1-(ГИДРОКСИМЕТИЛ)-2-ГИДРОКСИ-2-(4-НИТРОФЕНИЛ)ЭТИЛАММОНИЙ 2-ГИДРОКСИБЕНЗОАТ, ОБЛАДАЮЩИЙ АНТИСТРЕССОРНОЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 1995 года по МПК C07C215/40 A61K31/205 

Изобретение относится к новому химическому соединению, а именно к 1-(гидроксиметил)-2-гидрокси-2-(4-нитрофенил) этиламмоний 2-гидроксибензоату формулы
2-HO-C₆H₄COOH₃CH(CH₂OH)CHOH(C₆H₄-NO₂-4) , обладающему защитным действием при стрессовых состояниях.

Указанные свойства предполагают возможность его применения в медицине, в частности, при экстремальных состояниях организма.

Стрессорные повреждения могут потенцировать различного вида заболевания, такие как, сердечно-сосудистые патологии, опухолевые процессы, язвенная болезнь и др., что указывает на актуальность разработки препаратов для лечения и профилактики стрессорных повреждений.

Известен препарат Д-ала²лей⁵арг⁶-энкефалин, обладающий антистрессорным эффектом в дозе 0,1 мг/кг/Лишманов Ю.Б., Амосова Е.М., Слепушкин В.Д., Яременко К.В.//Бюлл. эксп. биол. и мед. 1984, N 8.C.18-21/. Несмотря на малую дозу, в которой активен данный препарат, следует отметить его сложный состав, трудоемкость синтеза и довольно низкую эффективность, что указывает на необходимость поиска эффективных фармакологических антистрессорных средств.

Перспективным путем создания таких средств является синтез и исследование в ряду гидроксиалкиламмониевых производных ароматических кислот.

Наиболее близким по структуре к заявляемому соединению является водорастворимая натриевая соль салициловой кислоты-препарат противовоспалительного, болеутоляющего, жаропонижающего действия /Машковский М.Д. М.: Медицина. 1978. С. 176/. Антистрессорное действие для нее не известно.

Следует также подчеркнуть, что в настоящее время развивается подход к получению водорастворимых алканоламмониевых производных ароматических кислот, что позволяет сделать их пригодными для внутривенного введения и не только исключить побочные эффекты, связанные с применением свободных кислот, но и повысить фармакологическую активность препарата и обеспечить появление у него нового вида биологической активности.

В отличие от самой салициловой кислоты водорастворимые алканоламмониевые соли ее могут иметь новые области применения, которые обусловлены биологическим действием алканоламина.

Антистрессорное действие этих препаратов не известно.

Целью изобретения является поиск препарата в ряду производных салициловой кислоты, обладающих защитным действием при стрессовых состояниях организма.

Поставленная цель достигается новым соединением, обладающим антистрессорным действием, -1-(гидроксиметил)-2-гидрокси-2-(4-нитрофенил)-этиламмоний 2-гидроксибензоатом (ВМ-2-90).

Заявляемое соединение получено взаимодействием салициловой кислоты с 1,3-дигидрокси-3-(4-нитрофенил)пропил-2-ами- ном (d-форма) в среде ацетона, низшего спирта (метанол, этанол, изопропанол) при 60-80^оС, соотношении реагентов 1:1 в течение 10-15 мин по схеме
+
Состав и строение синтезированного соединения доказаны данными ИК-спектроскопии, элементным анализом.

Соединение представляет собой белое или слегка окрашенное в бежевый цвет кристаллическое вещество без запаха, хорошо растворяется в воде и спирте, не растворяется в углеводородах. Водные растворы препарата устойчивы, но при воздействии на них неорганических кислот выделяется исходная кислота.

Способ получения предлагаемого соединения прост в исполнении, не требует применения катализаторов, давления, дорогостоящих растворителей, выделение целевого продукта осуществляется известными приемами с высокими выходами. Способ основан на крупнотоннажном промышленном сырье и может быть легко осуществлен в промышленном масштабе.

Исследуемое вещество практически нетоксично для теплокровных, оно обладает более высоким антистрессорным эффектом чем известный препарат Д-ала²лей⁵арг⁶-энкефалин, что свидетельствует о достижении поставленной цели.

