вода остальное.

Пример 3.

Вакцину против дерматофитозов животных готовят аналогично примеру 1, используя для ее приготовления смесь из штаммов T. mentagrophytes ВГНКИ N 27 и M. canis ВГНКИ N 2293 с концентрацией 90 млн микроконидий/см³, взятых в соотношении 1,5:1.

Полученная вакцина до лиофильного высушивания имеет следующий компонентный состав /мас./:
Антиген из штамма гриба T. mentagrophytes ВГНКИ N 27 с концентрацией 90 млн микроконидий/см³ 30,0
Антиген из штамма гриба M. canis ВГНКИ N 2293 с концентрацией 90 млн микроконидий/см³ 20,0
Сахароза 20,0
Желатин 4,0
Дистиллированная вода Остальное.

Готовая лиофилизированная вакцина представляет собой однородную сухую пористую массу в виде таблетки серо-бежевого цвета.

Вакцина сохраняет свои биологические свойства при условии хранения в сухом, темном помещении при температуре 2-10^oC. Срок годности вакцины Микродерм 12 месяцев.

Пример 4.

Испытывают 3 миркосерии вакцины Микродерм, изготовленной по примеру 1, по примеру 2, предварительно разведенную разбавителем в 2 раза /1 серия/, в 4 раза /2 серия/ и в 6 раз /3 серия/, содержащие в 1 прививочной дозе /1 см³/ соответственно 20 млн, 10 млн и 6,6 микроконидий/см³.

Кроликов породы шиншилла живой массой 265-3,0 кг вакцинируют внутримышечно в область бедра, двукратно с интервалом 8-10 дней в дозе 0,5 см³ /1, 2 серии/, и в дозе 1,0 см³ /1, 2 и 3 серии/, используя по 2 гол животных для испытания каждой дозы.

Через 30 дней после иммунизации кроликов заражают накожно вирулентной культурой грибов T. mentagrophytes ВГНКИ N 18 в лопаточной области, а вирулентной культурой гриба M. canis ВГНКИ N с. 20 в области крестца. Через 2 недели после заражения животных отмечают на месте аппликации аллергическую реакцию в виде гиперемии и образования слабых дерматофитозных корочек. При клиническом осмотре через 19 дней после заражения устанавливают: кролики, иммунизированные вакциной 1 серии в дозе 0,5 и 1 см³, не заболели, из кроликов, иммунизированных вакциной серии 2 в дозе 0,5 см³, 1 заболел от культуры гриба M. canis N с.20 с картиной слабого дерматофитоза /в месте локализации отмечают слабые чешуйки/, из кроликов, иммунизированных вакциной 3 серии 1, кролик заболел от культуры гриба M. canis N с.20 с картиной слабого дерматофитоза /в месте локализации отмечают тонкие корочки и рост волос под ними/. У контрольных кроликов, иммунизация которых не проводилась, на месте заражены обеими культурами отмечают гиперемию, шелушащиеся корочки серого цвета, под корочками гнойный экссудат.

Таким образом, для кроликов оптимальной иммунизирующей дозой, обеспечивающей надежный иммунитет, является доза 1 см³ с концентрацией 10 млн микроконидий/см³.

Пример 5. Проводят клинический осмотр пораженных участков кожи у 2 собак и 11 кошек. Пораженные участки кожи животных подвергают облучению люминесцентной лампой с фильтром Вуда /ОЛД 40/, от всех животных берут пробы патологического материала для проведения микологических исследований. У 12 животных с поражениями кожного покрова устанавливают характерное для грибкового заболевания изумрудно-зеленое свечение, а из патологического материала при микологическом исследовании выделяют культуры гриба M. canis. Установлен диагноз микроспория.

Больных и подозреваемых животных прививают новой вакциной Микродерм против дерматофитозов животных по примеру 2 внутрмышечно в область бедра в дозе от 0,5 до 1,0 см³ в зависимости от возраста и веса животных, дважды с интервалом 7-10 дней.

Все животные выздоровели. Терапевтический эффект наступил на 15-25 сутки после повторного введения вакцины. На месте введения вакцины реакции у животных отсутствовали, микотический очаг разрыхлялся, корочки отделились, под ними отмечен рост нового волоса. Результаты повторного микологического исследования были отрицательными.

Пример 6.

Вакцину Микродерм против дерматофитозов животных применяют 25 нутриям с профилактической целью, 25 больным дерматофитозом нутриям с профилактической целью. Вакцину используют по примеру 3, ввода ее внутримышечно в область дебра, двукратно с интервалом 7-12 дней в дозе 1,0 см³.

Вакцина оказала высокий лечебно-профилактический эффект: все животные, которым была введена вакцина с профилактической целью, не заболели, а у больных через неделю после второй вакцинации начал расти волос и практически через 40 дней после нее они выздоровели и покрылись новым здоровым волосом.

Вакцина Микродерм высокоэффективна как против трихофитии, так и микроспории плотоядных и грызунов.

Вакцину Микродерм животным вводят внутримышечно с интервалом 7-12 дней: с профилактической целью в дозах от 0,5 до 2,0 см³ в зависимости о т возраста и вида животных, а с терапевтической от 1,0 до 2,0 см³.

Использование вакцины Микродерм в ветеринарной практике позволит повысить эффективность мероприятия по борьбе с дерматофитозами плотоядных и грызунов.

Использование: биотехнология, ветеринарная микология, вакцина против дерматофитозов животных. Сущность изобретения: вакцина содержит антиген из штамма Microsporum camS ВГНКИ N 2293, и антиген из штамма Trichophyton mentagrophytes ВГНКИ N 27 и сахарозо-желатиновый стабилизатор в эффективных соотношениях. Вакцина обладает высокой иммуногенной активностью, безвредностью и высоким защитным эффектом как по отношению к Microsporum canis, так и по отношению к Trichophyton mentagrophytes.

Вакцина против дерматофитозов животных, преимущественно плотоядных и грызунов, содержащая антиген из штамма гриба Trichophyton mentagrophytes ВГНКИ N 27, сахарозу, желатин и дистиллированную воду, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит антиген из штамма гриба Microsporum canis ВГНКИ N 2293 с концентрацией 70 90 млн микроконидий/ см³ при следующем соотношении компонентов, мас.

Антиген из штамма гриба Trichophyton mentagrophytes ВГНКИ N 27 с концентрацией 70 90 млн микроконидий /см³ 20,0 30,0
Антиген из штамма гриба Microsporum canis ВГНКИ N 2293 с концентрацией 70 90 млн микронидий/ см³ 20,0 30,0
Сахароза 10,0 20,0
Желатин 1,5 4,0
Дистиллированная вода Остальное2