СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ДЛЯ НАПРАВЛЕННОЙ ДОСТАВКИ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ ЛЕКАРСТВ В РАКОВУЮ КЛЕТКУ Российский патент 1995 года по МПК A61K38/00 A61K47/00 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для доставки противоопухолевых лекарств в раковую клетку.

Известно, что одной из важных функций альфа-фетопротеина в эмбрионе млекопитающих является транспорт жирных кислот; при этом полиненасыщенные жирные кислоты, в том числе арахидоновая, обладают наибольшей аффинностью к альфа-фетопротеину. Кроме этого, обнаружено, что альфа-фетопротеин способ селективно проникать в опухолевые клетки по механизму рецепторного эндоцитоза. На основе этого свойства, а также способности альфа-фетопротеина транспортировать полиненасыщенные жирные кислоты, доктором Дейчем из Мадисоновского университета (США) разработан способ противоопухолевой химиотерапии некоторых видов злокачественных новообразований человека. В качестве транспортного белка в этом способе использовался альфа-фетопротеин, секретируемый клетками первичного рака печени. На этом фоне больному вводили конъюгат арахидоновая кислота - доксорубицин. Полный курс состоял из 10 внутривенных введений конъюгата. При попадании в опухолевую клетку доксорубицин в составе конъюгата с арахидоновой кислотой активировался НАДФН (НАДН)-зависимыми оксидоредуктазами с образованием высокореакционноспособных продуктов, выступающих прямыми алкиляторами и/или инициаторами реакций перекисного окисления липидов. Эти процессы обусловливали цитостатический эффект.

Цель изобретения - создание универсального способа доставки противоопухолевых лекарств в раковую клетку.

Поставленная цель достигается тем, что в качестве фетального биологического материала человека используют сыворотку из пуповинной крови человека. Подвергают ее фильтрации, центрифугированию и стерилизации. Проводят химическую конъюгацию противоопухолевого лекарства - доксорубицина, с арахидоновой кислотой. Прединкубацию проводят путем смешивания обработанной сыворотки с содержанием альфа-фетопротеина до 8 мг с 20 мг конъюгата за 1-2 ч до внутривенного введения. Причем доксорубицин и арахидоновую кислоту конъюгируют в эквимолярном соотношении. А содержание альфа-фетопротеина определяют с помощью иммуноферментного анализа.

П р и м е р. Пуповинную кровь с содержанием альфа-фетопротеина 50-100 мкг/мл собирали при родах с соблюдением требований антисептики. Собранную кровь тестировали на присутствие HBSAg и HIV. После этого кровь отстаивали при + 4^оС в течение 8 ч, центрифугировали при 10000g в течение 15 мин, надосадочную жидкость, представляющую собой сыворотку, отбирали, фильтровали через тройной слой марли и стерилизовали через фильтры 0,22 и 0,17 мкм (концентратор Amicon, США). Полученную таким образом сыворотку помещали в стерильные герметичные флаконы и хранили при - 20^оС вплоть до использования. Доксорубицин и арахидоновую кислоту использовали в эквимолярном соотношении. Полученный конъюгат стерилизовали и хранили при - 20^оС вплоть до использования. Непосредственно за 1-2 ч до внутривенного введения сыворотку и конъюгат смешивали. Для одной инъекции использовали объем сыворотки, эквивалентный 8 мг альфа-фетопротеина, и 20 мг конъюгата. Содержание альфа-фетопротеина в сыворотке определяли методом иммуноферментного анализа (IFA) с использованием наборов фирмы "АС". Общий курс состоял обычно из 6 инъекций (3 раза через день с интервалом в одну неделю).

Предлагаемый способ предусматривает использование при химиотерапии интактного альфа-фетопротеина из фетального источника. Этот белок имеет по крайней мере в 8 раз больше мест связывания для арахидоновой кислоты, чем альфа-фетопротеин, секретируемый опухолевыми клетками. Кроме того, в отличие от описанного способа пациенту внутривенно вводят примерно в 10 раз больше транспортного белка по сравнению с тем, что присутствует в крови больного первичным раком печени (< 200 нг/мл). Благодаря использованию экзогенного альфа-фетопротеина химиотерапевтическое воздействие строго контролируется по количеству вводимого альфа-фетопротеина. Возможность предварительного смешивания сыворотки и конъюгата позволяет получить более высокие стационарные концентрации тройного комплекса альфа-фетопротеин-арахидоновая кислота-доксорубицин. Общая токсичность конъюгата арахидоновая кислота-доксорубицин значительно снижена по сравнению с самим препаратом доксорубицина. Использование альфа-фетопротеина в качестве транспортного белка позволяет существенно пролонгировать действие доксорубицина из-за снижения скорости его выведения из организма больного. Универсальность предложенного метода позволяет использовать его при лечении практически всех видов злокачественных новообразований человека и применять другие противоопухолевые лекарства.

Использование: для доставки противоопухолевых лекарств в раковую клетку. Сущность изобретения: сыворотку из пуповинной крови человека подвергают фильтрации, центрифугированию и стерилизации. Подвергают химической конъюгации в эквимолярном соотношении противоопухолевое лекарство - доксорубицин с арахидоновой кислотой, затем проводят прединкубацию смеси обработанной сыворотки, содержащей альфа-фетопротеина до 8 мг с 20 мг конъюгата. 3 з.п. ф-лы.

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ДЛЯ НАПРАВЛЕННОЙ ДОСТАВКИ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ ЛЕКАРСТВ В РАКОВУЮ КЛЕТКУ путем обработки фетального биологического материала человека, содержащего альфа-фетопротеин, химической конъюгации противоопухолевого лекарства с арахидоновой кислотой и прединкубации обработанного биологического материала с конъюгатом, отличающийся тем, что в качестве фетального биологического материала человека используют сыворотку из пуповинной крови человека, подвергают ее фильтрации, центрифугированию и стерилизации, прединкубацию проводят путем смешивания обработанной сыворотки с содержанием альфа-фетопротеина до 8 мг с 20 кг конъюгата за 1-2 ч до внутривенного введения. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве противоопухолевого лекарства используют доксорубицин /адриамицин/. 3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что доксорубицин и арахидоновую кислоту конъюгируют в эквимолярном соотношении. 4. Способ по п.1, отличающийся тем, что содержание альфа-фетопротеина определяют с помощью иммуноферментного анализа.