П р и м е р 1. Синтез 1-(гидроксиметил)-2-гидрокси-2-(4-нитрофенил)этиламмоний 2-гидроксибензоата.

а) 13,8 г салициловой кислоты растворяют в 100 мл сухого эфира и к раствору приливают взвесь 21,2 г 1,3-дигидрокси-3-(4-нитрофенил)пропил-2-амина в 100 мл сухого этанола. Взвесь нагревают до кипения до полного растворения продукта в течение 10 мин, раствор охлаждают при 0- -5^оС 12-20 ч, выпавший в осадок продукт отфильтровывают, сушат на воздухе. По- лучают 25,2 г (72%) целевого продукта, т.пл. 145-149^оС.

Найдено, %: C 55,15; H 4,98; N 8,15.

C₁₆H₁₈N₂O₇.

Вычислено, %: C 54,86; H 5,17; N 7,99.

ИК-спектр: 1600(COO), 3400(OH) см.

б) Аналогично при растворении амина в 150 мл изопропилового спирта и нагревании в течение 10 мин получают 26,2 г (75%) целевого продукта.

в) Аналогично при смешивании раствора кислоты в 100 мл сухого метанола и взвеси амина в 50 мл метанола получают 26,2 г (75%) целевого продукта.

П р и м е р 2. Исследование токсичности заявляемого соединения.

Изучение токсичности заявляемого соединения проводили на беспородных белых мышах обоего пола, параметры острой токсичности определяли по методу Кербера при внутрибрюшинном введении. Среднесмертельная доза ЛД₅₀ составила для заявляемого соединения 700 мг/кг. В соответствии с классификацией К.К. Сидорова исследуемое вещество можно отнести к нетоксичным для теплокровных животных.

При воздействии его на кожные покровы и слизистую оболочку глаз изменений не обнаружено.

П р и м е р 2. Исследование антистрессорного эффекта препарата ВМ-2-90.

Исследование антистрессорного эффекта заявляемого соединения проводили на крысах самцах массой 160-200 г в сравнении с Д-ала²лей⁵арг⁶-энекефалином. За 24 ч до эксперимента животных лишали корма при сохранении свободного доступа к воде. Стресс моделировали путем подвешивания животных на 22 ч за шейную складку при помощи нескольких зажимов, не повреждающих кожных покровов. Состояние стресса в данной модели достигается за счет действия болевого фактора, ограничения свободы передвижения и нарушения режима питания. Приведенный способ стрессирования используется как скрининговый метод оценки антистрессорного действия различных препаратов (Добряков Ю.И. Стресс и адаптация, Кишинев. 1978. С. 172).

Все животные были разделены на группы: интактные крысы, стресс-контроль, животные, получавшие перед стрессированием препарат ВМ-2-90 в дозах 20, 40 или 80 мг/кг; в качестве препарата сравнения используется Д-ала²лей⁵арг⁶-энкефалин, обладающий выраженным антистрессорным эффектом в дозе 0,1 мг/кг.

В конце опыта животных забивали путем декапитации, определяли массу надпочечников, тимуса, селезенки и количество изъязвлений в слизистой желудка (триада Г.Селье), в крови определяли содержание кортикостерона.

Определение антистрессорной активности препарата проводили по 6-бальной шкале оценки стресса, предложенной Ю.И.Добряковым. Считали, что препарат обладает антистрессорной активностью, если разница в сумме баллов между стресс-контролем и опытными группами была больше или равна 2. Для подсчета баллов интегральной оценки стрессированности организма значения средней массы отдельных органов в группах пересчитывали на 100 г массы тела крысы, а изменения показателей выражали в процентах к норме.

Содержание иммунно-реактивного кортикостерона в плазме крови крыс определяли с использованием наборов для радиоиммунного анализа (В/O Изотоп). Обсчет радиоактивности проводили на бета-сцинтилляционном счетчике "Mark-III" (США).

Статистическую обработку результатов проводили с помощью критерия Стьюдента. Полученные данные представлены в таблице.

Моделирование стресса сопровождалось развитием характерных проявлений: масса тимуса и селезенки уменьшалась соответственно на 30 и 44%, масса надпочечников увеличивалась на 51% , отмечалось выраженное изъязвление слизистой оболочки желудка. В плазме крови крыс данной группы уровень иммунно-реактивного кортикостерона увеличивался в 1,9 раза по сравнению с группой интактных животных.

