1-(ГИДРОКСИМЕТИЛ)-2-ГИДРОКСИ-2-(4-НИТРОФЕНИЛ)-ЭТИЛАММОНИЙ 2-ФОРМИЛФЕНОКСИАЦЕТАТ, ОБЛАДАЮЩИЙ АНТИСТРЕССОРНОЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 1995 года по МПК A61K31/205 C07C215/40 

Изобретение относится к новому химическому соединению, а именно к 1-(гидроксиметил)-2-гидрокси-2-(4-нитрофенил)этиламмоний 2-формилфеноксиацетату формулы
2-OCH-C₆H₄OCH₂COO^-˙+NHCH(CH₂OH)CHOH(C₆H₄-NO₂-4). обладающему защитным действием при стрессовых состояниях.

Указанные свойства предполагают возможность его применения в медицине, в частности, при экстремальных состояниях организма.

Стрессорные повреждения могут потенцировать различного вида заболевания, такие как сердечно-сосудистые патологии, опухолевые процессы, язвенная болезнь и др., что указывает на актуальность разработки препаратов для лечения и профилактики стрессорных повреждений.

Известен препарат Д-ала²лей⁵арг⁶-энкефалин, обладающий антистрессорым эффектом в дозе 0,1 мг/кг Лишманов Ю.Б., Амосова Е.М., Слепушки В.Д., Яременко К. В.//Бюлл. эксп.биол. и мед. 1984. N 8.С. 18-21/. Несмотря на малую дозу, в которой активен данный препарат, следует отметить его сложный состав, трудоемкость синтеза и довольно низкую эффективность, что указывает на необходимость поиска эффективных фармакологических антистрессорных средств.

Перспективным путем создания таких средств является синтез и исследование в ряду гидроксиалкиламмониевых производных ароксиуксусных кислот.

Наиболее близкими по структуре к заявляемому соединению являются водорастворимые трис-(2-гидроксиэтил)аммониевые соли замещенных в ароматическом кольце ароксиуксусных кислот - вещества, обладающие противоопухолевой активностью (Софьина З.П., Воронков М.Г. Дьяков В.М. и др.-ХФЖ. 1978, N, С. 74-77).

Антистрессорое действие для них не известно.

Следует подчеркнуть, что в настоящее время развивается подход к получению алканоламмониевых производных различных ароксиуксусных, ароматических и др. органилалканкарбоновых кислот, что позволяет сделать их пригодными для внутривенного введения и не только исключить побочные эффекты, связанные с применением свободных кислот, но и повысить фармакологическую активность препаратов и обеспечить появление у них нового вида биологической активности.

Целью изобретения является поиск препаратов в ряду производных ароксиуксусных кислот, обладающих защитным действием при стрессовых состояниях организма.

Поставленная цель достигается новым соединением, обладающим антистрессорным действием -1-(гидроксиметил)-2-гидрокси-2-(4-нитрофенил)-этиламмоний 2-формилфеоксиацетатом (ВМ-1-90).

Заявляемое соединение получено взаимодействием 2-формилфеоксиуксусной кислоты с d-формой 1,3-дигидрокси-1-(4-нитрофенил)пропил-2-амином в среде низшего спирта (метанол, этанол, изопропанол) при температуре 60-80^оС в соотношении реагентов 1:1 в течение 10-15 мин по схеме
2-ОСН-С₆Н₄ОСН₂СООН+ +NH₂CH(CH₂OH)СНОН(С₆Н₄-NO₂-4)->
2-ОСН-С₆Н₄ОСН₂СОО˙ ⁺NH₃СН(СН₂ОН)СНОH(С₆Н₄-NO₂-4)
Состав и строение синтезированного соединения доказаны данными ИК спектроскопии, элементным анализом.

Соединение представляет собой белое кристаллическое вещество без запаха, растворяется в воде в спирте, диметилсульфоксиде, не растворяется в углеводородах. Водные растворы препарата устойчивы, но при воздействии на них неорганических кислот выделяется исходная кислота.

Способ получения предлагаемого соединения прост в исполнении, не требует применения катализаторов, давления, дорогостоящих растворителей, выделение целевого продукта осуществляется известными приемами с высокими выходами. Способ основан на доступной 2-формилфеноксиуксусной кислоте и крупнотоннажном промышленном сырье, использующемся при производстве антибиотиков левомицитина и синтомицинамина и являющимся отходом производства последнего - 1,3-дигидрокси-1-(4-нитрофенил)пропил-2-амине, и может быть легко осуществлен в промышленном масштабе.

