ВЫСШИЕ N-АЦИЛ-N, N -ТРИФЕНИЛ- β -АМИНОИЗОБУТИРИЛАМИДИНИЙ ХЛОРИДЫ, ОБЛАДАЮЩИЕ ПРОТИВОВИРУСНОЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 1994 года по МПК C07C257/18 A61K31/155 

Изобретение относится к области органической химии, конкретно к производным β -аминоизомасляной кислоты - высшим N-ацил-N,N¹,N²- трифенил- β -аминоизобутириламидиний хлоридам (гидрохлоридам высших N-ацил-N, N¹, N²-трифенил- β -аминоизобутириламидинов) общей ф-лы I, обладающим противовирусной активностью в отношении вируса гриппа А(Н3N2).

P-CH (I) (I)
Заявляемые соединения формулы (I) могут найти применение в медицине в качестве антивирусного препарата, а также в биологии для изучения механизма противовирусного действия.

Соединения формулы (I) и их биологические свойства в литературе не описаны.

Известен лекарственный препарат ремантадин, применяющийся в медицинской практике для лечения гриппа [1].

Известно, что ряд природных ацилированных по β -аминогруппе β -аланинамидинов, таких как амидиномицин (II) [2,3]
и ноформицин (III) [2,4,5],
H₂N NHH₂ обладает противовирусной активностью в отношении вирусов парагриппа тип 3, гриппа свиней, полиомиелита SК, человеческого риновируса N 2, риновируса лошадей, некоторых причинных вирусов животных. Однако информации об антивирусной активности соединений (II), (III) в отношении вирусов гриппа человека А(Н3N2) не имеется.

Наиболее близким по структуре к заявляемым соединениям (I) являются N-стеароил- β -аланинамидин (IV) [6]
C₁₇H NCHH₂ и N-бензоил- β-аланинамидиний хлорид (V) [7].

Ph NHCH₂CH Сравнительно близким по структуре к заявляемым веществам (I) является и N-бензоил-N,N¹,N²-трифенилглицинамидиний хлорид (VI) [8] .

CH₂C
Однако об антивирусной активности соединений (IV)-(VI) сведений не имеется.

Задачей изобретения является синтез производных амидинов β -аминокислот, обладающих высокой антивирусной активностью в отношении вирусов гриппа А(Н3N2).

Поставленная задача достигается высшими N-ацил-N,N¹,N²-трифенил- β -аминоизобутириламидиний хлоридами формулы (I), которые обладают эффективным противовирусным действием.

Заявляемые соединения формулы (I) получают ацилированием N¹,N²- дифенил- β-N-фениламиноизобутириламидина хлорангидридами высших карбоновых кислот.

П р и м е р 1. N-пеларгоноил-N,N¹,N²-трифенил- β -аминоизобутириламидиний хлорид (Iа, R=C₈H₁₇).

К раствору 2,0 г (0,006 моль) N¹,N²-дифенил- β -N- фениламиноизобутириламидина в 30 мл безводного серного эфира при перемешивании прибавляют 1,07 г (0,006 моля) пеларгоноилхлорида в 20 мл безводного эфира. На следующий день отфильтровывают осадок аналитически чистого продукта, выход - 2,5 г (81% ), т. пл. 159-160^оС. ИК-спектр (в вазелиновом масле), ν, см^-1: 1496, 1576, 1597 (С=С) аром., 1615 (N N) , 1661(С=О), 2400-2800 ( -Н). УФ-спектр (в МеОН), λ_макс., нм (lg ε ):263,5 (4,20). Спектр ПМР (CDCl₃), δ, м. д. (J, Гц): 0,82 т (3Н, СН₂, 5); 1,13 ш.с. (12Н, (СН₂)₆); 1,47 д (3Н, СН, 6); 1,93 кв (2Н, СН₂С(О),7) 3,33-3,97 м (2Н, СН₂СН); 4,58-5,23 м (1Н, СН), 6,77 ш. с. (10Н, 2Рh); 7,25 ш.с. (5Н, Ph); 12,13 ш.с. (2Н, 2H). Найдено,%: С 73,98; Н 8,07; Сl 7,28; N 8,44.

С₃₁Н₄₀ClN₃O.

Вычислено, %: С 73,59; Н 7,91; Сl 7,02; N 8,31.

П р и м е р 2. N-ундеканоил-N,N¹,N²-трифенил- β - аминоизобутириламидиний хлорид (Iб, R=С₁₀Н₂₁) получают аналогично примеру 1 из 2,1 г (0,0063 моль) N¹,N²-дифенил- β -N- фениламиноизобутириламидина и 1,3 г (0,0063 моль) ундеканоилхлорида, выход 94%, т.пл. 166-168^o С.