Введение перед стрессом Д-ала²лей⁵арг⁶-энкефалина сопровождалось менее выраженным увеличением массы надпочечников (на 8%) и снижением массы тимуса (на 12% ) по сравнению с группой стресс-контроля, однако отличия от интактных животных сохранялись. Сравнение суммы баллов при интегральной оценке стрессированности организма в группе стресс-контроля и в группе животных, получавших этот препарат аналог по действию показало различие в сумме баллов, равное 4.

Предварительное введение препарата ВМ-2-90 в дозах 20, 40 или 80 мг/кг указывало на наличие у него антистрессорного эффекта. Так, заявляемое соединение в дозе 20 мг/кг способствовало сохранению нормальных параметров тимуса и селезенки при последующем стрессе. Количество язв в слизистой желудка было значительно меньшим, чем в стресс-контроле. Индекс стрессированности при этом, несмотря на увеличение массы надпочечников на 47% по сравнению с исходными данными, составил 8 баллов. В дозе 40 мг/кг препарат ВМ-2-90 также оказывал антистрессорный эффект: масса надпочечников была достоверно ниже значений в группе стресс-контроля и практически не отличалась от исходных цифр, количество язв в слизистой желудка было достоверно меньшим, чем в контрольной группе. Сумма баллов интегральной оценки стрессированности организма в этом случае, несмотря на достоверное снижение массы тимуса и селезенки составила 11 баллов, что на 5 баллов ниже стресс-контроля. Антистрессорный эффект препарата ВМ-2-90 в дозе 80 мг/кг был меньшим, по сравнению с предыдущими дозировками: масса тимуса, селезенки и надпочечников не отличались от соответствующих значений в группе стресс-контроля, однако, значительно менее выраженным было изъязвление слизистой желудка. Сумма баллов интегральной оценки стрессированности при этом составила 13. Подъем кортикостерона в крови при этом был также меньшим, чем в стресс-контроле.

Таким образом, результаты проведенных исследований показали, что заявляемый препарат ВМ-2-90 в дозе 20 мг/кг обладает выраженным антистрессорным эффектом; сумма баллов интегральной оценки стрессированности при этом равна 8 баллов, тогда как применение Д-ала²лей⁵арг⁶-энкефалина в дозе 0,1 мг/кг перед 22-часовым стрессом было менее эффективным и сумма баллов интегральной оценки стрессированности организма при этом была равна 10. Из приведенного следует, что заявляемый препарат, превосходящий по антистрессорной активности Д-ала²лей⁵арг⁶-энкефалин, может найти клиническое применение при лечении и профилактике состояний, связанных с психоэмоциональным напряжением организма.

Таким образом, учитывая активность препарата, его доступность и др. можно считать заявляемое соединение перспективным для создания лекарственного средства для лечения и профилактики стрессорных состояний организма.

Использование: в качестве биологически активного соединения, обладающего антистрессорной активностью. Сущность изобретения: продукт - 1-(гидроксиметил)-2-гидрокси-2-(4-нитрофенил)этиламмоний 2-гидроксибензолат, 2-OCHC₆H₄COO^-· NH₃CH(CH₂OH)CHOH(4-NO₂C₆H₄), БФ C₁₆H₁₈N₂O₇ , выход 72 - 75% т. пл. 145 - 149°С. Реагент 1; салициловая кислота. Реагент 2: 1,3-дигидрокси-3-(4-нитрофенил)пропил-2-амин. Условия реакции: в среде ацетона, низшего спирта при 60 - 80°С, соотношении реагентов 1 : 1 в течение 10 - 15 мин. 1 табл.

1-(ГИДРОКСИМЕТИЛ)-2-ГИДРОКСИ-2-(4-НИТРОФЕНИЛ)ЭТИЛАММОНИЙ 2-ГИДРОКСИБЕНЗОАТ, ОБЛАДАЮЩИЙ АНТИСТРЕССОРНОЙ АКТИВНОСТЬЮ.

1-(Гидроксиметил)-2-гидрокси-2-(4-нитрофенил)этиламмоний 2-гидроксибензоат формулы
2-HOC₆H₄COO^- · ⁺NH₃CH(CH₂OH)CHOH (4-NO₂C₆H₄),
обладающий антистрессорной активностью.