Исследуемое вещество практически нетоксично для теплокровных, оно обладает более высоким антистрессорным эффектом, чем известный препарат Д-ала²лей⁵арг⁶-экефалин, что свидетельствует о достижении поставленной цели.

П р и м е р 1. Синтез 1-(гидроксиметил)-2-гидрокси-2-(4-нитрофенил)этиламмоний 2-формилфеноксиацетата (ВМ-1-90).

а) 18,0 г 2-формилфеноксиуксусной кислоты растворяют в 100 мл этилового спирта при нагревании и к раствору прибавляют взвесь 21,2 г 1,3-дигидрокси-1-(4-нитрофенилпропил-2-амина(d-форма) в 50 мл спирта. Смесь нагревают до кипения (70^оС) и выдерживают до полного растворения продукта. Затем раствор охлаждают, выпавший в осадок целевой продукт отфильтровывают, сушат. Выход 31,2 г (80%), т.пл. 200-202^оС.

Найдено, %: С 62,67; Н 6,28; N 7,56.

С₁₈Н₂₀N₂О₈.

Вычислено, %: С 55,10; Н 5,14; N 7,14.

ИК спектр: 1600 (СОО), 3400 (ОН) см^-1.

б) Аналогично при нагревании кислоты с эквимольным количеством амина в 50 мл изопропанола при 80^оС в течение 10 мин получают 12 г (80%) целевого продукта.

в) Аналогично при смешивании раствора кислоты в 50 мл сухого метанола и амина и нагревании при 60^оС получают целевой продукт с выходом 80%.

г) Аналогичо при нагревании раствора кислоты с амином в изопропаноле при 80^оС получают целевой продукт с выходом 81%.

П р и м е р 2. Исследование токсичности заявляемого соединения.

Изучение токсичности заявляемого соединения проводили на беспородных белых мышах обоего пола, параметры острой токсичности определяли по методу Кербера при внутрибрюшинном введении. Среднесмертельная доза LD₅₀ составила для заявляемого соединения 700 г/кг. В соответствии с классификацией К.К. Сидорова исследуемое вещество можно отнести к нетоксичным для теплокровных животных (Измеров Н.Ф., Саноцкий И.В., Сидоров К.К. Параметры токсиметрии промышленных ядов при однократном воздействии. М. 1977).

При воздействии его на кожные покровы и слизистую оболочку глаз изменений не обнаружено.

П р и м е р 3. Исследование антистрессорного эффекта препарата ВМ-1-90.

Исследование антистрессорого эффекта заявляемого соединения проводили на крысах самцах массой 160-200 г в сравнении с Д-ала²лей⁵арг⁶-энкефалином. За 24 ч до эксперимента животных лишали корма при сохранении свободного доступа к воде. Стресс моделировали путем подвешивания животных на 22 ч за шейную складку при помощи нескольких зажимов, не повреждающих кожных покровов. Состояние стресса в данной модели достигается за счет действия болевого фактора, ограничения свободы передвижения и нарушения режима питания. Приведенный способ стрессирования используется как скрининговый метод оценки антистрессорного действия различных препаратов (Добряков Ю.И. Стресс и адаптация. Кишинев. 1978. С. 172).

Все животные были разделены на группы: интактные крысы, стрес-контроль, животные, получавшие перед стрессироваинем препарат ВМ-1-90 в дозах 20, 40 или 80 мг/кг; в качестве препарата сравнения используется Д-ала²лей⁵арг⁶-энкефалин, обладающий выраженным антистрессорным эффектом в дозе 0,1 мг/кг.

В конце опыта животных забивали путем декапитации, определяли массу надпочечников, тимуса, селезенки и количество изъявлений в слизистой желудка (триада Г. Селье), в крови определяли содержание кортикостерона.

Определение антистрессорной активности препарата проводили по 6-бальной шкале оценки стресса, предложенной Добряковым Ю.И. Считали, что препарат обладает антистрессорной активностью, если разница в сумме баллов между сресс-контролем и опытными группами была больше или равна 2. Для подсчета баллов интегральной оценки стрессированности организма значения средней массы отдельных органов в группах пересчитывали на 100 г массы тела крысы, а из менения показателей выражали в процентах к норме.

Содержание иммунореактивного кортикостерона в плазме крови крыс определяли с использованием наборов для радиоимунного анализа (В/0 Изотоп). Обсчет радиоактивности проводили на бета-сцитилляционном счетчике "Mark-III" (США).

Статистическую обработку результатов проводили с помощью критерия Стьюдента. Полученные данные представлены в таблице.