ИК-спектр (в вазелиновом масле), ν, см^-1: 1497, 1574, 1597 (С=С) аром., 1613 (N N), 1662 (С=О), 2400-2800 (-Н). УФ-спектр (в МеОН), λ_макс., нм (lg ε):263,5 (4,19).

Спектр ПМР (CDCl₃) δ, м.д. ( J, Гц): 0,84 т (3Н, СН₂, 5); 1,15 ш.с. (16Н, (СН₂)₈); 1,48д (3Н, СН, 6); 1,92 кв (2Н, СН₂С(О),7); 3,33-3,95 м (2Н, СН₂СН); 4,58-5,23 м (1Н, СН); 6,72 ш.с. (10Н, 2Ph); 7,25 ш.с (5Н, Ph); 12,15 ш.с. (2Н, 2Н).

Найдено, %: С 74,23; Н 8,47; Cl 7,01; N 8,28.

С₃₃Н₄₄ClN₃O.

Вычислено, %: С 74,23; Н 8,25; Cl 6,65; N 7,87.

Заявляемые соединения (I) представляют собой мелкокристаллические вещества, малорастворимые в воде, хорошо растворимые в спиртах, диполярных апротонных растворителях, хлороформе.

Изучение антивирусной активности
Исследование антивирусных свойств соединений проводили по способности подавлять репродукцию вируса гриппа А/Ленинград 34/72 (Н3N2). Эксперименты проводили на переживающих фрагментах хорионаллантоисной оболочки куриного эмбриона (ХАО КЭ).

Для определения токсичности соединений для клеток ХАО навески последовательно разводили с коэффициентом -2 в растворе Хенкса, разливали по 0,5 мл в лунки пластиковой панели и вносили фрагменты ХАО. Состояние клеток определяли через 48 ч инкубации при 37^оС. Минимальной токсической дозой (МТД) считали минимальную концентрацию, вызывающую гибель клеток в трех и более лунках.

В работе использовали аллантоисный вирус, прошедший пассаж на 10-11-суточных куриных эмбрионах, титр вируса на куриных эмбрионах составил 10^-8, на клетках ХАО -10^-6, титр гемаглютинина вируса равнялся 1:2048.

Клетки заражали 1, 10 и 100 дозами вируса. Затем вносили различные разведения соединений, меньшие МТД, для клеток ХАО. Через 48 ч инкубации при 37^оС определяли наличие жизнеспособных клеток и титр вируса в культуральной среде (раствор Хенкса) реакцией гемаглютинации с 1%-ной взвесью эритроцитов кур.

Проведенные исследования показали, что соединение Iа обладало минимальной токсичностью для клеток ХАО, равной 125 мкг/мл. В концентрации 0,487 мкг/мл задерживало репродукцию 1 дозы вируса гриппа, при заражении 100 дозами этот эффект наблюдался при внесении в среду 0,975 мкг/мл. Химиотерапевтический индекс соединения равнялся 256 (таблица). МТД для клеток ХАО соединения Iб равнялась 500 мкг/мл. Соединение задерживало размножение вируса при заражении клеток 100 дозами в концентрации 3,9 мкг/мл, при заражении 1 дозой в концентрации 0,975 мкг/мл (таблица). В качестве эталонного объекта использовали препарат ремантадин, используемый в терапии и профилактике гриппозной инфекции. МТД ремантадина для клеток ХАО равнялась 250 мкг/мл. Содержание Iб было в 2 раза менее токсичным для клеток и проявляло выраженный эффект, в 2 раза превышающий активность базового препарата. Антивирусная активность соединения Iа была аналогичной активности ремантадина (таблица).

Использование: в медицине, в качестве противовирусного средства. Сущность изобретения - продукты ф-лы PhN(C(R)=O)CH₂C(CH₃)H-CNHPh(+NHPh)Cl^- . БФ C₃₁H₄₀ClN₃₀ ; т.пл. 159-160°С. БФ C₃₃H₄₄ClN₃₀ ; т.пл. 166-168°С. Реагент 1: ацилхлориды. Реагент 2: N, N¹ , N² -трифенил- β - амминоизобутириламидин. Условия реакции: безводный серный эфир. 1 табл.

Высшие N -ацил- N, N¹, N² - трифенил- β -аминоизобутириламидиний хлориды общей формулы
PCH
где R = C₈H₁₇, C₁₀H₂₁,
обладающие противовирусной активностью.