СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ДЛЯ НАПРАВЛЕННОЙ ДОСТАВКИ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ ЛЕКАРСТВ В РАКОВУЮ КЛЕТКУ Российский патент 1995 года по МПК A61K38/00 A61K47/00 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для доставки противоопухолевых лекарств в раковую клетку.

Известно, что одной из важных функций альфа-фетопротеина в эмбрионе млекопитающих является транспорт и связывание женских половых гормонов; при этом эстрон обладает наибольшей аффинностью к альфа-фетопротеину по сравнению с другими натуральными эстрогенами. Кроме этого, обнаружено, что альфа-фетопротеин способен селективно проникать в опухолевые клетки по механизму рецепторного эндоцитоза. На основе этого свойства, а также способности альфа-фетопротеина транспортировать полиненасыщенные жирные кислоты, доктором Дейчем из Мадисоновского университета (США) разработан способ противоопухолевой химиотерапии некоторых видов злокачественных новообразований человека. В качестве транспортного белка в этом способе использовался альфа-фетопротеин, секретируемый клетками первичного рака печени.

На этом фоне больному вводили конъюгат арахидоновая кислота-доксорубицин. Полный курс составлял 10 внутривенных введений конъюгата. При попадании в опухолевую клетку доксорубицин в составе конъюгата с арахидоновой кислотой активировался НАДФН (НАДН)-зависимыми оксидоредуктазами с образованием высокореакционноспособных продуктов, выступающих прямыми алкиляторами и/или инициаторами реакций перекисного окисления липидов. Эти процессы обусловливали цитостатический эффект.

Цель изобретения - создание универсального способа доставки противоопухолевых лекарств в раковую клетку.

Поставленная цель достигается тем, что в качестве фетального биологического материала используют абортивный материал. Измельчают его с сохранением структуры клеток. Полученную массу подвергают экстракции бутиловым спиртом. Экстракт диализуют против 0,05 М раствора NaCl и концентрируют экстракт до содержания альфа-фетопротеина 100 мкг/мл, после чего стерилизуют. Проводят химическую конъюгацию против опухолевого лекарства - доксорубицина с лигандом - эстроном. Причем доксорубицин и эстрон конъюгируют в эквимолярном соотношении. Затем проводят прединкубацию путем смешивания обработанного экстракта с 20 мг конъюгата за 1-2 ч до внутривенного введения. Содержание альфа-фетопротеина в экстракте определяют с помощью иммуноферментного анализа.

Способ поясняется на следующем примере.

П р и м е р. Абортивный материал человека, содержащий альфа-фетопротеин, собирают на 10-12 неделе беременности с соблюдением требований антисептики. Собранный материал тестировали на присутствие HBSAg и HIV. После этого абортивный материал измельчали с сохранением структуры клеток, полученную массу экстрагировали бутиловым спиртом в отношении 1:50 в течение 24 ч при температуре + 4^оС. Полученный экстракт диализовали против 0,05 М раствора хлорида натрия и концентрировали на концентраторе с использованием мембран РМ10 (концентратор Amicon, США) до концентрации альфа-фетопротеина 100 мкг/мл. Полученный концентрат стерилизовали на мембранах 0,22 и 0,17 мкм, помещали в стерильные флаконы и хранили при - 20^оС вплоть до использования. Доксорубицин и эстрон 3-хемисукцинат использовали в эквимолярном соотношении. Полученный конъюгат стерилизовали и хранили при - 20^оС вплоть до использования. Непосредственно за 1-2 ч до внутривенного введения концентрат и конъюгат смешивали. Для одной инъекции использовали 100 мл концентрата и 20 мг конъюгата. Содержание альфа-фетопротеина в концентрате определяли методом иммуноферментного анализа (IFA) с использованием наборов фирмы "АС". Общий курс составлял обычно 6 инъекций (3 раза через день с интервалом в одну неделю).

Предлагаемый способ предусматривает использование при химиотерапии специальным образом обработанного альфа-фетопротеина в составе экстракта из абортивного материала человека. Этот специальным образом обработанный белок имеет высокую аффинность к женскому половому гормону эстрону. Кроме этого, пациенту вводят в отличие от описанного способа примерно в 10 раз больше транспортного белка по сравнению с тем, что присутствует в крови больного первичным раком печени (< 200 нг/мл). Благодаря использованию экзогенного альфа-фетопротеина химиотерапевтическое воздействие строго контролируется по количеству вводимого альфа-фетопротеина. Возможность предварительного смешивания концентрата альфа-фетопротеина с конъюгатом позволяет получать более высокие стационарные концентрации тройного комплекса альфа-фетопротеин-эстрон-доксорубицин. Использование альфа-фетопротеина в качестве транспортного белка позволяет существенно пролонгировать действие доксорубицина из-за снижения скорости его выведения из организма больного. Универсальность предложенного метода позволяет использовать его при лечении практически всех видов злокачественных новообразований человека и применять другие противоопухолевые лекарства. Кроме этого, метод может найти применение при лечении таких заболеваний, как синдром приобретенного иммунодефицита и некоторых заболеваний центральной нервной системы, таких, например, как болезнь Паркинсона.

Использование: медицина, для доставки противоопухолевых лекарств в раковую клетку. Сущность изобретения: абортивный материал человека измельчают с сохранением структуры клеток. Полученную массу подвергают экстракции бутиловым спиртом. Экстракт диализуют против 0,05 М раствора NaCi, концентрируют до содержания альфа-фетопротеина 100 мкг/мл и стерилизуют. Затем подвергают конъюгации противоопухолевого лекарства - доксорубицин с лигандом - эстроном в эквимолярном соотношении. Проводят прединкудацию обработанного биологического материала с конъюгатом. 4 з.п. ф-лы.

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ДЛЯ НАПРАВЛЕННОЙ ДОСТАВКИ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ ЛЕКАРСТВ В РАКОВУЮ КЛЕТКУ путем обработки фетального биологического материала человека, содержащего альфа-фетопротеин, химической конъюгации противоопухолевого лекарства с лигандом и прединкубации обработанного биологического материала с конъюгатом, отличающийся тем, что в качестве фетального биологического материала человека используют абортивный материал, который измельчают с сохранением структуры клеток, полученную массу подвергают экстракции бутиловым спиртом, экстракт диализуют против 0,05 М раствора NaCl и концентрируют экстракт до содержания альфа-фетопротеина 100 мкг/мл, после чего стериализуют, причем прединкубацию проводят путем смешивания обработанного экстракта с 20 мг конъюгата за 1-2 ч до внутривенного введения. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве противоопухолевого лекарства используют доксорубицин (адриамицин). 3. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве лиганда используют эстрон. 4. Способ по п.1, отличающийся тем, что содержание альфа-фетопротеина в экстракте определяют с помощью иммуноферментного анализа. 5. Способ по п.1, отличающийся тем, что доксорубицин и эстрон конъюгируют в эквимолярном соотношении.