Моделирование стресса сопровождалось развитием характерных проявлений: масса тимуса и селезенки уменьшалась соответственно на 30 и 49%, масса надпочечников увеличивалась на 45% , отмечалось выраженное изъявление слизистой оболочки желудка. В плазме крови крыс данной группы уровень иммуннореактивного кортикостерона увеличивался на 130% по сравнению с группой интактных животных.

Введение перед стрессом Д-ала²лей⁵арг⁶-экефалина сопровождалось развитием слабовыраженных проявлений стресс-реакции (таблица), масса же тимуса и надпочечников при этом достоверно не отличалась от их значений в группе интактных животных. Сравнение суммы баллов при интегральной оценке стрессированности организма в группе стресс-контроля и в группе животных, получавших этот препарат-аналог по действию, показало различие в сумме баллов, равное 4. На способность данного препарата тормозить развитие стресс-реакции указывало и отсутствие повышения концентрации иммунореактивного кортикостерона в плазме крови стрессированных крыс, получавших предварительно Д-ала²лей⁵арг⁶-энкефалин.

Предварительное введение препарата ВМ-1-90 в дозах 20, 40 и 80 мг/кг способствовало снижению выраженности морфологических проявлений стресса и нарастанию концентрации кортикостерона в плазме крови. Так, препарат ВМ-1-90 в дозе 20 мг/кг полностью нивелировал характерную для стресса инволюцию тимуса и селезенки, масса которых практически не отличалась от соответствующих значений в группе интактных животных. Несмотря на увеличение массы надпочечников (таблица) и наличие изъявлений слизистой желудка, сумма баллов интегральной оценки стрессированности организма при этом была равна 6, что значительно ниже соответствующего значения в группе стресс-контроля. Уровень иммунореактивного кортикостерона в плазме крови при этом оставался на исходных шифрах. Инъекция перед стрессированием исследуемого препарата в дозе 40 мг/кг оказывала аналогичный эффект: сумма баллов интегральной оценки стрессированности также 6, а уровень кортикостерона в крови достоверно не отличался от значений в группе интактного контроля. Препарат ВМ-1-90 в дозе 80 мг/кг, введенный перед 22-часовым стрессированием, снижал морфологические и гормональные проявления стресс-реакции. Так, количество язв в слизистой оболочке желудка было достоверно ниже, чем в стресс-контроле. Уровень иммунореактивного кортикостерона при этом хотя и был выше, чем у интактных животных, но оставался более низким, чем в контрольной группе стресса. Наличие антистрессорного эффекта данного препарата в дозе мг/кг подтверждалось суммарной оценкой стрессированности 14 баллов, что на 2 балла ниже соответствующего контроля.

Таким образом, наиболее эффективной в антистрессорном отношении является доза препарата 20 мг/кг, при введении которой масса внутренних органов при стрессировании не изменялась по сравнению с показателями в группе интактных крыс, а количество язв было значительно меньшим, чем в стресс-контроле (таблица).

Из приведенного следует, что заявляемый препарат, превосходящий по антистрессорной активности Д-ала²лей⁵арг⁶-энкефалин, может найти клиническое применение при лечении и профилактике состояний, связанных с психо-эмоциональным напряжением организма.

Таким образом, учитывая активность препарата, его доступность и др. можно считать заявляемое соединение перспективным для создания лекарственного средства для лечения и профилактики стрессорных состояний организма.

Использование: в качестве биологически активного вещества, обладающего антистрессорной активностью. Сущность изобретения: продукт - 1-(гидроксиметил)-2-гидрокси-2-(4-нитрофенил) этиламмоний 2-формилфеноксиацетат, _→ CHOH(4-NO₂C₆H₄), БФ C₁₈H₂₀N₂O₈ , выход 80-81% т. пл. 200-202°С. Реагент 1: 2-формилфеноксиуксусная кислота. Реагент 2: 1,3-дигидрокси-1-(4-нитрофенил)пропил-2-амин. Условия реакции: в среде низшего спирта при 60-80°С и соотношении реагентов 1:1 в течение 10-15 мин. 1 табл.

1-(ГИДРОКСИМЕТИЛ)-2-ГИДРОКСИ-2-(4-НИТРОФЕНИЛ)-ЭТИЛАММОНИЙ 2-ФОРМИЛФЕНОКСИАЦЕТАТ, ОБЛАДАЮЩИЙ АНТИСТРЕССОРНОЙ АКТИВНОСТЬЮ.

1-(Гидроксиметил)-2-гидрокси-2-(4-нитрофенил)этиламмоний 2-формилфеноксиацетат формулы
2-OCHC₆Н₄OCH₂COO^- · ⁺NH₃CH(CH₂OH)CHOH(4-NO₂C₆H₄),
обладающий антистрессорной активностью.